农业部1077号公告-6-2008 水产品中玉米赤霉醇类残留量的测定.液相色谱-串联质谱法.pdf

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1、ICS 67050B 50中华人民共和国国家标准农业部1077号公告_62008水产品中玉米赤霉醇类残留量的测定液相色谱一串联质谱法Determination of zeranols residues in aquatic productsby LC-MSMS method20080811发布 2008-0811实施中华人民共和国农业部发布刖 瞢农业部1077号公告一62008本标准的附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提f；。本标准由全国水产标准化技术委员会水产品加丁分技术委员会归口。本标准起草单位：农业部渔业环境及水产品质量监督检验测试中心(哈尔滨)、哈尔滨市食品T：业研究所。

2、本标准主要起草人；战培荣、孙言春、杨桂玲、陈忠祥、杨旭、覃东立、孙娜、卢玲、工海涛、赵彩霞、陆九韶。1范围农业部1077号公告一62008水产品中玉米赤霉醇类残留量的测定液相色谱一串联质谱法本标准规定了水产品中玉米赤霉醇类残留量液相色谱一串联质谱测定方法。本标准适用于水产品中a一玉米赤霉醇、p玉米赤霉醇、n一玉米赤霉烯醇、口一玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮、玉米赤霉烯酮单个或多个混合物残留量的液相色谱串联质谱检测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方

3、研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法SOT 3016水产品抽样方法3原理用乙腈提取试样中的六种玉米赤霉醇类，用正己烷脱脂，经过氨基固相萃取柱净化后，用液相色谱一串联质谱仪测定。色谱保留时间和质谱特征离子共同定性，外标法定量。4试剂以下所用试剂，除特殊注明外均为分析纯试剂，试验用水符合GBT 6682一级水要求。4 1 a一玉米赤霉醇、p一玉米赤霉醇、a一玉米赤霉烯醇、p一玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮、玉米赤霉烯酮标准品，纯度均大于97。4 2乙腈：色谱纯。43正己烷：色谱纯。44乙酸乙酯：色谱纯。4 5甲醇：

4、色谱纯。46无水硫酸钠：640。c烘干4 h，干燥保存。47正己烷乙酸乙酯(60+40)：准确量取正己烷60 mI。和乙酸乙酯40 mL，混匀。4 8正己烷一乙酸乙酯(20+80)；准确量取正己烷20 mL和乙酸乙酯80 mI。，混匀。49乙腈溶液(20)：取20mI乙腈，加水溶解，定容至100mL。410乙腈饱和的正己烷溶液：乙腈100mL中加入15mL正己烷，混匀，备用。411标准储备液(100 pgmI。)：精确称取适量的a一玉米赤霉醇、p一玉米赤霉醇、a一玉米赤霉烯醇、p一玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮、玉米赤霉烯酮，用甲醇分别配成浓度为100 pgmL的标准储备液， 18(2冰箱中保存，贮

5、存期1年。412混合标准储备液(100”gmL)：分别准确吸取10mI。的d一玉米赤霉醇、p一玉米赤霉醇、a玉米赤霉烯醇、D一玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮、玉米赤霉烯酮标准贮备液至100mI。容量瓶中，用甲醇稀释定容，一18冰箱中保存，贮存期6个月。1农业部1077号公告一620084 13混合标准T：作溶液：准确吸取混合标准储备液。用乙腈溶液(49)稀释成浓度为050 ngmI10000 ngmL系列标准工作液，4。C暂时存放。5仪器和设备5 1 液相色谱串联质谱联用仪(配电喷雾离子源)。52涡旋混合器。53离心机：4 000 rrain。54分析天平：感量为001 g。55分析天平：感量为00

6、00 01 g。5 6组织匀浆机。5 7旋转蒸发仪。5 8固相萃取装置。59氮吹仪。510鸡心瓶：100 mI。511具塞聚丙烯离心管：50 mL。5 12具塞刻度玻璃管；10mL。5 13氨基固相萃取柱：规格为500 mg，3 mL。6测定步骤6 1试样预处理按soT 3016的规定执行。62提取净化称取(500_+002)g试样于50 mL离心管中，加入3 g无水硫酸钠(46)，涡动20 s，加乙腈(42)15mL，充分均质混匀，4 000 rmin离心10min，取上清液于另一离心管中。另取一50mL离心管，加入10mI。乙腈(42)，清洗刀头。清洗液用来溶解上一步的残余物，重复提取一次

7、，合并两次提取液。提取液中加入乙腈饱和的正己烷溶液(410)15 mL，充分震荡，3 000 rrain离心5min，弃上层正己烷。再加乙腈饱和的正己烷溶液(410)10 mL重复脱脂一次。下层转至100 mL鸡心瓶中，50。C旋蒸至近干，加乙酸乙酯5mL，涡动1rain，静置30 S，上清液转移至50mL离心管。鸡心瓶中加正己烷lOmL，涡动30 S，静置30 s，上清液转移至同一个离心管。再用正己烷10 mL洗涤鸡心瓶一次，合并三次残余物溶解液，备用。氨基固相萃取柱依次用乙酸乙酯和正己烷各5 mL活化，取备用液全部过柱(流速不超过1 mLrain)，再依次用正己烷、正己烷一乙酸乙酯(47)

