农业部1163号公告-3-2009 动物性食品中双甲脒残留标示物检测.气相色谱法.pdf

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1、ICS 67120B 45中华 人民共和 国国家标准农业部1163号公告一32009动物性食品中双甲脒残留标示物检测气相色谱法Gas chromatographic method for the determination of markerresidues of Amitraz in edible tissues2009-0206发布 2009-0301实施中华人民共和国农业部发布刖 置农业部1 163号公告一32009本标准的附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。本标准起草单位：华中农业大学。本标准主要起草人：袁宗辉、余欢、陶燕飞、王玉莲、陈冬梅、黄玲利、彭大鹏、戴梦

2、红、刘振利。1范围农业部1 163号公告-3-2009动物性食品中双甲脒残留标示物检测气相色谱法本标准规定了动物可食性组织中双甲脒残留标示物检测的气相色谱测定方法。本标准适用于猪、牛、羊的脂肪、肝脏、肾脏中双甲脒及其代谢物2，4二甲基苯胺残留量的检测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法3制样3 1样品的制备猪、牛、羊的

3、脂肪、肝脏、肾脏组织，去除筋膜，绞碎，混匀。3 2样品的保存一18以下贮存。4测定方法4 1方法提要试样中双甲脒(及代谢物)水解成2，4二甲基苯胺，正己烷萃取，七氟丁酸酐衍生。气相色谱仪电子捕获检测器检测，外标法定量。42试剂和材料以下所用试剂，除特别注明者外均为分析纯；水为符合GUT 6682规定的一级水。421双甲脒对照品：含量995。42 2 2，4一二甲基苯胺对照品；含量993。4 2 3氢氧化钠：优级纯。424碳酸氢钠：优级纯。425无水硫酸钠：优级纯。426七氟丁酸酐：色谱纯。4 2 7正己烷：色谱纯。428 1 molL的氢氧化钠溶液称取氢氧化钠40 g，用水溶解并稀释到1 00

4、0 mL，配成1 molL的氢氧化钠溶液。429碱性水溶液取蒸馏水1 000 mL，用1 toolI，的氢氧化钠溶液调pH至90。4 2 10饱和碳酸氢钠溶液的配制称取碳酸氢钠1035 g，用水溶解并稀释到1 000 mL，配成饱和碳酸氢钠溶液。农业部1 163号公告一3200942 11双甲脒和2。4一二甲基苯胺标准储备液精确称取双甲脒和2，4一二甲基苯胺对照品各100 mg，用正己烷分别溶解，并定容至10 mL，2C8保存。4212混合标准工作液取双甲脒和2，4二甲基苯胺标准储备液适量，用正己烷稀释，配制成浓度分别为10 pL、20腿L、50肛L、100,gL、200膳L、400膳I。、8

5、00pL的混合标准工作液，28避光保存，有效期1词。43仪器和设备4 31气相色谱仪：配有电子捕获检测器。432分析天平：感量0000 01 g，感量001 g。4 3 3离心机。4 34旋涡混合器。435组织匀浆机。436恒温干燥箱。44测定步骤441试料的制备试料的制备包括：取均质后的供试样品，作为供试试料；取均质后的空白样品，作为空白试料。44 2提取和水解称取试料(5士o05)g置于聚丙烯离心管中，加入碱性水溶液10mL，漩涡混匀，于4 200 rmin离心10 min，转移上清液至聚丙烯离心管中，重复提取一次，合并2次提取液。70恒温干燥箱中静置水解50mln。冷却后向提取液中加正己

