DB6111 T 171-2021 草莓脱毒苗育苗技术规程.pdf

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1、ICS 65.020.20CCS B 61DB6111杨 凌 农 业 高 新 技 术 产 业 示 范 区 地 方 标 准DB 6111/T 1712021草莓脱毒苗育苗技术规程Technical standard for virus-free breeding of strawberry seedlings2021-10-22 发布2021-11-01 实施杨凌示范区市场监督管理局发 布DB6111/T 1712021I前言本文件依据GB/T 1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则起草。本文件由杨凌龙德盛农业科技有限公司提出。本文件由杨凌示范区农业标准化技术委员会归

2、口。本文件起草单位：杨凌龙德盛农业科技有限公司、西北农林科技大学、蛟河市草莓研究所。本文件主要起草人：赵磊、李怀财、刘占杰、巨兴耀、吴云锋。本文件由杨凌龙德盛农业科技有限公司、西北农林科技大学负责解释。联 系 人：赵磊联系方式：029-87036699、18792627895联系地址：杨凌示范区邰城路3号DB6111/T 17120211草莓脱毒苗育苗技术规程1范围本文件规定了草莓脱毒苗育苗技术的术语与定义、脱毒原原种苗、脱毒原种苗和脱毒商品苗的生产技术。本文件适用于杨凌示范区草莓脱毒苗的培育管理。生态环境、物候条件相似地区可参考执行。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成

3、本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T 406-2000脱毒草莓种苗病毒检测技术规程3术语和定义下列术语与定义适用于本文件。3.1茎尖培养脱毒method for virus elimination by shoot tip culture用植株茎尖经组织培养获得脱毒植株的过程。3.2超低温脱毒method for virus elimination by cryotherapy植株茎尖经过预培养、冷冻保护剂（PVS2）处理、液氮冷冻、复苏后组织培养，获得脱毒植株的过程。3.3热处理

4、脱毒thermotherapy-based method for virus eradication组培苗在35 40 条件下，光照继代培养1个月2个月，取茎尖经组织培养获得脱毒植株的过程。3.4脱毒原原种苗breeders virus eradication stock经脱毒处理的原始植株。3.5DB6111/T 17120212脱毒原种苗original virus eradication stock用脱毒原原种苗匍匐茎繁殖出的脱毒植株。3.6脱毒商品苗virus eradication culture stock用脱毒原种苗匍匐茎繁殖出的脱毒植株。4脱毒原原种苗生产4.1外植体建立在封闭

5、无害虫的设施内选择表现品种特性的健壮待脱毒植株，采集2 cm匍匐茎顶端，置于组培瓶中，加入适量中性洗涤剂在流动的自来水下冲洗1 h2 h。用75%乙醇表面消毒30 s，再用2%次氯酸钠溶液消毒10 min，无菌水冲洗5遍。用滤纸吸干水分，将茎尖置于MS0.1 mg/L NAA0.5 mg/L 6-BA8 g/L琼脂30 g/L蔗糖(pH 5.8)培养基中无菌培养1个月左右。培养条件为温度23，光照时间16 h/d，光照强度2400 Lx。4.2病毒检测培养得到的外植体，按NY/T 406-2000的规定检测病毒。4.3检测后处理4.3.1 无毒外植体直接作为脱毒苗原原种使用。4.3.2 带毒外

6、植体4.3.2.1 茎尖培养经检测只携带草莓轻型黄边病毒的外植体，在超净工作台中用无菌刀片切取0.2 mm0.5 mm生长点茎尖，接种到MS0.05 mg/L NAA0.3 mg/L 6-BA8 g/L琼脂30 g/L蔗糖培养基中，在23，光照时间16 h/d，光照强度2400 Lx条件下培养50 d60 d。注：超净工作台使用前打开紫外消毒灯消毒30 min，关闭紫外灯，打开风机用中等风量通风1 h后方可使用。无菌刀片使用前，用75%酒精消毒，再在酒精灯上烧1 min以上，冷却后方可使用。操作人员需佩戴口罩，穿好实验服，操作前手及手臂需经过75%酒精喷雾消毒。4.3.2.2 超低温脱毒经检测

7、携带草莓斑驳病毒（strawberry mottle virus,SMoV）或同时携带草莓斑驳病毒与草莓轻型黄边病毒（strawberry mild yellow edge virus,SMYEV）的组培苗，在超净工作台中用无菌刀片切取1.0 mm2.0 mm草莓生长点茎尖，接种到MS2 mol/L甘油0.3 mol/L蔗糖的预培养基上，在4 黑暗条件下培养3 d。切取1.0 mm2.0 mm茎尖，在室温下用60%PVS2（含0.6 mol/L蔗糖的MS与100%PVS2体积比2:3混合）加载40 min，更换100%PVS2于0 条件下处理1 h。将茎尖转移至装有新鲜100%PVS2冷冻管中

