DB1310 T 251—2021 软枣猕猴桃组织培养育苗技术规程.pdf

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1、ICS 6 5 . 0 2 0 . 0 1 CCS B 0 5 1310 廊 坊 市 地 方 标 准 D B 1 3 1 0 / T 2 5 1 2 0 2 1 软 枣 猕 猴 桃 组 织 培 养 育 苗 技 术 规 程 2 0 2 1 - 1 1 - 1 5 发 布 2 0 2 1 - 1 2 - 1 5 实 施 廊 坊 市 市 场 监 督 管 理 局 发 布D B 1 3 1 0 / T 2 5 1 2 0 2 1 I 前 言 本 文 件 按 照 G B / T 1 . 1 2 0 2 0 标 准 化 工 作 导 则 第 1 部 分 ： 标 准 化 文 件 的 结 构 和 起 草 规 则

2、的 规 定 起 草 。 本 文 件 由 廊 坊 市 农 业 农 村 局 提 出 。 本 文 件 起 草 单 位 ： 廊 坊 市 兴 延 科 技 服 务 有 限 公 司 、 廊 坊 师 范 学 院 。 本 文 件 主 要 起 草 人 ： 苏 彦 苹 、 申 彦 平 、 冯 雪 、 王 秋 芬 、 褚 卓 栋 、 孙 艳 香 、 张 程 亮 、 梁 金 明 、 袁 志 刚 、 张 方 悦 。D B 1 3 1 0 / T 2 5 1 2 0 2 1 1 软 枣 猕 猴 桃 组 织 培 养 育 苗 技 术 规 程 1 范 围 本 文 件 规 定 了 软 枣 猕 猴 桃 组 培 育 苗 的 术 语 和

3、 定 义 、 培 养 基 制 备 、 初 代 培 养 、 继 代 培 养 、 炼 苗 、 移 栽 、 大 田 移 栽 及 管 理 、 苗 木 出 圃 标 准 、 保 管 、 包 装 及 运 输 、 技 术 档 案 管 理 。 本 文 件 适 用 于 廊 坊 及 气 候 相 近 地 区 软 枣 猕 猴 桃 组 织 培 养 育 苗 生 产 。 2 规 范 性 引 用 文 件 下 列 文 件 中 的 内 容 通 过 文 中 的 规 范 性 引 用 而 构 成 本 文 件 必 不 可 少 的 条 款 。 其 中 ， 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 仅 该 日 期 对 应 的 版 本 适 用 于 本

4、 文 件 ； 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 最 新 版 本 （ 包 括 所 有 的 修 改 单 ） 适 用 于 本 文 件 。 G B / T 6 0 0 1 1 9 8 5 育 苗 技 术 规 程 G B 1 9 1 7 4 2 0 1 0 猕 猴 桃 苗 木 L Y / T 1 8 8 2 2 0 1 0 林 木 组 织 培 养 育 苗 技 术 规 程 3 术 语 和 定 义 下 列 术 语 和 定 义 适 用 于 本 文 件 。 组 培 苗 根 据 植 物 细 胞 全 能 性 ， 将 植 物 的 体 细 胞 、 组 织 或 器 官 进 行 离 体 培 养 ， 经 过 不 同

5、 的 细 胞 分 化 途 径 重 建 形 成 不 同 的 器 官 ， 诱 导 培 育 出 的 完 整 植 株 。 外 植 体 是 指 用 于 植 物 组 织 培 养 的 接 种 材 料 ， 它 包 括 植 物 体 的 各 种 器 官 、 组 织 、 细 胞 和 原 生 质 体 等 。 继 代 培 养 将 诱 导 产 生 的 芽 、 愈 伤 组 织 、 原 球 茎 或 胚 状 体 等 培 养 物 重 新 分 割 ， 接 种 到 新 鲜 培 养 基 上 进 一 步 扩 大 培 养 的 过 程 。 4 培 养 基 制 备 培 养 基 配 方 基 本 培 养 基 采 用 M S 培 养 基 ， 具 体

6、 的 外 植 体 诱 导 培 养 基 及 继 代 培 养 基 配 方 表 见 附 录 A 。 母 液 配 制D B 1 3 1 0 / T 2 5 1 2 0 2 1 2 按 照 L Y / T 1 8 8 2 2 0 1 0 林 木 组 织 培 养 育 苗 技 术 规 程 中 第 4 章 的 4 . 1 培 养 基 母 液 配 制 及 保 存 执 行 。 培 养 基 配 制 根 据 培 养 基 配 方 与 培 养 基 配 制 量 ， 按 比 例 吸 取 母 液 配 制 培 养 基 溶 液 ， 每 加 一 种 母 液 搅 拌 均 匀 后 再 加 入 第 二 种 母 液 ， 并 加 入 0 .

