WS T 273-2018 梅毒诊断.pdf

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1、ICS 11.020 C 59 WS 中 华 人 民 共 和 国 卫生 行 业 标 准 WS 273 2018 代替 WS 273 2007 梅毒诊断 Diagnosis for syphilis 2018-03-06 发布 2018-08-01 实施 中华人民共和国 国家卫生和计划生育委员会 发布 WS 2732018 I 前 言 本标准第 6章为强制性条款，其余为推荐性条款。 本标准按照 GB/T 1.1 2009给出的规则起草。 本标准代替 WS273 2007梅毒诊断 标准 。 本标准与 WS 273 2007相比，主要技术变化如下： 增加了梅毒血清固定的定义（见 2.3）； 增加了

2、梅毒螺旋体镀银染色检查（见 A.2）、梅毒螺旋体核酸扩增试验（ 见 A.3）、梅毒螺旋体 快速检测试验（见 A.4.3.5）、梅毒螺旋体化学发光免疫试验（见 A.4.3.6）、梅毒螺旋体 IgM 抗体检测（见 A.4.3.8） ； 修改了隐性梅毒流行病学史和临床表现的描述（见 5.4.1和 5.4.2， 2007年 版的 4.4.1和 4.4.2）； 修改了 一期梅毒、二期梅毒、三期梅毒、隐性梅毒的疑似病例诊断要求（见 6.1.1、 6.2.1、 6.3.1、 6.4.1， 2007年版的 6.1.1、 6.2.1、 6.3.1、 6.4.1）； 修改了 胎传梅毒的诊断要求（见 6.5.1和

3、6.5.2， 2007年版的 6.5.1和 6.5.2） 。 本标准起草单位：中国医学科学院皮肤病 医院（ 研究所 ）、天津医科大学总医院、复旦大学附属华 山医院、 南方医科大学皮肤病医院（ 广东省皮肤病医院 ） 、北京协和医院 。 本标准主要起草人： 王千秋 、 刘全忠 、 徐金华 、 陈祥生 、 尹跃平 、 龚向东 、 苏晓红 、 曾学思 、 杨立 刚 、 郑和义。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： GB 15974 1995； WS 273 2007。 WS 2732018 1 梅毒诊断 1 范围 本标准规定了梅毒的诊断 依据、诊断原则、诊断和鉴别诊断 。 本标准适用于全国各级各类

4、 医疗卫生机构及其医务人员 对梅毒的诊断。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本 文件 。 2.1 梅毒 syphilis 苍白 密 螺旋体 苍白亚种 （ treponema pallidumsubp. pallidum）（又名梅毒螺旋体）感染人体所引 起的一种系统性、慢性性传播疾病，可引起人体多系统多器官的损害，产生多种临床表现，导致组织破 坏、功能失常，甚至危及生命。 2.2 前带现象 prozone phenomenon 在 非梅毒螺旋体血清学试验 （如 RPR试验）中， 由于血清抗体水平过高，抗原抗体比例不合适，而 出现 假 阴性 或 弱阳性结果 ， 将此血清稀释后再做血清 学 试验

5、，出现阳性结果，称为前带现象。 这种现象 临床上主要发生在二期梅毒患者 。 2.3 梅毒血清固定 syphilis serofast 梅毒患者经过规范的抗梅毒治疗和 一定时间 的随访（一期 梅毒随访 1年，二期梅毒随访 2年，晚期梅 毒随访 3年）， 非梅毒螺旋体血清学试验 维持在一定滴度（一般在 1:8或以下，但超过 1:8也不鲜见）， 排除再感染、神经梅毒、心血管梅毒和生物学假阳性等，即为梅毒血清固定。 3 缩略语 下列缩略语适用于本 文件 。 CLIA： 化学发光 免疫 试验 （ chemiluminescence immunoassay） ELISA： 酶联免疫吸附试验 （ enzym