8、，投入液氮30 min60 min。在40 水浴锅中解冻2 min，用MS1.2 mol/L 蔗糖培养基冲洗DB6111/T 1712021323次，每次10 min。将茎尖置于MS0.05 mg/L NAA0.3 mg/L 6-BA8 g/L 琼脂30 g/L蔗糖培养基中，在23 下黑暗培养1周，转入23、光照时间16 h/d、光照强度2400 Lx环境下培养50 d60 d。4.3.2.3 热处理经检测携带草莓镶脉病毒（strawberry vein banding virus,SVBV）或同时携带草莓镶脉病毒及其它病毒的外植体，将组培苗置于白天36、黑夜32，光照时间16 h/d，光照强

9、度2400 Lx的条件下培养30 d。在超净工作台中用无菌刀片切取0.5 mm左右的草莓生产点茎尖，接种到MS0.05 mg/L NAA0.3 mg/L 6-BA8 g/L琼脂30 g/L蔗糖培养基中，在23、光照时间16 h/d、光照强度2400 Lx的条件下培养50 d60 d。4.4茎尖分化按照4.4处理过的茎尖分化成带有叶原基的小芽后，转移到新的分化培养基中。长出叶片后，转移到MS0.05 mg/L BA0.02 mg/L IBA0.1 mg/L GA38 g/L琼脂30 g/L蔗糖中，在23、光照时间16 h/d、光照强度2400 Lx的条件下培养50 d60 d。4.5病毒检测茎尖

10、分化成苗后，按NY/T 406-2000的规定检测病毒。4.6检测后处理淘汰带毒植株，保留无毒植株。4.7无毒植株培育4.7.1 生根无毒植株剪去基部小芽，接种于1/2 MS0.1 mg/L IBA6 g/L琼脂30 g/L蔗糖的生根培养基中，在23、光照时间16 h/d、光照强度2400 Lx的条件下培养30 d40 d后。4.7.2 移栽在100目防虫网温室中练苗7 d。取出组培苗，用清水冲洗干净培养基，移栽于穴盘中（培养基质配方为草炭土：蛭石：椰糠=1:1:1）。置于有100目防虫网的温室中，在穴盘上搭建小拱棚，覆盖塑料薄膜，控制温度15 25。移栽后7 d内湿度保持在80%以上，7 d

11、后逐渐降低湿度。生长50 d60 d即获得可定植的脱毒原原种苗。5脱毒原种苗生产脱毒原原种苗抽生匍匐茎后，疏理匍匐茎蔓，使其伸展分布在子苗槽内并固定，保证通风透光。匍匐茎抽生出的苗即为脱毒原种苗。6脱毒商品苗生产6.1生产方式脱毒原种苗在100目防虫网室中抽生匍匐茎后，疏理匍匐茎蔓，使其伸展分布在子苗槽内并固定，保证通风透光。匍匐茎抽生出的苗即为脱毒商品苗。DB6111/T 171202146.2培育管理水肥要小水勤浇，脱毒原种苗定植20 d后开始冲施水溶肥，每次冲施5 kg/667m2。第一次N:P:K比例为15:15:15；10 d后冲施第二次，N:P:K比例为15:10:10；20 d后

12、冲施第三次，N:P:K比例为15:8:30。匍匐茎大量发生时期，冲施3次含腐殖酸的水溶肥，每次5 kg/667m2，N:P:K比例为15:15:15，每次间隔10 d。及时摘除枯黄老叶、残叶。6.3起苗一般在每年的8月中旬到9月中旬，苗龄90 d120 d时，根据生产需要起苗并及时装袋保湿。6.4修剪去掉老叶、残叶，剪掉匍匐茎。6.5分级包装按不同等级，每50棵一捆捆好后，用塑料袋包装，装在有通气孔的纸箱内，并用标签标明品种、规格、数量、等级、日期，分级标准见表1。表1种苗分级级别叶片数根径cm根数条根长cmA级五叶一心0.888B级四叶一心0.666C级三叶一心0.4446.6储存与运输在6 10 下预冷10 h，在0 2 预冷24 h以上。预冷后的草莓苗贮藏不超过10 d。冷藏运输。_