DB1307 T394-2022 母驴人工授精技术规程.pdf

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1、DB1307张家口市地方标准DB1307/T 3942022ICS 65.020.30CCS B 43母驴人工授精技术规程2022-10-27 发布2022-11-27 实施张家口市市场监督管理局 发 布DB1307/T 3942022I前言本文件按照 GB/T 1.12020标准化工作导则第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由张家口市农业农村局提出并归口。本文件起草单位：阳原县农业农村局、中国农业大学、张家口桑阳牧业有限公司、张家口市农产品质量安全监督检验中心。本文件主要起草人：曾申明、庞洁、沈学梅、王海丽、韩海军、武开、白海宾、闫冬梅、肖江龙、贾建平、祁建平、李靖、李

2、楠、王佳敏。DB1307/T 39420221母驴人工授精技术规程1范围本文件规定了母驴人工授精的发情鉴定、精液准备、输精、妊娠鉴定、数据记录和废弃物无害化处理操作技术要求。本文件适用于张家口地区内母驴的人工授精操作。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 391712020废塑料回收技术规范3术语与定义下列术语和定义适用于本文件。3.1hCG指人绒毛膜促性腺激素。3.2GnRH指促性腺激素释放激素。3.3CASA指计算机辅助

3、精液分析系统。4发情鉴定4.1试情法挑选体质健壮、性欲旺盛的种公驴进行试情。牵拉种公驴在母驴圈舍外部通道走动，或者拴系在母驴圈内的柱桩上。处于发情期的母驴表现出愿意接近公驴，并有弓腰举尾、阴唇闪合、频繁排尿、后肢张开、两耳向颈部收拢、口部频繁开合等行为；未发情母驴则躲避公驴，甚至在公驴靠近时，有蹴踢和啃咬等抗拒行为。4.2B 超直肠发情鉴定DB1307/T 394202224.2.1所需设备及试剂B 型超声波诊断仪、一次性长臂手套、润滑剂、促排卵药物、注射器。4.2.2母驴的发情鉴定将待检母驴用保定栏固定后，检查者在操作前修剪并磨平指甲，清洗消毒手臂，戴上一次性长臂手套并抹上润滑剂，在母驴后方

4、将手握成锥形缓慢插入肛门。若直肠内有粪便可用手清除，待直肠内部干净且直肠壁舒缓时，将手臂深入触摸卵巢。然后，将 B 型超声波诊断仪探头握在手心，平行并紧贴直肠壁下缘，依次检查母驴子宫体、子宫角和卵巢卵泡发育状态。卵泡发育形态参照附录 B.1。母驴发情阶段一般分为以下四个阶段：a)间情期：卵泡上有多个小卵泡、直径为 10 mm20 mm；子宫角和子宫体回声均匀，没有液体存留；此阶段母驴阴道干涩，不接受爬跨，抗拒直肠检查；b)发情前期：卵巢上出现优势卵泡，体积增加较快，卵泡内充满液体，卵泡直径一般为 20 mm30mm；子宫角出现水肿，阴道有少量稀薄粘液流出；部分母驴出现发情行为，表现为接近公驴，

5、少部分出现口部反复开合、两耳向颈部收拢；c)发情期：优势卵泡快速生长，直径达到 30 mm 以上，此时母驴出现明显的发情行为，主动接近公驴、接受爬跨、频繁排尿，口部反复开合、两耳向颈部收拢；子宫角水肿明显；d)发情后期：卵泡破裂排卵，检查时可见明显黄体，母驴性情逐渐安静；子宫角水肿消失。4.2.3发情母驴的处理诊断结束后，准确记录母驴的卵泡、子宫和黄体状态，在母驴后背标记卵泡发育情况，挑选出优势卵泡直径在 30 mm 以上的母驴，注射 l.0 mL 的 GnRH 类似物或 2000 IU hCG，优势卵泡直径在 35 mm的母驴在当天下午输精，而优势卵泡直径在 30 mm35 mm 的母驴在第

6、二天下午进行输精。5精液准备5.1所需设备及试剂一次性长臂手套、显微镜、CASA 系统、量筒、温度计、恒温水浴锅、假阴道、集精杯、稀释液、润滑剂、高压蒸汽灭菌锅、精液分装瓶、烧杯、毛巾、温水、消毒液、酒精、纱布、20 mL 注射器、载玻片、盖玻片。5.2采精前准备5.2.1稀释液的准备在发情鉴定当天，按照发情母驴的数量准备稀释液，力求新鲜，稀释液配好后要进行灭菌，然后在4保存。在采精前半小时，将稀释液置于 37水浴锅中预热待用。5.2.2采精器具的准备采精所用的器具及相关用品，提前清洗消毒，安装假阴道时，将内胎两头翻转套在外壳的两端，并用橡胶圈加以固定，然后用 70%酒精对内部进行消毒，放入

7、35恒温箱中备用。5.2.3发情母驴的准备挑选发情母驴，要求性情温顺，将母驴牵到采精大厅拴系在栏柱上，用清水冲洗母驴臀部和外阴部，可收集发情母驴尿液以刺激公驴性欲。DB1307/T 394202235.3精液采集5.3.1假阴道的准备预先向安装好的假阴道夹层中灌入 4042热水，灌注量以假阴道夹层体积的 2/3 为宜，到采精时假阴道内温度为 38左右。假阴道内腔压力主要靠充气来调节，可根据采精公驴阴茎大小进行调整，假阴道在灌水充气后，内胎呈“Y”型，入口为较浅的漏斗状为宜。采精前将润滑剂均匀涂抹在假阴道入口至内胎 1/3 深处，或者在采精前用精液稀释液冲洗。假阴道结构，参见附录 B.2。5.3