6、e-linked immunosorbent assay） FTA-ABS： 荧光螺旋体抗体吸收试验 （ fluorescent treponemal antibody-absorption） PCR： 聚 合酶链反应 （ polymerase chain reaction） RPR： 快速血浆反应素环状卡片试验 （ rapid plasma reagin） RT： 快速 检测 试验 （ rapid test） WS 2732018 2 TPHA： 梅毒螺旋体血凝试验 （ treponema pallidum hemagglutination assay） TPPA： 梅毒螺旋体颗粒凝集试验

7、（ treponema pallidum particle agglutination） TRUST： 甲苯胺红不 加热血清试验 （ toluidine red unheated serum test） VDRL： 性病研究实验室玻片试验 （ venereal disease research laboratory） 4 诊断依据 4.1 一期梅毒 4.1.1 流行 病 学 史 多数有不安全性行为史，或性伴感染史，或多性伴史 。 4.1.2 临床表现 硬下疳： 潜伏期 2周 4周（平均 3周）， 多见于外生殖器 等性接触部 位。 起初表现为小丘疹，逐渐 发展为 直径约 1cm 2cm的 圆形或

8、椭圆形浅在性溃疡，界限清楚、边缘略隆起， 溃疡 面清洁；一般为单发 ； 触诊基底 质 韧，呈 软骨样硬度；无 明显 疼痛 或 触痛。 硬下疳也可不典型，或可因为继发细菌感染，表现 为自觉疼痛、多个溃疡、深或大的溃疡、溃疡面有脓性渗出物、触之不硬等。 腹股沟 或患部近卫 淋巴结肿大 ： 可为单侧或双侧， 无 痛 ，相互孤立而不粘连 ，质硬，不化脓破溃， 其表面 皮肤无 发 红、 发 热 表现 。 4.1.3 实验室检查 4.1.3.1 暗视野显微镜检查 、镀银染色检查或核酸扩增试验 硬下疳 损害 刮取渗液 或淋巴结穿刺液可查见梅毒螺旋体 ，或核酸扩增试验检测梅毒螺旋体核酸阳性 （见 附录 A.1

9、、 A.2、 A.3） 。 4.1.3.2 非梅毒螺旋体血清学试验 阳性 （见 A.4.2）。 如感染不足 6周， 该 试验可为阴性，应于感染 6周后复查。 4.1.3.3. 梅毒螺旋体血清学试验 阳性（见 A.4.3）。 如感染不足 4周， 该 试验 亦 可为阴性，应于感染 4周后复查 。 4.2 二期梅毒 4.2.1 流行病学 史 多数有不安全性行为史，或性伴感染史，或多性伴史； 或有输血史（供血者为早期梅毒病人）。 可 有一期梅毒史，病期 在 2年以内。 4.2.2 临床表现 皮损 ： 呈多形性， 可模拟各种皮肤病皮损， 包括斑疹、斑丘疹、丘疹、 丘疹 鳞屑疹及脓疱疹等，常 泛发对称 ；

10、 掌跖 部 易见暗红斑及脱屑性斑丘疹 ； 外阴及肛周 可见 湿丘疹及扁平湿疣 ；皮损一般无自觉症 状，也 可有瘙痒 ； 口腔可发生黏膜斑 ，或可有生殖器部位黏膜斑； 可发生虫蚀样脱发。二期复发梅毒， 皮损局限，数目较少，形态奇异，常呈环状 、 弓形 或弧形 。 全身浅表淋巴结 可 肿大。 WS 2732018 3 可出现 梅毒性骨关节损害、眼损害、神经系统 及其他 内脏 损害等。 4.2.3 实验室检查 4.2.3.1 暗视野显微镜检查 、镀银染色检查或核酸扩增试验 二期 梅毒 皮损 如 扁平湿 疣 、湿丘疹及黏膜斑， 其刮取渗液可 查见梅毒螺旋体 ，或核酸扩增试验检测 梅毒螺旋体核酸阳性 （

