1、ICS 65.020.20 CCS B 05 33 浙江 省 地方标准 DB33/T 7522022 代替 DB33/T 752 2009 植物 种苗 组培快繁 技术规程 Technical regulation for plant micropropagation 2022-05-17 发布 2022-06-17 实施 浙 江 省 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB33/T 752 2022 I 目 次.II 1.1 2.1 3.1 4.1 5.2 6.2 7.3 8.6 9.7 10.8 A.9 B.13 C.16 D.20 E MS.22 F.23 G.24 H.25 DB33/T
2、752 2022 II 前 言 GB/T 1.1 2020 1 DB33/T 752 2009 DB33/T 752 2009 a)(2)b)(3 2009 2)c)(4 5 2009 3)d)(6 2009 5 7.1 7.2 7.3 10)e)(7 2009 4 6 8)f)(8 2009 9)g)(9 2009 11)h)(2009 11)i)A C 2009 A C j)(A B C D E F G 2009 D E F G H I B)k)(H)K.B Kumar DB33/T 752 2009 DB33/T 752 2022 1 植 物种苗 组培快繁 技术规 程 1 范围 2 规范
3、性 引 用 文件 GB/T 191 GB 50009 NY/T 2306 3 术语和 定义 3.1 继代 3.2 外植体 3.3 组培苗 4 植物组 培工 厂建 设 4.1 工厂选 址 DB33/T 752 2022 2 4.2 厂房建 设 30 2 GB 50009 4.3 功能区 规划 及要 求 4.3.1 组培车 间()100 10()30 4.3.2 管理区 4.3.3 温室 5 设备、器材 及试 剂 5.1 设备 A 5.2 器材 B 5.3 试剂 C 6 组培车 间管 理 6.1 污染容 器灭 菌 0.10 MPa 0.11 MPa 121 30 40 6.2 培养容 器的 清洗
4、DB33/T 752 2022 3 1 3 5 6.3 人员管 理 6.4 清洁及 消毒(0.1%)30 60 2 70%80%25 35 10/20/6.5 污染检 查 6.1 3%6.6 设备管 理 6.7 厂房外 部清 洁 7 组培苗 生产 技术 流程 7.1 母液配 制 7.1.1 母液种 类 D 7.1.2 化学试 剂选 择 7.1.3 水质要 求 7.1.4 配制方 法 DB33/T 752 2022 4()MS E F 7.1.5 过滤灭 菌试 剂母 液配 制 F(0.22)1.5 50.0-20 80%7.1.6 标签及 保存 E F 7.2 培养基 配制 7.2.1 配制前
5、准备()()()7.2.2 培养基 配制 1(30/)300 400(30%40%)400 500(40%50%)6 9()1 mol/L HCl 1 mol/L NaOH pH(pH 5.5 pH 6.0)1.0 1.5,7.2.3 培养基、接 种器 械灭 菌及 存放 0.1 MPa 0.11 MPa 121 18 20 90 3 5 15 1.1 kg cm-2 1.2 kg cm-2 121 30 40 7.2.4 特殊培 养基 配制 pH pH DB33/T 752 2022 5 50 55 7.3 母本材 料引 进及 保存 7.4 外植体 采集 7.5 外植体 消毒(2 3)10 2
6、0 70%75%0.5 1.0 30 60 0.25%2.00%10 30()3 5 0.1%5 15 NY/T 2306 7.6 初代培 养 1 1 1 1 3 5 25 5 20 mol m-2 s-1 50 mol m-2 s-1 10 16 7.7 继代培 养 3 8 30 7.8 分化培 养 7.9 生根培 养 3 8 3 5 1 2 DB33/T 752 2022 6 3 8 8 无菌接 种操 作及 注意 8.1 接种前 准备 70%75%()70%75%30 30 8.2 接种人 员除 尘、消毒 70%75%()8.3 培养基 和母 瓶的 准备 6.1 70%75%8.4 接种盘
7、(纸)的取 放()()8.5 接种器 械灭 菌 250 10 3 3 8.6 接种及 封口()10 20()3 5 70%75%8.5 8.7 记录及 培养 7.6 8.8 关机 DB33/T 752 2022 7 70%75%8.9 接种人 员的 注意 事项 8.10 接种操 作的 安全 管理 8.10.1 灭菌器 械注 意 8.10.2 险情应 急处 理 9 组培苗 移栽 和穴 盘苗 生产 9.1 炼苗(60 mol m-2s-1 100 mol m-2s-1)15 35 3 9.2 移栽 9.3 管理 2 4 80%95%4 6 60%80%4 60 mol m-2s-1 100 mol