7、7 % 的 凝 固 剂 与 3 % 的 蔗 糖 ， 加 水 定 容 后 充 分 搅 拌 溶 解 。 将 配 制 好 的 培 养 基 溶 液 装 入 不 锈 钢 锅 ， 加 热 至 沸 腾 ， 使 培 养 基 完 全 溶 解 ， 然 后 用 1 . 0 m o l / L 盐 酸 或 1 . 0 m o l / L 氢 氧 化 钠 溶 液 调 整 p H 值 至 5 . 8 6 . 0 。 培 养 基 加 热 溶 解 后 分 装 到 高 度 为 1 0 c m 1 5 c m 的 培 养 瓶 内 ， 体 积 为 培 养 瓶 容 量 的 3 0 % 4 0 % ， 密 封 后 备 用 。 培 养

8、基 灭 菌 培 养 基 配 制 完 成 后 ， 在 2 4 h 内 完 成 灭 菌 。 将 分 装 好 的 培 养 基 放 入 灭 菌 锅 内 ， 严 格 按 灭 菌 锅 的 使 用 要 求 操 作 ， 灭 菌 气 压 0 . 1 1 M P a ， 温 度 1 2 1 ， 灭 菌 时 间 2 0 m i n 2 5 m i n 。 培 养 基 灭 菌 完 成 后 待 温 度 下 降 到 8 0 以 下 取 出 ， 放 置 在 实 验 台 上 保 存 。 培 养 基 保 存 培 养 基 宜 现 配 现 用 。 确 需 保 存 时 ， 应 放 置 在 干 净 、 避 光 的 室 内 进 行 保

9、存 。 室 温 2 5 以 下 保 存 应 在 7 d 内 使 用 完 ， 2 4 冷 藏 保 存 应 在 1 4 d 内 使 用 完 。 5 初 代 培 养 外 植 体 采 集 5 . 1 . 1 采 集 母 株 要 求 采 集 母 株 为 种 质 优 良 、 性 状 稳 定 、 生 长 健 壮 、 无 病 虫 害 的 软 枣 猕 猴 桃 植 株 。 5 . 1 . 2 采 集 时 间 和 方 法 4 月 至 9 月 ， 选 择 连 续 2 d 以 上 晴 天 的 傍 晚 ， 采 集 母 株 树 冠 外 围 中 上 部 幼 嫩 新 梢 ， 剪 除 叶 片 作 为 外 植 体 备 用 ； 1

10、2 月 至 翌 年 3 月 ， 采 集 一 年 生 枝 条 ， 修 剪 成 2 0 c m 左 右 枝 段 ， 流 水 冲 洗 后 将 其 下 端 浸 泡 在 盛 有 清 水 的 容 器 中 ， 在 2 3 2 5 培 养 箱 中 催 芽 ， 每 2 d 3 d 换 一 次 水 ， 待 叶 芽 萌 动 长 出 新 梢 后 ， 采 集 幼 嫩 新 梢 做 外 植 体 。 5 . 1 . 3 采 集 记 录 采 集 后 标 明 品 种 名 称 、 采 集 地 点 、 采 集 时 间 、 采 集 人 等 信 息 ， 建 立 信 息 档 案 。 外 植 体 处 理 5 . 2 . 1 保 藏 可 用

11、湿 润 毛 巾 等 保 湿 材 料 包 裹 后 保 存 0 . 5 h 4 . 0 h ； 用 泡 沫 保 鲜 箱 配 备 冰 袋 低 温 保 藏 4 8 . 0 h ， 注 意 枝 条 不 可 直 接 接 触 冰 袋 。 5 . 2 . 2 预 处 理D B 1 3 1 0 / T 2 5 1 2 0 2 1 3 用 自 来 水 冲 洗 外 植 体 表 面 ， 将 外 植 体 剪 成 4 . 0 c m 6 . 0 c m 的 带 芽 茎 段 ， 放 入 装 有 0 . 3 % 0 . 5 % 中 性 洗 洁 剂 水 溶 液 的 培 养 瓶 中 ， 于 振 荡 培 养 箱 中 1 0 0 转

12、 / 分 钟 慢 速 振 荡 3 0 m i n ， 再 用 流 水 冲 洗 茎 段 1 . 0 h 2 . 0 h 。 外 植 体 消 毒 及 接 种 5 . 3 . 1 接 种 器 具 准 备 5 . 3 . 1 . 1 超 净 工 作 台 消 毒 接 种 前 使 用 7 5 % 酒 精 将 超 净 工 作 台 的 台 面 及 内 壁 擦 拭 干 净 ， 然 后 启 动 超 净 工 作 台 并 开 启 紫 外 灯 消 毒 3 0 m i n 。 关 闭 紫 外 灯 后 开 启 超 净 工 作 台 风 机 ， 鼓 风 1 0 m i n 后 方 可 进 行 接 种 工 作 。 5 . 3 .