11、见 A.1、 A.2、 A.3） 。 4.2.3.2 非梅毒螺旋体血清学试验 阳性 （见 A.4.2）。 4.2.3.3 梅毒螺旋体血清学 试验 阳性（见 A.4.3）。 4.3 三期梅毒 4.3.1 流行病学 史 多数有不安全性行为史，或性伴感染史，或多性伴史。 可有 一期或二期梅毒史。病期 2年以上。 4.3.2 临床表现 晚期良性梅毒： 皮肤黏膜损害 表现为 头面部及四肢伸侧的结节性梅毒疹， 大关节附近的近关节结节， 皮肤、口腔、舌咽 树胶肿，上腭及鼻中隔 黏膜 树胶肿 可 导致上腭及鼻中隔穿孔和 马 鞍鼻。 也可发生 骨梅 毒 及 其他内脏梅毒 ， 累及 骨骼及关节、 呼吸道、消化道、

12、肝脾、泌尿生殖系 及 内分泌腺等。 眼梅毒：少数可发生虹膜睫状体炎、视网膜炎及间质性角膜炎等，可致失明。 神经梅毒：可发生脑膜神经梅毒（出现头痛、呕吐、颈项强直等）、脑膜血管梅毒（出现闭塞性脑 血管综合征表现如偏瘫、失语、癫痫性发作）、脑实质梅毒（出现麻痹性痴呆、脊髓痨等），也可为无 症状性神经梅毒，仅有脑脊液异常发现。 心血管梅毒 ： 可发生单纯性主动脉炎、主动脉瓣闭锁不全、主动脉瘤等。 4.3.3 实验室检查 4.3.3.1 非梅毒螺旋体血清学试验 阳性 （见 A.4.2）。 4.3.3.2 梅毒螺旋体血清学试验 阳性（见 A.4.3）。 4.3.3.3 脑脊液检查 （主要用于神经梅毒的诊

13、断） 白细胞计数 10106/L，蛋白量 500mg/L，且无其他引起这些异常的原因。脑脊液 VDRL试验 （或 RPR/TRUST试验）或 FTA-ABS试验（或 TPPA/TPHA试验） 阳性 （见 A.4.2、 A.4.3） 。 4.3.3.4 组织病理检查 有三期梅毒的组织病理变化（见 A.5）。 4.4 隐性梅毒（ 潜伏梅毒 ） WS 2732018 4 4.4.1 流行病学 史 多数有不安全性行为史，或性伴感染史，或多性伴史 。 早期隐性梅毒： 在近 2年内有以下情形： a) 有明确的不安全性行为史，而 2 年前无不安全性行为史 ； b) 有过符合一期或二期梅毒的临床表现，但当时未

14、得到诊断和治疗者 ； c) 性伴有明确的早期梅毒感染史。 晚期隐性梅毒： 感染时间 在 2年以上。 无法判断 感染时间 者亦视为晚期隐性梅毒。 既往无明确的梅毒诊断或治疗史。 4.4.2 临床表现 无任何梅毒 性 的 临床表现。 4.4.3 实验室检查 4.4.3.1 非梅毒螺旋体血清学试验 阳性（见 A.4.2） 。 4.4.3.2 梅毒螺旋体血清学试验 阳性 （见 A.4.3）。 4.4.3.3 脑脊液检查 有条件时可进行脑脊液检查以排除无症状神经梅毒。隐性梅毒一般无明显异常。 4.5 胎传梅毒（ 先天梅毒 ） 4.5.1 流行 病 学 史 生母为梅毒 患者 。 4.5.2 临床表现 早期