6、烷50mL，漩涡混匀，静置5min，4 200 rmin离心10min，将上层正己烷转移至另一聚丙烯离心管中，再加正己烷50 mL重复萃取一次，合并2次正己烷提取液。443衍生和净化取上述正己烷提取液20 mL，加人七氟丁酸酐10“L，混匀后于60恒温干燥箱中衍生90 rain，每隔30mln取出超声5rain。衍生后静置10mln，待冷却至室温后加入饱和碳酸氢钠溶液20mL，混合1min，中和多余的七氟丁酸酐，取有机相层并用无水硫酸钠20 g除水，将干燥后的有机相转移至进样瓶，供气相色谱检测。4 44标准曲线的绘制准确量取混合标准储备液适量，用在正己烷稀释成浓度为10 pgL、20肛gL、5

7、0 pgL、100 pgL、200肛gI，、400 pgL、800肛gL的混合标准工作液，经水解、衍生后供气相色谱分析，每个浓度进样3针，用平均峰面积与相应的标准溶液浓度作标准曲线，并计算回归方程及相关系数。445测定4451参考色谱条件色谱柱：Rtx l毛细管柱，柱长300 m，内径025 mm柱温：程序升温见表1；表1程序升温表升温速率，mln 初始温度， 停留时间，min50 o， 220 5柱流速：1 mLmin，分析时间：27 rain；进样口温度：250；进样量：l ML；载气：氮气(纯度99999)，30 mLmin；分流模式：分流，分流比50：1；检测器温度：300。4 4 5

8、 2色谱测定取适量试样溶液和相应的2，4一二甲基苯胺标准工作液，经过水解、衍生后进气相色谱测定，作单点校准，以色谱峰的面积定量。标准工作液水解的衍生产物及试料中药物水解的衍生产物响应值均应在仪器检测的线性范围内。4 4 6空白试验除不加试样外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。4 5结果计算与表述试料中双甲脒的残留量按式(1)计算： x一丛紫式中：X试料中双甲脒残留量，单位为微克每千克(tLgkg)；A试样溶液中2，4一二甲基苯七氟丁酰胺的峰面积；As标准工作液中2，4一二甲基苯七氟丁酰胺的峰面积；Cs标准工作液中2，4一二甲基苯胺的浓度，单位为微克每升(t-gL)v萃取用正己烷的体积，单位

9、为毫升(mL)；M样品质量，单位为克(g)；1212，4一二甲基苯胺计算成双甲脒的校正系数。5检验方法灵敏度、准确度、精密度5 1灵敏度本方法在猪、牛、羊的脂肪、肝脏和肾脏组织中的检测限均为10 t,gkg，定量限均为20 pgkg。5，2准确度本方法在组织中添加浓度为20 pgkglOO pgkg时的回收率为70110，添加浓度为100gkg800 ugkg时的回收率为80110。53精密度本方法在组织中添加浓度为20 pgkg100 pgkg的批内、批问变异系数CV17；添加浓度为100肛gkg800 pgkg的批内、批间变异系数CVll。农业部1 163号公告一32009z1400001

10、200001000008000060 0004000020 0000附录A(资料性附录)色 谱 图2 4 6 8 10 12 14 16 18 min图A1双甲脒和2，4二甲苯基胺总浓度为100 pgL的标准溶液衍生物的色潜图Hz160000140000120 00010000080000600(04000020 0000池1400001200001000008000060 0004000020 0000_kk。3一一一 一-一j土3。k一bL。L。图A 2猪脂肪样品空白色谱图2 4 6 8 t0 12 14 16图A 3猪脂肪中添加药物总浓度为200 at,kg的色谱图Hz120000100

11、 00080 G0060 COO40 000200000农业部1 163号公告32009卜L Il I 小JJj【。JL-JL 、图A 4羊脂肪样品空白色谱图N。h I I J。 。kL图A5羊脂肪中添加药物总浓度为200 gtg,kg的色谱图4图A6猪肝脏样品空白色谱图加舳加农业部1 163号公告一32009Hz3000002500002册000150000100000500000图A7猪肝脏中添加药物总浓度为200峙kg的色谱图600000500000400000300 0002000001000000图A 8羊肝脏样品空白色谱图图A 9羊肝脏中添加药物总浓度为200 I噜kg的色谱图加阳蚰