13、 1 . 2 接 种 工 具 灭 菌 接 种 剪 、 枪 状 镊 、 接 种 盘 、 烧 杯 等 接 种 工 具 可 提 前 用 高 压 灭 菌 锅 灭 菌 ， 在 接 种 过 程 中 可 用 置 于 超 净 工 作 台 上 的 酒 精 灯 或 电 热 消 毒 器 灭 菌 。 灭 菌 后 的 接 种 工 具 搁 置 在 无 菌 的 接 种 器 皿 上 ， 待 冷 却 至 室 温 后 方 可 使 用 。 5 . 3 . 2 外 植 体 消 毒 用 7 5 % 酒 精 对 双 手 及 手 腕 消 毒 ， 将 预 处 理 后 的 材 料 置 于 已 消 毒 的 超 净 工 作 台 上 ， 剪 成 带

14、 1 个 或 2 个 芽 的 茎 段 置 于 已 灭 菌 的 烧 杯 中 ， 先 用 7 5 % 酒 精 浸 泡 外 植 体 3 0 s ， 无 菌 水 清 洗 3 次 ， 每 次 3 0 s ， 再 用 1 0 % 次 氯 酸 钠 溶 液 灭 菌 1 0 m i n ， 无 菌 水 清 洗 3 次 ， 每 次 3 0 s ， 用 无 菌 滤 纸 吸 干 外 植 体 表 面 的 水 分 。 也 可 选 用 其 它 外 植 体 消 毒 化 学 药 品 ， 按 L Y / T 1 8 8 2 2 0 1 0 的 有 关 规 定 执 行 。 5 . 3 . 3 接 种 于 超 净 工 作 台 上 将

15、 已 消 毒 的 外 植 体 茎 段 两 端 各 剪 掉 1 m m ， 垂 直 插 入 诱 导 培 养 基 ， 每 个 培 养 瓶 接 种 3 个 茎 段 ， 均 匀 分 布 ， 接 种 后 将 培 养 瓶 瓶 口 在 酒 精 灯 火 焰 上 灼 烧 1 s 2 s ， 迅 速 盖 好 瓶 盖 ， 在 培 养 瓶 瓶 壁 上 标 明 品 种 名 称 、 接 种 日 期 、 接 种 人 等 信 息 ， 放 入 培 养 室 培 养 。 培 养 室 温 度 控 制 在 （ 2 5 1 ） ， 光 照 强 度 为 1 5 0 0 l x 3 0 0 0 l x ， 光 照 时 数 为 1 6 h /

16、 d 。 6 继 代 培 养 在 诱 导 培 养 基 中 培 养 2 0 d 3 0 d 出 芽 后 ， 用 已 灭 菌 的 接 种 剪 ， 将 芽 高 1 . 0 c m 以 上 的 不 定 芽 剪 下 ， 切 割 成 带 1 个 芽 的 茎 段 ， 转 接 至 继 代 培 养 基 中 。 生 长 2 0 d 3 0 d 后 ， 将 继 代 培 养 基 中 获 得 的 不 定 芽 ， 再 次 转 接 至 新 配 制 的 继 代 培 养 基 中 。 此 后 定 期 将 继 代 培 养 基 中 的 不 定 芽 分 割 、 转 接 ， 扩 大 不 定 芽 数 量 。 7 炼 苗 当 不 定 芽 高

17、 度 达 3 c m 以 上 时 ， 先 将 培 养 瓶 置 于 温 度 在 2 0 3 0 的 温 室 进 行 闭 瓶 炼 苗 3 d ， 再 打 开 培 养 瓶 盖 炼 苗 2 d ， 炼 苗 期 间 避 免 强 光 直 射 和 高 温 灼 伤 瓶 苗 。 8 移 栽 容 器D B 1 3 1 0 / T 2 5 1 2 0 2 1 4 容 器 规 格 为 直 径 5 . 0 c m 6 . 0 c m 、 高 度 1 0 . 0 c m 1 2 . 0 c m 的 塑 料 营 养 钵 或 无 纺 布 育 苗 袋 。 基 质 将 蛭 石 和 泥 炭 土 按 1 : 1 体 积 比 混 合

18、均 匀 ， 装 入 容 器 备 用 。 基 质 消 毒 移 栽 前 1 d 2 d 用 5 0 0 倍 8 0 0 倍 的 5 0 % 多 菌 灵 溶 液 浇 透 。 温 室 移 栽 及 管 理 8 . 4 . 1 温 室 移 栽 移 栽 时 间 在 3 月 4 月 进 行 。 用 自 来 水 清 洗 干 净 不 定 芽 基 部 的 培 养 基 ， 剪 去 部 分 老 叶 及 基 部 的 愈 伤 组 织 ， 只 留 两 叶 一 心 ， 将 不 定 芽 基 部 用 1 m g / m L 的 萘 乙 酸 溶 液 速 蘸 5 s 1 0 s ， 快 速 移 栽 到 营 养 钵 或 育 苗 袋 中