15、 胎传 梅毒 ： 2岁以内 发病， 类似于获得性二期梅毒 。 发育不良 ； 皮损常为水疱 -大疱、红斑、丘 疹、扁平湿疣 ；口周及肛周形成皲裂，愈后遗留放射状瘢痕； 梅毒性鼻炎及喉炎 ； 骨髓炎、骨软骨炎及 骨膜炎 ； 可有全身淋巴结肿大、肝脾肿大、贫血等。 晚期 胎传 梅毒 ： 2岁以 后发病， 类似于获得性三期梅毒 。出现 炎症性损害 （ 间质性角膜炎、神经性 耳聋、鼻或腭树胶肿、克勒顿关节等 ）或 标 志 性损害 （ 前额圆凸、马鞍鼻、佩刀胫、锁胸关节骨质肥厚 、 赫秦生 齿、腔口周围皮肤放射状裂纹 等） 。 隐性胎传 梅毒： 即 胎传 梅毒未经治疗，无临床症状，梅毒血清 学试验阳性 ，

16、脑脊液 检查 正常，年龄 2岁者为早期 隐性胎传 梅毒， 2岁者为晚期 隐性胎传 梅毒。 4.5.3 实验室检查 4.5.3.1 暗视野显微镜检查 、 镀银染色检查或核酸扩增试验 在早期 胎传 梅毒儿的皮肤黏膜损害 或组织标本 中可查到梅毒螺旋体 ,或 核酸扩增试验检测梅毒螺旋 体核酸阳性 （见 A.1、 A.2、 A.3） 。 WS 2732018 5 4.5.3.2 梅毒 血清学 试验 梅毒血清学试 验如下： 出生时非梅毒螺旋体血清学试验阳性，滴度大于或等于母亲分娩前滴度的 4 倍，且 梅毒螺 旋体 血清学试验阳性 （见 A.4.2） ； 梅毒螺旋体 IgM 抗体检测：阳性（ 见 A.4.

17、3.8） ； 出生时不能诊断胎传梅毒的儿童，任何一次随访过程中非梅毒螺旋体血清学试验由阴转阳，或 滴度上升，且梅毒螺旋体血清学试验阳性（见 A.4.2） ； 在 18 月龄前不能诊断胎传梅毒的儿童， 18 月龄后梅毒螺旋体血清学试验仍阳性（见 A.4.3）。 5 诊断原则 应 根据 流行病学 史、临床 表现 及实验室检查等进行综合分析，作出诊断。 6 诊断 6.1 一期梅毒 6.1.1 疑似病例 应同时符合 4.1.1和 4.1.2，并符合 4.1.3.2或 4.1.3.3中的 一 项 。 6.1.2 确诊病例 应同时符合 6.1.1和 4.1.3.1， 或同时符合 4.1.1、 4.1.2、

18、 4.1.3.2和 4.1.3.3。 6.2 二期梅毒 6.2.1 疑似病例 应同时符合 4.2.1和 4.2.2，并符合 4.2.3.2或 4.2.3.3中的 一 项。 6.2.2 确诊病例 应同时符合 6.2.1和 4.2.3.1， 或同时符合 4.2.1、 4.2.2、 4.2.3.2和 4.2.3.3。 6.3 三期梅毒 6.3.1 疑似病例 应同时符合 4.3.1和 4.3.2，并符合 4.3.3.1或 4.3.3.2中的 一 项。 6.3.2 确诊病例 应同时符合 4.3.1、 4.3.2和 4.3.3.1， 并符合 4.3.3.2或 4.3.3.4中的 一项 。 诊断神经梅毒还

19、应 同时 符合 4.3.3.3。 6.4 隐性梅毒（ 潜伏梅毒 ） 6.4.1 疑似病例 应同时符合 4.4.1和 4.4.2，并符合 4.4.3.1或 4.4.3.2中的 一 项。 WS 2732018 6 6.4.2 确诊病例 应 同时符合 4.4.1、 4.4.2、 4.4.3.1、 4.4.3.2和 4.4.3.3。 6.5 胎传梅毒（ 先天梅毒 ） 6.5.1 疑似病例 所有未经有效治疗的患梅毒母亲所生的婴儿，证据尚不足以确诊胎传 梅毒者。 6.5.2 确诊病例 应同时符合 4.5.1和 4.5.2， 并符合 4.5.3中 的 一项 。 7 鉴别诊断 7.1 一期梅毒 7.1.1 硬