8、 m-2s-1 200 mol m-2s-1 35 9.4 肥水管 理 9.5 病虫害 防治 4 75%80%1 000 1 250 1 8 2.8%2 000 25 40 15 20 1 H DB33/T 752 2022 8 10 包装、标签、运输 10.1 包装 10.2 标签 GB/T 191 10.3 运输 10 25 60%90%3 DB33/T 752 2022 9 A A 附 录 A（资料 性）植物组 培工 厂所 需仪 器和 设备 A.1 表A.1 植物组 培工 厂所 需仪 器和 设备 0.22 m 100 25 cm 30 cm 2.0 mm 2.5 mm DB33/T 75
9、2 2022 10 表 A.1 植 物组 培工 厂所 需仪器 和设 备 5 50 1 2 0.1 mg 0.1 g DB33/T 752 2022 11 表 A.1 植 物组 培工 厂所 需仪器 和设 备 pH pH 1 000 0 100 0 1 000 l/0 5 000 l-DB33/T 752 2022 12 表 A.1 植 物组 培工 厂所 需仪器 和设 备 DB33/T 752 2022 13 B B 附 录 B（资料 性）植物组 培工 厂所 需器 皿及 器材 B.1 表B.1 植物组 培工 厂所 需器 皿及 器材 50 ml/100 ml/250 ml/500 ml/1 000
10、ml/2 000 ml 250 ml/500 ml/1 000 ml/2 000 ml 10 ml/25 ml/50 ml/100 ml/250 ml/500 ml/1 000 ml 100 ml/250 ml/500 ml/1 000 ml/2 000 ml 500 ml/1 000 ml/2 000 ml/5 000 ml 75 mm 75 mm 100 mm 100 mm 150 mm 150 mm pH pH 5.4 pH 7.0 DB33/T 752 2022 14 表 B.1 植 物组 培工 厂所 需器皿 及器 材 90 mm 100/PE DB33/T 752 2022 15 表
11、 B.1 植 物组 培工 厂所 需器皿 及器 材 DB33/T 752 2022 16 C C 附 录 C（资料 性）植物组 培常 用试 剂 C.1 表C.1 植物组 培常 用试 剂 Ammoniumnitrate NH4NO3 80.05 AR Potassium nitrate KNO3 101.11 AR Calcium chloride dihydrate CaCl2 2H2O 147.02 AR Calcium chloride CaCl2 111.02 AR Magnesium sulfate MgSO4 7H20 246.47 AR potassium dihydrogen ph
12、osphate KH2PO4 136.09 AR ammonium sulfate(NH4)2SO4 132.13 AR Sodium dihydrogen phosphate monohydrate NaH2PO4 H2O 138.00 AR sodium dihydrogen phosphate anhydrous NaH2PO4 120.05 AR Calcium nitrate tetrahydrate Ca(NO3)2 4H2O 236.15 AR Calcium nitrate heptahydrate Ca(NO3)2 7H2O 290.20 AR Potassium chlor
13、ide KCl 74.55 AR Sodium sulfate Na2SO4 142.04 AR DB33/T 752 2022 17 表C.1 植 物组 培常 用试 剂 Manganese(II)sulfate tetrahydrate MnSO4 4H2O 223.01 AR Manganese sulfate monohydrate MnSO4 H2O 169.02 AR Zinc sulfate heptahydrate ZnSO4 7H2O 287.55 AR Boric Acid H3BO3 61.83 AR Potassium iodide KI 166.01 AR Sodium