19、， 并 浇 透 水 。 移 栽 时 注 意 轻 拿 轻 放 以 免 损 伤 不 定 芽 ， 移 栽 后 7 d 内 用 塑 料 薄 膜 或 保 鲜 膜 覆 盖 以 保 湿 。 8 . 4 . 2 温 湿 度 控 制 移 栽 后 保 持 温 室 温 度 在 2 3 2 8 ， 空 气 湿 度 8 5 % 以 上 。 8 . 4 . 3 水 肥 管 理 移 栽 7 d 1 4 d 后 去 除 薄 膜 ， 浇 水 以 见 干 见 湿 为 原 则 ， 保 证 基 质 不 缺 水 即 可 。 移 栽 苗 长 出 新 叶 后 ， 每 隔 7 d 1 0 d 喷 施 1 次 叶 面 肥 ， 连 续 喷 3

20、次 4 次 。 8 . 4 . 4 病 虫 害 防 治 病 虫 害 防 治 遵 照 G B / T 6 0 0 1 1 9 8 5 的 要 求 执 行 。 9 大 田 移 栽 及 管 理 温 室 幼 苗 高 1 0 c m 以 上 时 ， 浇 一 次 透 水 ， 选 择 在 风 小 、 光 照 弱 的 天 气 的 傍 晚 ， 去 除 营 养 钵 或 育 苗 袋 ， 将 带 土 坨 的 幼 苗 按 株 距 2 0 c m 、 行 距 4 0 c m 移 栽 到 大 田 。 移 栽 后 浇 一 次 透 水 ， 以 后 根 据 土 壤 水 分 状 况 及 时 灌 水 。 前 期 可 追 施 氮 肥

21、， 中 后 期 适 当 增 加 磷 钾 肥 的 使 用 ， 并 做 好 病 虫 害 防 治 及 人 工 除 草 和 松 土 。 1 0 苗 木 出 圃 标 准 侧 根 数 量 4 条 ， 侧 根 长 度 2 0 c m ， 当 年 生 苗 主 干 高 度 1 0 0 c m 、 地 径 0 . 4 c m 、 主 干 完 全 木 质 化 。 1 1 保 管 、 包 装 及 运 输 按 照 G B 1 9 1 7 4 2 0 1 0 中 第 7 章 执 行 。 1 2 技 术 档 案 管 理 按 照 G B / T 6 0 0 1 1 9 8 5 中 第 1 3 章 执 行 。D B 1 3 1

22、 0 / T 2 5 1 2 0 2 1 5 附 录 A （ 资 料 性 ） 软 枣 猕 猴 桃 组 培 苗 培 养 基 配 方 表 A . 1 软 枣 猕 猴 桃 组 培 苗 培 养 基 配 方 表 见 表 A . 1 。 表 A . 1 软 枣 猕 猴 桃 组 培 苗 培 养 基 配 方 表 成分名称 药品名称 诱导培养基m g / L 继代培养基m g / L 大量元素 N H 4 N O 3 8 2 5 1 6 5 0 K N O 3 9 5 0 1 9 0 0 M g S O 4 7 H 2 O 1 8 5 3 7 0 K H 2 P O 4 8 5 1 7 0 C a C l 2

23、2 H 2 O 1 6 5 3 3 0 铁盐 F e S O 4 7 H 2 O 2 7 . 8 2 7 . 8 N a 2 E D T A 3 7 . 2 3 7 . 2 微量元素 M n S O 4 4 H 2 O 2 2 . 3 2 2 . 3 H 3 B O 3 6 . 2 6 . 2 Z n S O 4 7 H 2 O 8 . 6 5 8 . 6 5 K I 0 . 8 3 0 . 8 3 C u S O 4 5 H 2 O 0 . 0 2 5 0 . 0 2 5 N a 2 M o O 4 2 H 2 O 0 . 2 5 0 . 2 5 C o C l 2 6 H 2 O 0 . 0 2 5 0 . 0 2 5 有机物 甘氨酸 2 2 盐酸硫胺素 0 . 1 0 . 1 盐酸吡哆醇 0 . 5 0 . 5 烟酸 0 . 5 0 . 5 肌醇 1 0 0 1 0 0 碳源 蔗糖 3 0 0 0 0 3 0 0 0 0 植物生长 调节剂 6 - B A 0 . 5 0 . 5 Z T 0 . 5 - 凝固剂 琼脂 7 0 0 0 7 0 0 0 p H 6 . 0 6 . 0 注： F e S O 4 7 H 2 O 应先与N a 2 - E D T A 配合成络合物，然后才与其他溶液混合。