20、下疳 需与软下疳、生殖器疱疹、性病性淋巴肉芽肿、糜烂性龟头炎、白塞病、固定型药疹、癌肿、皮肤 结核等发生在外阴部的红斑、糜烂和溃疡鉴别。 7.1.2 梅毒性腹股沟淋巴结肿大 需与软下疳、性病性淋巴肉芽肿引起的腹股沟淋巴结肿大 ，以及转移癌肿 鉴别。 7.2 二期梅毒 7.2.1 梅毒性斑疹 需与玫瑰糠疹、银屑病、 扁平苔藓、手足癣、 白癜风、花斑癣、药疹、多形红斑、远心性环状红斑 等鉴别。 7.2.2 梅毒性丘疹和扁平湿疣 需与银屑病、体癣、扁平苔藓、毛发红糠疹、尖锐湿疣等鉴别。 7.2.3 梅毒性脓疱疹 需与各种脓疱病、脓疱疮、臁疮、雅司、聚合性痤疮等鉴别。 7.2.4 黏膜梅毒疹 需与传

21、染性单核细胞增多症、地图舌、鹅口疮、扁平苔藓 、化脓性扁桃体炎 等鉴别。 7.2.5 梅毒性脱发 需与斑秃鉴别。 7.3 三期梅毒 7.3.1 结节性梅毒疹 需与寻常狼疮、结节病、瘤型麻风等鉴别。 WS 2732018 7 7.3.2 树胶肿 需与寻常狼疮、瘤型麻风、硬红斑、结节性红斑、脂膜炎、癌肿等鉴别。 7.3.3 神经梅毒 脑膜 神经梅毒 需与 各种原因引起的脑膜炎 鉴别。脑膜血管梅毒需与各种原因引起的脑卒中鉴别。麻 痹 性痴呆 需与 各种精神疾患、 阿尔茨海默病（老年性痴呆）、慢性酒精中毒和癫痫发作等鉴别。脊髓痨 需与埃迪（ Adie）综合征、糖尿病性假脊髓痨等鉴别。 7.3.4 心血

22、管梅毒 梅毒性主动脉瘤需与主动脉硬化症鉴别。梅毒性冠状动脉病需与冠状动脉粥样硬化鉴别。梅毒性主 动脉瓣闭锁不全需与 各种原因引起的 主动脉瓣闭锁不全鉴别。 7.4 潜伏梅毒（隐性梅毒） 无明显临床表现，但梅毒血清学试验阳性，需要与梅毒治疗后的血清固定现象进行鉴别。 WS 2732018 8 A 附 录 A （规范性附录） 梅毒的实验室检查 A.1 梅毒螺旋体暗视野 显微镜 检查 A.1.1 原理 暗视野 显微镜 检查是采用一个特殊的聚光器，分为干系和湿系两种，其中央均为黑漆所遮蔽， 仅在 圆周边留有光线斜角处，光线只可从其圆周边缘斜角射到载玻片上。梅毒螺旋体检查一般采用湿系聚光 器。倘若斜射光

23、线遇到载玻片上的物体，如螺旋体等，物体会发光显现。 A.1.2 材料 暗视野显微镜、钝刀（刮勺）、载玻片、注射器、注射针头、无菌等渗盐水。 A.1.3 取材 A.1.3.1 皮肤黏膜损害取材：首先在载玻片（厚度为 1.0 mm 1.2mm）上滴加 50 L 100 L盐水备用。 然后用棉拭子取无菌盐水轻轻擦去皮损上的污物。如皮损上有痂皮，可用钝刀小心除去。再用钝刀轻轻 地刮数次（避免出血），取组织渗液与载玻片上的盐水混匀，加盖玻片置暗视野显微镜下检 查。 A.1.3.2 淋巴结取材：消毒淋巴结表面皮肤，用无菌干棉球擦干。用 1mL无菌注射器配 12号针头，吸取 无菌等渗盐水 0.25mL 0.