14、 molybdate dihydrate Na2MoO4 2H2O 241.95 AR Copper()sulfate pentahydrate CuSO4 5H2O 249.68 AR Cobalt(II)chloride hexahydrate CoCl2 6H2O 237.93 AR Iron(II)sulfate heptahydrate FeSO4 7H2O 278.03 AR Iron()sulfate Fe2(SO4)3 399.88 AR Disodium ethylenediamine tetraacetic acid C10H14N2O8Na2 2H2O 372.25 AR
15、 Glycine C2H5NO2 75.07 BR 99.5%HCl Thiamine hydrochloride(VB1)C12H17ClN4OS-HCl 337.27 BR 99.6%Pyridoxine hydrochloride(VB6)C8H11NO3-HCl 205.64 BR 99.7%Nicotinic acid(VB5)C6H5NO2 123.11 BR 99.8%Myo-inositol C6H12O6 180.16 BR 99.9%DB33/T 752 2022 18 表C.1 植 物组 培常 用试 剂 Casein hydrolysate acid(CH)BR(4)La
16、ctoalbumin hydrolysate(LH)BR(4)Sucrose C12H22O11 342.30 AR Glucose C6H12O6 180.00 AR Agar(C12H18O9)n 1 200 g cm-2 1 300 g cm-2 6-6-Benzyl aminopurine(6-BA)C12H11N5 225.25 BR 6-()6-Furfuryl aminopurine(Kinetin,KT)C10H9N5O 215.21 BR Zeatin(ZT)C10H13N5O 219.24 BR 99%(-20)Thidiazauron(TDZ)C9H8N4OS 220.3
17、2 BR 99%(4)N6-N6-(2-Isopentenyl)adenine 6-(,-Dimethylallylamino)purine(2iP)C10H13N5 203.24 BR(4)-1-Naphthylacetic acid(NAA)C12H10O2 186.21 BR Indole-3-acetic acid(IAA)C10H9NO2 175.19 BR(-20)Indole-3-butyric acid(IBA)C12H13NO2 203.23 BR(4)2 4-2,4-Dichlorophenoxyacetic acid(2,4-D)C8H6Cl2O3 221.04 BR A
18、denine(A)C5H5N5 135.13 BR Gibberellin acid(GA)C19H22O6 346.38 BR 99%(4)DB33/T 752 2022 19 表C.1 植 物组 培常 用试 剂 Ethrel(Et)C2H6ClO3P 144.50 BR 95%Abscisic acid(ABA)C15H20O4 264.32 BR(-20)Ethanol C2H6O 46.07 CP 95%(Bromo geramine C21H38BrN 384.44 5%Sodium hypochlorite NaClO 74.44 AR 5.2%Mercuric chloride
19、HgCl2 271.5 AR-20 Tween-20 C18H34O6(C2H4O)n CP(4)Actived carbon C 12 AR Hydrochloric acid HCl 36.46 AR Sodium hydroxide NaOH 40.01 AR DB33/T 752 2022 20 D D 附 录 D（资料 性）植物组 织培 养常 用基 本培 养基成 分 D.1 表D.1 植物组 织培 养长 阳基 本培 养基成 分(mg/L)Murashige&Skoog(MS)(1962)Gamborg(B5)(1968)(N6)(1974)Linsmaier&Skoog(LS)(19
20、65)Woody plant medium(WPM)(1980)White(1963)(GS)1986(NH4)2SO4 134 463 67 NH4NO3 1 650 1 650 400 KNO3 1 900 2 500 2 830 1 900 900 80 1 250 CaCl2 2H2O 440 150 166 400 96 150 MgSO4 7H2O 370 250 185 370 370 720 125 KH2PO4 170 400 170 170 NaH2PO4 H2O 150 Na2HPO4 16.5 175 Ca(NO3)2 4H2O 556 Ca(NO3)2 7H2O 30