8、.2公驴外生殖器的清洗待公驴阴茎勃起后，用 0.1%高锰酸钾溶液擦洗阴茎及包皮，再用无菌温水冲洗，最后用灭菌纱布或纸巾擦干。5.3.3精液采集采精时，采精员右手持假阴道把柄处，将假阴道靠在右臂肘处，当公驴爬跨时，立即站立于母驴右后侧，迅速将阴茎导入假阴道内。阴茎插入假阴道后经几次抽动即可射精，射精后顺势使阴茎从假阴道中退出，将假阴道的集精杯端缓慢下倾，并打开活塞放气，迅速将精液送入精液处理室进行品质鉴定和稀释。5.4精液品质鉴定精液品质鉴定要求在 37条件下进行，检查操作要迅速、轻缓，避免人为损伤精子，取样要均匀，评定结果要准确而客观。5.4.1精液体积将集精杯中的精液沿装有三层专用滤纸漏斗一

9、侧，缓缓倒入带刻度的无菌量筒中，去除精液中的灰尘和杂质等。然后，读取量筒的数值，记录精液体积。射精量一般为 30 mL150 mL。5.4.2颜色驴精液在正常情况下为乳白色或灰白色，精子密度越高颜色越深，反之越浅。精液若出现红色、绿色、黄褐色等异常颜色，不能用于输精。5.4.3气味新鲜公驴精液略带腥味，出现浓烈刺鼻性气味的精液不能用于输精。5.4.4密度用 CASA 系统直接测定或用血球计数板结合稀释倍数计算精液密度。5.4.5活力精液分析需在安装 37恒温台的显微镜上进行，用 CASA 系统直接测定；或统计视野下直线前进运动的精子占总精子数的比例，至少需要统计三个不同视野的数值，然后取平均数

10、。精子活力在 70%以上的精液才可用于输精。5.4.6畸形率DB1307/T 39420224公驴精液一般每一个月检查一次畸形率。用 CASA 系统直接测定；或者精液与姬姆萨溶液或蓝墨水混合后在载玻片上涂片，等风干后，在显微镜下统计形态异常精子占总精子数的比例，至少需要统计三个不同视野的数值，然后取平均数。精子畸形率不超过 15%的精液才可用于输精。5.5精液稀释精液采集后，立即将精液等量倒入 50 mL 离心管中，配比平衡后，放入普通离心机，在室温条件下，1 000g 离心 10 min。离心结束后，去除上清液至剩余体积约 5 mL 左右。根据输精母驴数和总精子数，确定稀释倍数（每个输精剂量

11、为 10 mL，其中至少含有 10 亿个有效精子）。然后，缓慢加入预热的稀释液，在稀释过程中轻轻摇动。在稀释后，缓慢将离心管颠倒 35 次，使精子和稀释液充分混匀，混匀后再检测一次精子活力，确保精子活力没有下降。最后，分装到输精瓶或无胶塞的一次性塑料注射器中，即可进行输精。注意，在整个处理和运输过程中，防止剧烈震荡而导致的精子畸形率上升。6输精输精应在专门的配种室进行。发情母驴在保定后，将尾部缠绕吊起，掏除直肠里的宿粪。先用含中性皂液的清水洗涤母驴外阴部粪污，再用清水冲洗，擦干后消毒，准备输精。输精管可以用牛输精枪外套，或猪子宫深部输精软管，要求无菌。输精时，输精员站在母驴后侧，右手并拢呈锥形

12、，将输精管尖端夹持于食指与中指间，手心略向左下方伸入阴道，并缓慢向前触摸子宫颈口，用拇指轻轻捅开子宫颈，顺势将输精管插入子宫颈内约 10 cm 处，挤压精液分装软瓶或推动注射器，将精液缓慢注入子宫内，然后拉出输精管，并轻轻按摩子宫颈，防止精液回流。母驴在输精后 48 h 检查排卵状况，如果没有排卵还需要再输精一次，直至排卵。7妊娠鉴定妊娠鉴定在输精后的第 21 天进行。妊娠鉴定时将待检母驴保定，利用直肠 B 型超声波诊断仪检查子宫体、子宫角和卵巢，操作方法同母驴发情鉴定。妊娠母驴卵巢上有黄体，胚胎显示为黑色圆球，并在子宫腔内游离；已附植的胚胎显示为黑色囊泡，胎儿为白色悬挂于子宫内壁。胚胎发育参

13、见附录 B.3。8数据记录详细记录母驴的卵泡发育情况、公驴精液品质及配种妊娠等情况，记录格式参见附录 A。9废弃物无害化处理母驴人工授精过程中产生的废弃物处理按 GB/T 391712020 执行。DB1307/T 39420225附录 A（资料性）母驴人工授精操作记录表A.1 母驴发情检查与配种记录记录表的格式见表 A.1。表 A.1 母驴发情检查与配种记录表日期序号耳号卵巢子宫情况输精施用药物下次检查时间其他左侧右侧公驴号剂量时间名称剂量12A.2 公驴精液采集与处理记录记录表的格式见表 A.2。表 A.2 公驴精液处理与输精记录表采精日期序号耳号射精量精子密度活力畸形率稀释倍数配种数配种母驴号妊娠母驴号12A.3 母驴妊娠检查记录记录表的格式见表 A.3。表 A.3 母驴妊娠检查记录表日期序号耳号妊娠状态卵巢其他左侧右侧12DB1307/T 39420226附录 B（资料性）母驴卵泡发育、妊娠诊断 B 超影像及假阴道结构B.1 卵泡发育的 B 超影像图 B.l 卵泡发育的 B 超影像SF：小卵泡；CL：黄体B.2假阴道结构图 B.2 假阴道结构B.3胚胎发育的 B 超影像图 B.3 胚胎发育 B 超影像箭头所指为胚泡（左）和胚体（右）