DB33 T 752-2022 植物种苗组培快繁技术规程.pdf

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1、ICS 65.020.20 CCS B 05 33 浙江省地方标准 DB33/T 7522022 代替 DB33/T 752 2009 植物种苗组培快繁技术规程 Technical regulation for plant micropropagation 2022-05-17 发布 2022-06-17 实施浙江省市场监督管理局发布 DB33/T 752 2022 I 目次.II 1.1 2.1 3.1 4.1 5.2 6.2 7.3 8.6 9.7 10.8 A.9 B.13 C.16 D.20 E MS.22 F.23 G.24 H.25 DB33/T

2、752 2022 II 前言 GB/T 1.1 2020 1 DB33/T 752 2009 DB33/T 752 2009 a)(2)b)(3 2009 2)c)(4 5 2009 3)d)(6 2009 5 7.1 7.2 7.3 10)e)(7 2009 4 6 8)f)(8 2009 9)g)(9 2009 11)h)(2009 11)i)A C 2009 A C j)(A B C D E F G 2009 D E F G H I B)k)(H)K.B Kumar DB33/T 752 2009 DB33/T 752 2022 1 植物种苗组培快繁技术规程 1 范围 2 规范

3、性引用文件 GB/T 191 GB 50009 NY/T 2306 3 术语和定义 3.1 继代 3.2 外植体 3.3 组培苗 4 植物组培工厂建设 4.1 工厂选址 DB33/T 752 2022 2 4.2 厂房建设 30 2 GB 50009 4.3 功能区规划及要求 4.3.1 组培车间()100 10()30 4.3.2 管理区 4.3.3 温室 5 设备、器材及试剂 5.1 设备 A 5.2 器材 B 5.3 试剂 C 6 组培车间管理 6.1 污染容器灭菌 0.10 MPa 0.11 MPa 121 30 40 6.2 培养容器的清洗

4、DB33/T 752 2022 3 1 3 5 6.3 人员管理 6.4 清洁及消毒(0.1%)30 60 2 70%80%25 35 10/20/6.5 污染检查 6.1 3%6.6 设备管理 6.7 厂房外部清洁 7 组培苗生产技术流程 7.1 母液配制 7.1.1 母液种类 D 7.1.2 化学试剂选择 7.1.3 水质要求 7.1.4 配制方法 DB33/T 752 2022 4()MS E F 7.1.5 过滤灭菌试剂母液配制 F(0.22)1.5 50.0-20 80%7.1.6 标签及保存 E F 7.2 培养基配制 7.2.1 配制前

5、准备()()()7.2.2 培养基配制 1(30/)300 400(30%40%)400 500(40%50%)6 9()1 mol/L HCl 1 mol/L NaOH pH(pH 5.5 pH 6.0)1.0 1.5,7.2.3 培养基、接种器械灭菌及存放 0.1 MPa 0.11 MPa 121 18 20 90 3 5 15 1.1 kg cm-2 1.2 kg cm-2 121 30 40 7.2.4 特殊培养基配制 pH pH DB33/T 752 2022 5 50 55 7.3 母本材料引进及保存 7.4 外植体采集 7.5 外植体消毒(2 3)10 2

6、0 70%75%0.5 1.0 30 60 0.25%2.00%10 30()3 5 0.1%5 15 NY/T 2306 7.6 初代培养 1 1 1 1 3 5 25 5 20 mol m-2 s-1 50 mol m-2 s-1 10 16 7.7 继代培养 3 8 30 7.8 分化培养 7.9 生根培养 3 8 3 5 1 2 DB33/T 752 2022 6 3 8 8 无菌接种操作及注意 8.1 接种前准备 70%75%()70%75%30 30 8.2 接种人员除尘、消毒 70%75%()8.3 培养基和母瓶的准备 6.1 70%75%8.4 接种盘