24、5mL，以无菌操作穿刺淋巴结并注入盐水，再吸入注射器内，反复 2次 3次后， 取少量淋巴液于载玻片上，加盖玻片，置暗视野显微镜下检查。 A.1.4 方法 A.1.4.1 在暗视野聚光器（此法用湿系暗视野聚光器）上加一滴甘油缓冲液 甘油和 0.1mol/L 磷酸缓 冲液（ PBS） ， pH 7.0,按 7:3配制） 。 A.1.4.2 载玻片置载物台上，上升聚光器使甘油缓冲液接触载玻片，先用 10倍物镜，使物像清晰，再 用 40倍物镜观察，寻找有特征形态和运动方式的梅毒螺旋体。 A.1.5 结果 及解释 A.1.5.1 暗视野显微镜下，典型的梅毒螺旋体呈白色发光 ， 其螺旋较密而均匀 ， 平均

25、 8 14个。运动规 律，运动性较强， 观察其运动形式有助于与其他螺旋体相鉴别。 见到梅毒螺旋体，结合典型临床表现， 有确诊梅毒的价值。 其运动方式包括 如下： a) 旋转式，围绕其长轴旋转； b) 蛇行式 ， 全身弯曲如蛇行； c) 伸缩其螺旋间距离而移动。 A.1.5.2 未检出螺旋体不能排除梅毒的诊断，阴性结果可能说明： a) 螺旋体数量不足 （ 单次暗视野显微镜检查 其敏感性低于 50 ） ； WS 2732018 9 b) 患者已接受抗生素或杀灭梅毒螺旋体的药物治疗 ； c) 损害接近自然消退。 A.2 梅毒螺旋体 镀银染色 检查 A.2.1 原理 梅毒螺旋体具有亲银性，可被银溶液染

26、成棕黑色， 在普通 显微镜下 可 观察到梅毒螺旋体。 A.2.2 材料 普通光学 显微镜、钝刀（刮勺）、 加拿大树胶、罗吉氏固定液、鞣酸媒染剂、 Fontana银溶液、无 水酒精 。 A.2.3 取材 同 A.1.3。 A.2.4 方法 A.2.4.1 涂片干燥：将标本涂于干净载玻片涂成薄片，于空气中自然干燥（不可用火干燥固定） 。 A.2.4.2 固定：用罗吉氏固定液将涂片固定 2min 3min。 A.2.4.3 洗涤：用无水酒精洗涤玻 片上的油污。 A.2.4.4 媒染：加鞣酸媒染剂 2 3滴于涂片上，略加热产生蒸汽，染 30s。 A.2.4.5 银染：水洗，加 Fontana银溶液于涂

27、片上，略加热产生蒸汽，染 30s。 A.2.4.6 镜检：水洗，待干，加盖玻片后，以加拿大树胶封固（封固的目的是防止用镜油时，使标本 脱色，同时有利于长期保存），用油镜检查。 A.2.5 结果 及解释 A.2.5.1 显微镜下观察：梅毒螺旋体染成棕褐色。 A.2.5.2 临床意义的解释同暗视野显微镜检查法。标本阳性时，若有典型的皮肤黏膜损害者可确诊。 如标本阴性时，不能完全排除梅毒，必要时应复查。应注意与腐生 螺旋体 鉴别。 A.3 梅毒螺旋体 核酸扩增试验 A.3.1 原理 采用聚合 酶链反应（ PCR）法。通过特异引物和特定条件下的热循环反应， 对 皮损部位组织液、淋 巴穿刺液 及脑脊液等

