GB T 16293-1996 医药工业洁净室(区)浮游菌的测试方法.pdf

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1、r GB/T 16293-1996 前本标准依照国内外药品生产管理规范（GMP）的要求，非等效采用美国国家航空及宇宙航行用NASA标准NHB53402关于洁净室和洁净工作台微生物的控制标准，并参考JGJ71 90洁净室施工验收规范制定的。悬浮粒子和微生物的测试是评价医药工业洁净室和洁净区空气洁净度的主要指标。本标准用浮游茵评价洁净室和洁净区空气中的微生物。8 医药工业洁净室（区）浮游菌的测试应采用本标准的规定。本标准的附录A、附录B、附录C都是标准的附录。本标准的附录D是提示的附录。本标准由国家医药管理局提出并归口本标准起草单位g中美上海施贵宝制药有限公司、上海医药局药品测试所、上海四药股份有

2、限公司。本标准主要起草人g顾锋、钱用、步伯蒜、唐小珍。中华人民共和国国家标准医药工业洁净室（区）浮游菌的测试方法GB/T 16293一1996Test method for airborne microbe in clean room (area) of the pharmaceutical industry 范围本标准规定了医药工业洁净室和洁净区中存游菌测试条件、测试方法。本标准适用于医药工业洁净室和洁净区，无菌室或无茵区域（包括洁净工作台）的浮游菌的测定和环境的验证。2 引用标准下列标准包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，

3、使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。YY /T 0188. 6-1995药品检验操作规程第6部分z药品生物测定法3 定义本标准采用下列定义。3. 1 洁净室（区）clean room (area) 对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。其建筑结构、装备及其使用均具有减少对该区域内污染源的介入、产生和滞留的功能。3.2 洁净工作台cleaning work station 一种工作台或者与之类似的一个封闭围挡工作区。其特点是自身能够供给经过过滤的空气或气体，如垂直层流罩、水平层流罩、垂直层流洁净工作台、水平层流洁净工作台、白净器等。3.3菌落colony formin

4、g units 细商培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU0通常用个数表示3.4 浮游菌airbornemicrobe 用本标准提及的方法收集悬浮在空气中的活微生物粒子，通过专门的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。3.5 浮游菌浓度airborne microbe concentration 单位体积空气中含浮游茵茵落数的多少，以计数浓度表示，单位是个Im或个Lo3.6悬浮粒子airborneparticles 可悬浮在空气中的尺寸一般在0.001 m 1 000 m之间的固体、液体或两者的混合物质，包括生物性粒子和非生物性粒子。3. 7 洁净度cleanlin

5、ess 洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径的悬浮粒子的允许统计数。国家技术监督局199604-10批准1996-10-01实施9 、GB/T 16293 1996 3. 8单向流unidirectional air flow （曾称为层流laminar flow) 沿着平行流线，以单一通路以一定流速向单一方向流动的气流。3.9非单向流nonunidirectional air flow（曾称为乱流turbulent flow) 具有多个通路循环特性或气流方向不平行的，不满足单向流定义的气流3. 10 静态测试at rest test 洁净室（区）净化空气调节系统己处于正常运行状态，工

6、艺设备已安装，洁净室区内没有生产人员的情况下进行的测试。3. 11 动态测试operationaltest 洁净室（区）已处于正常生产状态下进行的测试。4 测试方法4. 1 方法提要本方法采用计数浓度法，即通过收集悬游在空气中的生物性粒子于专门的培养基，经若干时间，在适宜的生长条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，从而判定洁净环境内单位体积空气中的活微生物数，以此来评定洁净室（区的洁净度e4.2所用的仪器、设备和培养基a浮游菌采样器gb）真空拍气泵pc）培养皿gd）培养基ge）恒温培养箱4. 3浮游菌采样器浮游菌采样器宜采用撞击法机理的采样器，般采用狭缝式采样器或离心式采样器。4. 3. 1 采

7、用的浮游菌采样器必须要有流量计和定时器。4. 3. 2 狭缝式采样器的原理狭缝式采样器由附加的真空抽气泵拍气，通过采样器的缝隙式平板，将采集的空气喷射并撞击到缓慢旋转的平板培养基表面上，附着的t.s微生物粒子经培养后形成菌落，予以计数。4. 3. 3 离心式采样器的原理离心式采样器由于内部风机的高速旋转，气流从采样器前部吸入从后部流出，在离心力的作用下，空气中的活微生物粒子有足够的时间撞击到专用的固形培养条上，经培养后形成菌落，予以计数。4. 3. 4 狭缝式采样器的使用要点应严格按仪器说明书的要求进行操作。4.3.4. 1 校验采样器必须按仪器的检定周期，定期对仪器作检定，以保证测试数据的可

8、靠性。校验的项目有z定时器、转盘转速、流量计。4.3.4.2 每次测试前应按说明书上的规定，先接通电源，启动真空抽气泵，然后调节流量计及定时器。4.3.4.3 空气采样最根据需要选定已知采样器的流量（L/min），设定采样时间（min），两者相乘即采样量（L）。4.3.4.4 注意事项4. 3. 4. 4.1 采样口必须用便于消毒及化学性能稳定的材料制造4.3.4.4.2 采样管严禁渗漏，内壁应光滑4.3.4.4.3 采样管的长度应根据测点的高度定，尽量减少弯曲。4.4 真空抽气泵10 GB/T 16293-1996 4.4. 1 真空抽气泵的排气量应与采样器匹配。4.4.2宜采用无泊真空抽气