8、各5 mL淋洗。依次用正己烷一乙酸乙酯(48)和乙酸乙酯各4 mL洗脱，合并两次洗脱液，50氮气吹干。残余物用乙腈溶液(49)10mI。溶解，涡动混匀，过02“m滤膜，供液相色谱串联质谱仪测定。63空白添加标准曲线的制备分别精确取6种玉米赤霉醇类药物混合标准储备液适量，添加到500 g空白试样中，制得浓度在000 pgkglOOoo pgkg范围内的57个不同添加浓度的试样，按62步骤操作，供液相色谱串联质谱仪测定。6 4测定6 4 1色谱条件a)色谱柱：BEH C8(2150 mm，粒径17“m)；或相当者。2b)流动相：A相：水；B相：乙腈。c)流速：03 mLrain。d)柱温：35。e

9、)进样体积：10“I。f) 流动相梯度洗脱程序见袁1。裹1 流动相梯度洗脱程序农业部1077号公告一62008时间，rain A丰H， B丰甘，0 85 153 l 5 8535 10 904 10 9043 85 1555 85 15质谱参考条件离子源：电喷雾离子源。扫描方式：负离子扫描。检测方式：多反应监测(MRM)。电离电压：26 kV。离子源温度：110。雾化温度：380。雾化气流速：600 Ih。药物保留时间、定性离子对、定量离子对、锥孔电压和碰撞能量见表2。表2玉米赤霉醇类药物的保留时间、定性离子对、定量离子对、锥孔电压和碰撞能量保留时间 定性离子对 定量离子对 锥孔电压 碰撞能量

10、药物名称V ev321277 40 20a一乐米赤霉醇 215 32127732130340 2332l277 40 208一玉米赤霉醇 199 321277321：303 40 23319：275 40 20a玉米赤霉烯醇 2 20 319275319Z30l 40 22319Z75 40 208一玉米赤霉烯醇202 319275319301 40 22319二2752 40 20玉米赤霉酮2d8 319275319：205 40 20317273 40 18毛米赤霉烯酮 2 5l 31727331717540 186 4 3定性依据在同样的测试条件下，阳性样品保留时间与标准物质保留时间之间

11、的相对标准偏差应在士5以内，且监测到的离子的相对丰度，用与最强离子基峰的强度百分比表示，应当与浓度相当的校正标准相对丰度一致，校正标准可以是标准品溶液，也可以是添加了标准物质的样品。基峰与次强碎片离子相对丰度比符合表3的要求。空白添加标准溶液的质量色谱图和玉米赤霉醇类药物子离子的质谱图见附录A中的图A1图A7。32D0曲oD曲4p口农业部1 077号公告一62008表3基峰与次强碎片离子丰度比的要求相对丰度， 允许偏差，50 士2020-50 土251020 土3010 士50644定量测定按641和642设定仪器条件，待仪器稳定后，取样品制备液和空白添加混合标准工作溶液进行测定，作单点或多点

12、校准，外标法计算样品中药物的残留量，定量离子采用丰度最大的二级特征离子碎片。样品溶液及空白添加混合标准工作溶液中a一玉米赤霉醇、日一苄米赤霉醇、a一乇米赤霉烯醇、B一玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮、玉米赤霉烯酮的峰面积均应在仪器检测的线性范围之内。6 5空白试验除不加标样外，按照上述测定条件和步骤进行平行操作。7结果计算试样中玉米赤霉醇类的残留量按公式(1)计算，测定结果扣除空白值，保留气位小数：单点校准：X一Xi,Am,(1)l r优或空白添加标准曲线校准：由A，-aX，+b，求得a和b，代人公式(1)。式中： x测试样品中玉米赤霉醇类的残留量，单位为微克每千克(“gkg)；x，空白添加样品中相应

13、玉米赤霉醇类的浓度，单位为微克每T克(“gkg)；A 待测样品溶液中相应玉米赤霉醇类的峰面积；A，一一空白添加样品溶液中相应的玉米赤霉醇类的峰面积；m。 空白添加样品质量，单位为克(g)；m待测样品质量，单位为克(g)。8方法灵敏度、准确度和精密度8 1灵敏度6种玉米赤霉醇类残留的检测限均为050“gkg，定量限均为100#gkg。82准确度本方法在添加浓度范围为100“gkg2000#gkg时的回收率为60120。8 3精密度本方法批间相对标准偏差205* fI 266e4o丌阡r广广个可1T_丌下丌T_TT竹TT丌-丁丌rrrr丌广广阡kmll_11丌”rTT_1_竹丁丌1丌丌-r丌叮_-