7、(纸)的取放()()8.5 接种器械灭菌 250 10 3 3 8.6 接种及封口()10 20()3 5 70%75%8.5 8.7 记录及培养 7.6 8.8 关机 DB33/T 752 2022 7 70%75%8.9 接种人员的注意事项 8.10 接种操作的安全管理 8.10.1 灭菌器械注意 8.10.2 险情应急处理 9 组培苗移栽和穴盘苗生产 9.1 炼苗(60 mol m-2s-1 100 mol m-2s-1)15 35 3 9.2 移栽 9.3 管理 2 4 80%95%4 6 60%80%4 60 mol m-2s-1 100 mol

8、 m-2s-1 200 mol m-2s-1 35 9.4 肥水管理 9.5 病虫害防治 4 75%80%1 000 1 250 1 8 2.8%2 000 25 40 15 20 1 H DB33/T 752 2022 8 10 包装、标签、运输 10.1 包装 10.2 标签 GB/T 191 10.3 运输 10 25 60%90%3 DB33/T 752 2022 9 A A 附录 A（资料性）植物组培工厂所需仪器和设备 A.1 表A.1 植物组培工厂所需仪器和设备 0.22 m 100 25 cm 30 cm 2.0 mm 2.5 mm DB33/T 75

9、2 2022 10 表 A.1 植物组培工厂所需仪器和设备 5 50 1 2 0.1 mg 0.1 g DB33/T 752 2022 11 表 A.1 植物组培工厂所需仪器和设备 pH pH 1 000 0 100 0 1 000 l/0 5 000 l-DB33/T 752 2022 12 表 A.1 植物组培工厂所需仪器和设备 DB33/T 752 2022 13 B B 附录 B（资料性）植物组培工厂所需器皿及器材 B.1 表B.1 植物组培工厂所需器皿及器材 50 ml/100 ml/250 ml/500 ml/1 000

10、ml/2 000 ml 250 ml/500 ml/1 000 ml/2 000 ml 10 ml/25 ml/50 ml/100 ml/250 ml/500 ml/1 000 ml 100 ml/250 ml/500 ml/1 000 ml/2 000 ml 500 ml/1 000 ml/2 000 ml/5 000 ml 75 mm 75 mm 100 mm 100 mm 150 mm 150 mm pH pH 5.4 pH 7.0 DB33/T 752 2022 14 表 B.1 植物组培工厂所需器皿及器材 90 mm 100/PE DB33/T 752 2022 15 表

11、 B.1 植物组培工厂所需器皿及器材 DB33/T 752 2022 16 C C 附录 C（资料性）植物组培常用试剂 C.1 表C.1 植物组培常用试剂 Ammoniumnitrate NH4NO3 80.05 AR Potassium nitrate KNO3 101.11 AR Calcium chloride dihydrate CaCl2 2H2O 147.02 AR Calcium chloride CaCl2 111.02 AR Magnesium sulfate MgSO4 7H20 246.47 AR potassium dihydrogen ph

12、osphate KH2PO4 136.09 AR ammonium sulfate(NH4)2SO4 132.13 AR Sodium dihydrogen phosphate monohydrate NaH2PO4 H2O 138.00 AR sodium dihydrogen phosphate anhydrous NaH2PO4 120.05 AR Calcium nitrate tetrahydrate Ca(NO3)2 4H2O 236.15 AR Calcium nitrate heptahydrate Ca(NO3)2 7H2O 290.20 AR Potassium chlor

13、ide KCl 74.55 AR Sodium sulfate Na2SO4 142.04 AR DB33/T 752 2022 17 表C.1 植物组培常用试剂 Manganese(II)sulfate tetrahydrate MnSO4 4H2O 223.01 AR Manganese sulfate monohydrate MnSO4 H2O 169.02 AR Zinc sulfate heptahydrate ZnSO4 7H2O 287.55 AR Boric Acid H3BO3 61.83 AR Potassium iodide KI 166.01 AR Sodium

14、 molybdate dihydrate Na2MoO4 2H2O 241.95 AR Copper()sulfate pentahydrate CuSO4 5H2O 249.68 AR Cobalt(II)chloride hexahydrate CoCl2 6H2O 237.93 AR Iron(II)sulfate heptahydrate FeSO4 7H2O 278.03 AR Iron()sulfate Fe2(SO4)3 399.88 AR Disodium ethylenediamine tetraacetic acid C10H14N2O8Na2 2H2O 372.25 AR