21、0 KCl 65 Na2SO4 200 MnSO4 4H2O 22.3 10 4.4 22.3 22.5 7 ZnSO4 7H2O 8.6 2 3.8 8.6 8.6 3 1 H3BO3 6.2 3 1.6 6.2 6.2 1.5 1.5 DB33/T 752 2022 21 表 D.1 植 物组 织培 养长 阳基本 培养 基成 分(mg/L)Murashige&Skoog(MS)(1962)Gamborg(B5)(1968)(N6)(1974)Linsmaier&Skoog(LS)(1965)Woody plant medium(WPM)(1980)White(1963)GS)1986 KI
22、 0.83 0.75 0.8 0.83 0.75 0.375 Na2MoO4 2H2O 0.25 0.25 0.25 0.25 CuSO4 5H2O 0.025 0.025 0.025 0.25 0.0125 CoCl2 6H2O 0.025 0.025 0.025 0.0125 2.0 2.0 2.0 3.0(VB1)0.1 10.0 1.0 0.4 1.0 0.1 10.0(VB6)0.5 1.0 0.5 0.5 0.1 1.0(VB5)0.5 1.0 0.5 0.5 0.5 1.0 100 100 100 100 100 25 FeSO4 7H2O 27.8 27.8 27.8 27.8
23、 27.8 13.9 Na2.EDTA 37.3 37.3 37.3 37.3 37.3 18.65 Fe2(SO4)3 2.5 30 000 20 000 50 000 30 000 30 000 20 000 15 000 pH 5.8 5.5 5.8 5.8 5.7 5.5 5.8 DB33/T 752 2022 22 E E 附 录 E（资料 性）MS 培 养基 母液 配制 表 MS E.1 表E.1 MS 培 养基 母液 配制 表(mg/L)(mg/L)KNO3 1 900 20 38 000(4)NH4NO3 1 650 33 000 KH2PO4 170 3 400 MgSO4
24、7H2O 370 7 400 CaCl2 2H2O 440 8 800 KI 0.83 200 166(4)ZnSO4 7H2O 8.6 1 720 MnSO4 4H2O 22.3 4 460 H3BO3 6.2 1 240 Na2MoO2 2H2O 0.25 50 CoCl2 6H2O 0.025 5 CuSO4 5H2O 0.025 5 VB1 0.1 100 10(4)VB5 0.5 50 VB6 0.5 50 Gly 2 200 Myo-inositol 100 10 000 FeSO4 7H2O 27.8 100 2 780(4)Na2.EDTA 37.3 3 730 DB33/T
25、752 2022 23 F F 附 录 F（资料 性）植物组 培常 用植 物生 长调 节剂母 液配 制 F.1 表F.1 植物组 培常 用植 物生 长调 节剂母 液配 制(mg/L)6-(6-BA)0.1 M(HCl)0.1 mg/ml 0.5 mg/ml 1.0 mg/ml(4)0.1 3.0(KT)0.1 3.0(ZT)a 0.05 1.0(Adenine)0.1 3.0(2iP)a-20 0.1 2.0(TDZ)a(DMSO)0.05 mg/ml 0.1 mg/ml 0.05 0.5(IAA)a 95 0.1 mg/ml 0.5 mg/ml 1.0 mg/ml 0.1 1.0 IBA(4
26、)0.1 1.0(NAA)0.1 1.0 2 4-(2,4-D)0.1 3.0(GA)a 95 0.1 mg/ml-20 0.01 0.5(ABA)a 95 0.1 mg/ml 0.5 mg/ml 1.0 mg/ml 0.1 3.0 a DB33/T 752 2022 24 G G 附 录 G（资料 性）植物种 苗组 培快 繁流 程示 意图 G.1 图G.1 植物种 苗组 培快 繁流 程示 意图 DB33/T 752 2022 25 H H 附 录 H（资料 性）温室育 苗常 见病 虫害 及防 治 H.1 基腐病 H.1.1 症状表 现 H.1 15 H.1.2 防治措 施 a)b)0.1%c
27、)d)e)3%800 H.2 灰霉病 H.2.1 症状表 现 H.2,11 4 图H.1 基 腐病 症 状 DB33/T 752 2022 26 图H.2 灰 霉病 症状 H.2.2 防治措 施 a)85%b)25 c)65%1 000 H.3 种蝇(地蛆)H.3.1 症状表 现 3 9 H.3 H.3.2 防治措 施 a)b)10 15 c)50%800 d)2.5%3 000 图H.3 种 蝇危 害植 物表 现症状 DB33/T 752 2022 27 H.4 红蜘蛛 H.4.1 症状表 现 H.4 5 7 8 H.4.2 防治措 施 a)b)1.8%1 000 _ 图 H.4 红 蜘蛛 危害 植物 表 现症状