9、泵，必要时可在排气口安装气体过滤器。4.4.3真空拍气泵安装的位置必须适当，一般装在采样器下面。4. 5培养皿4. 5. 1 狭缝式采样器一般采用1150mm 15 mm,90 mmX15 mm，65 mm 15 mm三种规格的砌砖酸玻璃培养皿。可根据所选用采样器选择合适的培养皿。4.5.2离心式采祥器采用专用的回形培养条。4.6培养基普通肉汤琼if培养基或其他药典认可的培养基。其配制方法见附录A（标准的附录）。4. 7恒温培养箱必须定期对培养箱的温度计进行检定。4.8 测试步骤4. a. 1 测试前仪器、培养皿表面必须严格消毒。4.8.1.1 采样器进入被测房间前先用消毒房间的消毒剂灭菌，用

10、于100级洁净室的采样器宜一直放在被测房间内。4. a. 1. 2用消毒剂擦净培养皿的外表面。4.a.1.3 采样前，先用消毒剂消毒采祥器的顶盖、传盘以及罩子的内外面，采样结束，再用消毒剂轻轻喷射罩子的内壁和转盘。4. a. 1. 4 采样口及采样管，使用前必须高温灭菌。如用消毒剂对采样管的外壁及内壁进行消毒时，应将管中的残留液倒掉并晾干。4.a.1.s 采样者应穿戴与被测洁净区域相应的工作服，在转盘上放入或调换培养皿前，双手用消毒剂消毒4. a. 2狭缝式采样器的采样程序4.8.2. 1 仪器经消毒后先不放入培养皿，开动真空泵抽气，使仪器中的残余消毒剂蒸发，时间不少于5 min，并i周好流量

11、、转盘转速。4. a. 2. 2关闭真空泵，放入培养皿，盖上盖子后调节采祥器缝隙高度。4.8.2.3 置采样口于采样点后，依次开启采样器、真空泵，转动定时器，根据采样量设定采样时间4.8.3培养4. a. 3. 1 全部采祥结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。4.8.3.2 在3035培养箱中培养，时间不少于48h。4.8.3.3 每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染，可每批选定3只培养皿作对照培养。4. a. 4 菌落汁数 4.a.4.1 用肉眼直接计数、标记或在菌落计数器上点计，然后用510倍Ji：大镜检查，有否遗漏。4.8.4.2若平板上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时

12、仍以2个或2个以上菌落计数。4.8.5 注意事项4.8.5.1 使用前应仔细检查每个培养皿的质量，培养基及培养皿有变质、破损或污染的不能使用。4.a.s.2 采取一切措施防止采样管的污染和其他人为对样本的污染4.8.5.3对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录4.8.5.4 由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌荡，并须注意细茵茵落或培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。5 测试规则5. 1 测试状态11 ,- GB/T 1 6 2 9 3 1 9 9 6 5. 1. 1 汗游菌测试前，被测试洁净室（或洁净区）温、湿度须达到规定

13、的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。5. 1. 2 汗游菌测试前，被测试洁净室（或洁净区）已经过消毒。5. 1.3 测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。5. 2 测试人员5. 2. 1 测试人员必须穿戴符合环搅级别的工作服。5. 2. 2 静态测试时，室内测试人员不得多于2人。5.3 测试时间5. 3, 1 对单向流，如100级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min后开始。5. 3, 2 对非单向流，如10000级、100000级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少子30 min后开始。5

14、.4 浮游菌浓度计算5. 4, 1 采样点数量及其布U:5,4.1.1 最少采样点数日浮游茵/j!j式的最少采样点数目分为日常监测及环境验证两种情况，见表1。表1最少采样点数目洁？争度级别回积100 10 oco 100 oco m 验证监测验证监nI 验iif 监测GB/T 16293-1996 附录A（标准的附录）培养基的准备及灭茵A1 培养基的准备培养基可以外购或自行配制。自行配制方法见YY/T 0188. 6第6章无菌检查部分中关于此类培养基的配备和操作步骤。其他符合药典灵敏度要求的培养基亦可以自行配制。A2 培养基平皿的制备A2. 1 将培养皿置于121混热灭菌20min或180干热

15、灭菌2h。A2. 2 将培养基加热熔化，冷却至45时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿。注入量，65mm培养皿约10mL 向Omm培养皿约20mL 150 mm培养皿约60mL A3 细菌的培养待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于3035的恒温培养箱中培养48h，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用。注培养基平皿宜在2BC的环境中存放附录，B（标准的附录）采桦点布置洁净室和洁净区采样点的布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，某局部区域过于稀疏。下列采样点布置的图示可作参考。注.为采样点。因Bl14 测试单位测试依据洁净度级别温度采样器名称采样点编号No.采样速率，L/min采样盘，m

16、开始时间菌落数，CFU平均浓度，CFU/m最高浓度评定标准测试人日期洁净度级别100 10 00 100 coo GB/T 16293-1996 C 测试日期附录c （标准的附录浮游菌测试报告测试区域房间或层流工作台）面积相对湿度型号送风口CFU/m 最低浓度结论结果报告人日期附录D （提示的附录）生产批号m 测试状态% 静压差培养基名称工批准人目期国内外有关浮游菌测定的标准表DI美国NASA标准世界卫生组织（WHO)GMPNHB5340-2 及欧洲共同体CEC)GMP生韧性粒子最大允许数m微生物的最大允许数m3.5 5 17. 6 100 88.4 500 Pa 作区CFU/m . 中国卫生部GMP(1992年修订活微生物数m三三5100 三二50015