15、 Glycine C2H5NO2 75.07 BR 99.5%HCl Thiamine hydrochloride(VB1)C12H17ClN4OS-HCl 337.27 BR 99.6%Pyridoxine hydrochloride(VB6)C8H11NO3-HCl 205.64 BR 99.7%Nicotinic acid(VB5)C6H5NO2 123.11 BR 99.8%Myo-inositol C6H12O6 180.16 BR 99.9%DB33/T 752 2022 18 表C.1 植物组培常用试剂 Casein hydrolysate acid(CH)BR(4)La

16、ctoalbumin hydrolysate(LH)BR(4)Sucrose C12H22O11 342.30 AR Glucose C6H12O6 180.00 AR Agar(C12H18O9)n 1 200 g cm-2 1 300 g cm-2 6-6-Benzyl aminopurine(6-BA)C12H11N5 225.25 BR 6-()6-Furfuryl aminopurine(Kinetin,KT)C10H9N5O 215.21 BR Zeatin(ZT)C10H13N5O 219.24 BR 99%(-20)Thidiazauron(TDZ)C9H8N4OS 220.3

17、2 BR 99%(4)N6-N6-(2-Isopentenyl)adenine 6-(,-Dimethylallylamino)purine(2iP)C10H13N5 203.24 BR(4)-1-Naphthylacetic acid(NAA)C12H10O2 186.21 BR Indole-3-acetic acid(IAA)C10H9NO2 175.19 BR(-20)Indole-3-butyric acid(IBA)C12H13NO2 203.23 BR(4)2 4-2,4-Dichlorophenoxyacetic acid(2,4-D)C8H6Cl2O3 221.04 BR A

18、denine(A)C5H5N5 135.13 BR Gibberellin acid(GA)C19H22O6 346.38 BR 99%(4)DB33/T 752 2022 19 表C.1 植物组培常用试剂 Ethrel(Et)C2H6ClO3P 144.50 BR 95%Abscisic acid(ABA)C15H20O4 264.32 BR(-20)Ethanol C2H6O 46.07 CP 95%(Bromo geramine C21H38BrN 384.44 5%Sodium hypochlorite NaClO 74.44 AR 5.2%Mercuric chloride

19、HgCl2 271.5 AR-20 Tween-20 C18H34O6(C2H4O)n CP(4)Actived carbon C 12 AR Hydrochloric acid HCl 36.46 AR Sodium hydroxide NaOH 40.01 AR DB33/T 752 2022 20 D D 附录 D（资料性）植物组织培养常用基本培养基成分 D.1 表D.1 植物组织培养长阳基本培养基成分(mg/L)Murashige&Skoog(MS)(1962)Gamborg(B5)(1968)(N6)(1974)Linsmaier&Skoog(LS)(19

20、65)Woody plant medium(WPM)(1980)White(1963)(GS)1986(NH4)2SO4 134 463 67 NH4NO3 1 650 1 650 400 KNO3 1 900 2 500 2 830 1 900 900 80 1 250 CaCl2 2H2O 440 150 166 400 96 150 MgSO4 7H2O 370 250 185 370 370 720 125 KH2PO4 170 400 170 170 NaH2PO4 H2O 150 Na2HPO4 16.5 175 Ca(NO3)2 4H2O 556 Ca(NO3)2 7H2O 30

21、0 KCl 65 Na2SO4 200 MnSO4 4H2O 22.3 10 4.4 22.3 22.5 7 ZnSO4 7H2O 8.6 2 3.8 8.6 8.6 3 1 H3BO3 6.2 3 1.6 6.2 6.2 1.5 1.5 DB33/T 752 2022 21 表 D.1 植物组织培养长阳基本培养基成分(mg/L)Murashige&Skoog(MS)(1962)Gamborg(B5)(1968)(N6)(1974)Linsmaier&Skoog(LS)(1965)Woody plant medium(WPM)(1980)White(1963)GS)1986 KI

