农业部1486号公告-8-2010 饲料中硝基呋喃类药物的测定.高效液相色谱法.pdf

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1、ICS 65.120 B 46 中华人民共和国国家标准农业部1486号公告-8-2010饲料中硝基映喃类药物的测定高效液相色谱法Determination of nitrofurans in feeds一High performance liquid chromatography 2010-11-16发布2010-11-16实施/8俨 i( ), Clhtzu/ 中华人民共和国农业部发布前言本标准遵照GBjT1. 12009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国农业部畜牧业司提:1。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会CSACjTC76)归口。本标准起草单位:中国农业大学动物医学院。农业部14

2、86号公告-8-2010本标准起草人:沈建忠、张素霞、程林丽、江海洋、李建成、吴聪明、刘金凤。农业部1486号公告-8-2010饲料中硝基映喃类药物的测定高效液相色谱法1 范围本标准规定了饲料中4种硝基映喃类药物含量的制样和高效液相色谱检测方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中映喃西林、峡喃妥因、映喃它嗣和映喃瞠隅单个或多个药物含量的测定。本标准的检测限:饲料中映喃西林、峡喃妥困、峡喃它酣和吱喃瞠嗣均为0.3mg/kg。本标准的定量限:饲料中映喃西林、峡喃妥国、映喃它嗣和映喃瞠嗣均为1.0 mg/kg。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文

3、件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规则和试验方法GB/T 14699.1饲料采样GB/T 20195动物饲料试样的制备3 方法原理用乙睛提取试样中的硝基映喃类药物，浓缩近干，用2%甲酸榕解，经混合型阳离子交换柱净化。高效液相色谱法测定，外标法定量。4 试剂和材料除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T6682中规定的二级水。4. 1 乙睛:色谱纯。4.2 甲醇:色谱纯。4. 3 甲酸:色谱纯。4. 4 氨水。4.5 乙酸镀:色谱纯。4.6 混合型阳离子交换柱:MCX小柱或相当者，

4、规格为60mg/3mL。4. 7 微孔滤膜:规格为O.2m。4. 8 硝基映喃类药物标准品:峡喃西林(Nitrofurazonc):纯度二三99%;映喃妥国(Nitrofuantion):纯度二三99%;吱喃它嗣(Furaltadonc):纯度二三99%;峡喃瞠酣(Furazolidonc):纯度二三99%。4.9 2%甲酸:量取2mL甲酸和98mL水，混匀。4.10 1%氨水榕液:量取1mL氨水和99mL水，混匀。4. 11 固相萃取柱洗脱液:量取1%氨水榕液30mL和甲醇70mL，混匀。4. 12 0.1 %乙酸锻溶液:称取1.0g乙酸钱，用水稀释定容至1L。4. 13 硝基峡喃类药物标准

5、贮备液(200g/mU:称取4种硝基峡喃类药物(4.8)各0.02g(精确到0.000 1 g)于4个100mL容量瓶中，加乙睛定容至刻度，超声榕解。40C可以保存6个月。农业部1486号公告-8-20104.14 硝基映喃类药物混合标准贮备液(40g/mU:精密量取200g/mL的4种硝基映喃类药物标准贮备液(4.13)各20mL于100mL容量瓶中，用乙睛定容至刻度。40C可以保存6个月。4. 15 混合标准E作液:分别移取适娃40周/mL混合标准贮备液(4.14)于5mL容量瓶中，50oC氮气吹干，用2%甲酸(4.的定容至刻度，配制成O.05g/mL、O.2g/mL、O.5g/mL、1g

6、/mL、2g/mL、5g/mL和20g/mL的系列标准工作液。40C可以保存l周。5 仪器和设备5.1 实验室常用仪器、设备。5. 2 高效液相色谱仪，配二极管阵列检测器或紫外检测器。5. 3 天平:感茧0.01g。5. 4 分析天平:感量0.0001g。5. 5 涡旋混合器。5. 6 离心机。5. 7 旋转蒸发仪。5. 8 固相萃取装置。6 采样与试样制备按GB/T14699. 1的规定采集样品后，按GB/T20195的规定取1kg样品，四分法缩减取约200g , 经粉碎，全部过200!=I孔筛，混匀装入磨口瓶中备用。7 分析步骤7. 1 提取称取配合饲料或浓缩饲料(2:1:0.02)g或预

7、混合饲料。+0.01)gJ于100mL离心管中，加50mL 乙脯，涡动1min，650C超声提取15min，每隔5min手摇一次。3800r/min离心15min。移取上清液5mL于100mL鸡，心瓶中，50oC旋转蒸发至干。7. 2 净化往鸡心瓶中加2%rp酸(4.12月mL，超声2min，接着涡动1min使其充分榕解。将i昆合型阳离子交换柱安装于固相萃取装置上，依次用甲醇3mL、2%甲酸济液3mL(4. 12)活化。将样品液通过固相萃取柱，用水3mL淋洗，抽真空1mino 3 mL固相萃取柱洗脱液(4.11)洗脱。上样梅液、淋洗液和洗脱液的流速均控制在不超过1mL/mino 500C氮气吹

8、干，加2%甲酸1mL榕解残余物，过0.2m滤膜，供高效液相色谱测定。7. 3 测定7. 3. 1 液相色谱条件色谱柱:Incrtsil ODS -3色谱柱，长250mm，内径4.6mm，粒径5m，或相当者。流动相:乙脯十0.05%乙酸镜，梯度洗脱;梯度洗脱条件见表1。表1液相色谱梯度洗脱条件时间，mln0.05%乙酸馁，%乙脯，%。85 15 15 65 35 17 85 15 20 85 15 2 农业部1486号公告一8-2010流速:1. 0 mL/min。检测波长:365nm。柱温:室温。进样量:20L。7. 3. 2 液相色谱测定分别取适量试样榕液和相应浓度的标准工作被，作单点或多点

9、校准，以色谱峰面积积分值定量。标准工作液及试样液中硝基吱喃类药物的响应值均应在仪器检测的线性泡罔之内，试样液进样测定过程中应参插标准工作液，以便准确定量。试样液浓度不在线性范围内时将样品稀释后进样。标准品液相色谱图参见附录A。8 结果计算饲料中硝基映喃类药物的含量X以质量分数(mg/kg)表示，按式(1)计算:Ci XVXn Xi二一一一(1)m 式中:Ci一一上机试样液中对应的硝基吠喃类药物的浓度，单位为微克每毫升(g/mU;V二一上机试样液总体积，单位为毫升(mU;n一一稀释倍数;m 试样质量，单位为克(g)。测定结果用平行测定后的算术平均值表示，保留气位有效数字。9 重复性在重复性条件下完成的两个平行测定结果的相对偏差不大于15%。3 农业部1486号公告-8一2010附录A(资料性附录)标准溶渣色谱图0.015 2 3 4 nu l nu nu 【】飞，、JHU OU OU AU nu nu -nv .，.喉，、Wl.忡忡.J.J巾-，-，寸-1-11 I I II I I II I I II II II II II II丁-1-寸一叮2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 自lln图A.12.g/mL硝基映喃类药物标准溶液色谱图(11吠喃两林;2峡喃妥网;3吠喃嗖剧;41决喃它剧)4