14、广广-_r_1m1丌1000 0 50 100 l_50 2 00 2 50 3 00 3 50 4 00 4 50 5 00 5 50Zeran01080702_48 2：MRM of 4 Chl目ES一100 21 317273摹 fl 170e4o斗广_广_rr广广r_广_广r广广叮丌丌-丌_m下”1TTT_TTT_-T丌_几_仃叮竹竹r丌叮丌丌广_m_1可1丌竹r秆1_+丌r丌叮广广_广厂广呷0 00 0 50 l_00 1 50 2 00 2 50 300 3 50 400 4 50 5 00 5 50Zeranol08070248 2 MRM of 4 Chals ES一10习0

15、2501 31：7：。17。5o斗TTTTT_丌_可可11呷11_111_甲T_广广_r广r丌TTTTT_1巾”叶_11_11_1_1_”下_11111111_11111_11_11_1_1下丌-r叩000 0 50 1 00 l 50 2 00 250 3 00 3 50 4 00 4 50 5 00 5 500 00 0 50 l 00 1 50 2 00 2 50 3 00 3 50 4 00 4 50 5 00 550Zeranol08070248 l：MRM of 4 Channels ES一100摹027792e4000 0 50 1 00 l 50 200 2 50 3 00 3

16、 50 4 00 4 50 5 00 5 50Zeranol080702_48 I：MRM of 4 Channels ES一飘，。，1M，。，。，二：i000 0 50 1 00 1 50 200 2 50 3：00 3 50 400 4 50 5 00 5 50Zeranol08070：Z 48 l：MRM of 4 Channels ES一100誉O930l7 8le3Time0 00 0 50 100 1 50 2 00 250 300 3 50 400 4 50 5 00 5 50图A 1 玉米赤霉醇类标准溶液特征离子质量色谱图农业部1077号公告-6-2008A2 B一玉米赤霉醇与

17、n一玉米赤霉醇子离子扫描质谱图旷玉米赤霉醇与a玉米赤霉醇子离子扫描质谱图见图A2。27 71l302 9B25915 32l 68106：4 134,98 161 242023 237 29 363 73100 125 150 175 200 225 250 275 300 325 350 375 400图A 2 B玉米赤霉醇与a一玉米赤霉醇子离子扫描质谱图A3 B一玉米赤霉烯醇与一玉米赤霉烯醇子离子扫描质谱图$蕞米赤霉烯醇与a乇米赤霉烯醇子离子扫描质谱图见图A3。275t。7173 94粥12983气88 ir,233：15 25100下 31963 357 52378100 125 150

18、 175 200 225 250 275 300 325 350 375 400图A3 B。玉米赤霉烯醇与n一玉米赤霉烯醇子离子扫描质谱图A4玉米赤霉酮子离子扫描质谱图求米赤霉酮子离子扫描质谱图见图A4。农业部1 077号公告一62008Zeran01080702_35 269(2482)Cm(256：272) 317 01 Dau gItd317ESO4 017 97130 95 148 98 2730318694 299 07虬m，12，8矧i|I h墨96攀j ，3175j57 97 365 58391100 125 150 175 200 225 250 275 300 325 350

19、 375 400图A 4玉米赤霉酮子离子扫描质谱图A 5玉米赤霉烯酮子离子扫描质谱图苄米赤霉烯酮子离子扫描质谱图见图A5。205。Iojss-jj。，16l。3。j?。I。?sj。，f，3。0：1Ii 256 98 197。1 3，20 23 356 63 392 0心88 1 -sj?s l。i3r 7 02图A 5玉米赤霉烯酮子离子扫描质谱图农业部1 077号公告62008A6基质(鱼)加标回收率色谱图基质(鱼)加标回收率色谱图(o5“gkg)见图A6。ze等甜O8070t180 SN：P货3805 2：MRM甜4 oh3aln9nd2s7E5S-1II_ 3“o：I ， !望a上$一，。

20、1-答乌；罂：秘291 25 1 50 1 75 2 00 2 25 2 50 2 75 3 00 3 25Zn1080702_180 SN：PIP=82 54 1 MRM of4 CharmI ES轧了石一争吲尹冬碡誊墨i一万一一一：涮图A 6基质(鱼)加标回收率色谱图(0 5 pgkg)A 7鱼空白色谱图鱼空白色谱图见图A7。2er-“oool0180702-591043 0f5 ：。 ”“，蒸088h“nels ES：i爿批山山勘础=一一一一一一一一，“硝2。59 1氘W i1 233 ”“4Ch一el粉E5-：k鼢0麓枞黜!一一一一一一一“20 00 0 50 1 00 1 50 2 00 2 50 3 00 3 50 400 4 50 5 00图A 7鱼空白色谱图