22、 0.83 0.75 0.8 0.83 0.75 0.375 Na2MoO4 2H2O 0.25 0.25 0.25 0.25 CuSO4 5H2O 0.025 0.025 0.025 0.25 0.0125 CoCl2 6H2O 0.025 0.025 0.025 0.0125 2.0 2.0 2.0 3.0(VB1)0.1 10.0 1.0 0.4 1.0 0.1 10.0(VB6)0.5 1.0 0.5 0.5 0.1 1.0(VB5)0.5 1.0 0.5 0.5 0.5 1.0 100 100 100 100 100 25 FeSO4 7H2O 27.8 27.8 27.8 27.8

23、 27.8 13.9 Na2.EDTA 37.3 37.3 37.3 37.3 37.3 18.65 Fe2(SO4)3 2.5 30 000 20 000 50 000 30 000 30 000 20 000 15 000 pH 5.8 5.5 5.8 5.8 5.7 5.5 5.8 DB33/T 752 2022 22 E E 附录 E（资料性）MS 培养基母液配制表 MS E.1 表E.1 MS 培养基母液配制表(mg/L)(mg/L)KNO3 1 900 20 38 000(4)NH4NO3 1 650 33 000 KH2PO4 170 3 400 MgSO4

24、7H2O 370 7 400 CaCl2 2H2O 440 8 800 KI 0.83 200 166(4)ZnSO4 7H2O 8.6 1 720 MnSO4 4H2O 22.3 4 460 H3BO3 6.2 1 240 Na2MoO2 2H2O 0.25 50 CoCl2 6H2O 0.025 5 CuSO4 5H2O 0.025 5 VB1 0.1 100 10(4)VB5 0.5 50 VB6 0.5 50 Gly 2 200 Myo-inositol 100 10 000 FeSO4 7H2O 27.8 100 2 780(4)Na2.EDTA 37.3 3 730 DB33/T

25、752 2022 23 F F 附录 F（资料性）植物组培常用植物生长调节剂母液配制 F.1 表F.1 植物组培常用植物生长调节剂母液配制(mg/L)6-(6-BA)0.1 M(HCl)0.1 mg/ml 0.5 mg/ml 1.0 mg/ml(4)0.1 3.0(KT)0.1 3.0(ZT)a 0.05 1.0(Adenine)0.1 3.0(2iP)a-20 0.1 2.0(TDZ)a(DMSO)0.05 mg/ml 0.1 mg/ml 0.05 0.5(IAA)a 95 0.1 mg/ml 0.5 mg/ml 1.0 mg/ml 0.1 1.0 IBA(4

26、)0.1 1.0(NAA)0.1 1.0 2 4-(2,4-D)0.1 3.0(GA)a 95 0.1 mg/ml-20 0.01 0.5(ABA)a 95 0.1 mg/ml 0.5 mg/ml 1.0 mg/ml 0.1 3.0 a DB33/T 752 2022 24 G G 附录 G（资料性）植物种苗组培快繁流程示意图 G.1 图G.1 植物种苗组培快繁流程示意图 DB33/T 752 2022 25 H H 附录 H（资料性）温室育苗常见病虫害及防治 H.1 基腐病 H.1.1 症状表现 H.1 15 H.1.2 防治措施 a)b)0.1%c

27、)d)e)3%800 H.2 灰霉病 H.2.1 症状表现 H.2,11 4 图H.1 基腐病症状 DB33/T 752 2022 26 图H.2 灰霉病症状 H.2.2 防治措施 a)85%b)25 c)65%1 000 H.3 种蝇(地蛆)H.3.1 症状表现 3 9 H.3 H.3.2 防治措施 a)b)10 15 c)50%800 d)2.5%3 000 图H.3 种蝇危害植物表现症状 DB33/T 752 2022 27 H.4 红蜘蛛 H.4.1 症状表现 H.4 5 7 8 H.4.2 防治措施 a)b)1.8%1 000 _ 图 H.4 红蜘蛛危害植物表现症状

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