28、样品 中 的梅毒螺旋体 进行 核酸检测 ， 在早期梅毒、神经梅毒和先天梅毒等诊断中具 有一定的价值。 A.3.2 材料 A.3.2.1 PCR引物 ： 梅毒螺旋体核酸扩增检测一般使用 bmp、 tpp47、 polA等基因序列的引物。 A.3.2.2 主要试剂 ： 包括核酸提取纯化、 PCR所需的试剂。 A.3.3 取材 同 A.1.3。 WS 2732018 10 A.3.4 方法 A.3.4.1 核酸提取：可使用硅胶柱离心、磁性硅胶颗粒分离等方法，商品化试剂盒则按说明书操作进 行核酸提取。 A.3.4.2 PCR扩增反应： PCR扩增反应体系包括四种脱氧核苷酸、 PCR缓冲液、 Taq D

29、NA聚合酶、引物（套 式 PCR包括内引物和外引物），根据不同检测目的使用相应的程序进行扩增。 A.3.4.3 扩增产物分析：目前常用荧光定量分析方法。 A.3.5 结果 及解释 A.3.5.1 每一次检测需同时做阳性对照、阴性对照，只有阳性对照扩增出预期的片段、阴性对照没有 扩增出任何片段视为实验成立，可作出核酸检测阳性或阴性结果的判定。 A.3.5.2 临床意义同暗视野显微镜检查，但 PCR检查的敏感性高于暗视野显微镜检查。 A.4 梅毒血清学检查 A.4.1 意义和分类 当人体感染梅毒螺旋体后 4周 10周，血清中 可产生一定数量的抗类脂质抗原的非特异性 抗体（反 应素） 和抗梅毒螺旋体

30、抗原的特异性抗体。这些抗体均可用免疫学方法进行检测。血清学检查是辅助诊 断梅毒的重要手段。 根据检测所用抗原不同，梅毒血清学试验分为两大类：一类为 非梅毒螺旋体血清学试验 （又称梅毒 非特异性抗体试验） ， 主要 包括 VDRL、 RPR、 TRUST等； 另一类为 梅毒螺旋体血清学试验 （又称梅毒特异 性抗体试验） ，包括 TPPA、 FTA-ABS、 ELISA、 CLIA、 RT等。 临床上 可 根据 实验室条件 选择任何一类 血清 学检测方法作为筛查 （初筛） 试验 ，但初筛阳性结果需经另一类 梅毒血清学检测方法 复检确证，才能够 为临床诊断或疫情报告 提供依据。 有条件时亦可同时做这

31、两类试验。 A.4.2 非梅毒螺旋体血清学试验 A.4.2.1 原理 梅毒螺旋体一旦感染人体，人体迅速对被损害的宿主细胞以及梅毒螺旋体细胞表面所释放的类脂物 质作出免疫应答，在 3周 4周产生抗类脂抗原的抗体（ 亦称为 反应素）。这些抗体主要是 IgG和 IgM型混 合抗体。非梅毒螺旋体 试验是使用心磷脂、卵磷脂及胆固醇作为抗原的絮状凝集试验。反应素与心磷脂 形成抗原抗体反应，卵磷脂可加强心磷脂的抗原性，胆固醇可增强抗原的敏感性。心磷脂、卵磷脂遇水 形成胶体溶液，胆固醇遇 水形成结晶。当抗原与抗体（反应素）混合发生反应时，后者即粘附胶体微粒 的周围，形成疏水性薄膜。由于摇动、碰撞，使颗粒与颗粒

32、互相粘附而形成肉眼可见的颗粒凝集和沉淀， 即为阳性反应。如遇到非梅毒血清，因体液中的白蛋白多于球蛋白，而白蛋白对胶体颗粒有保护作用， 形成亲水性薄膜，即使同样摇动、碰撞，由于抗原颗粒周围没有粘附免疫球蛋白的作用，不能形成较大 颗粒，无肉眼可见的凝集和沉淀，因此为阴性反应。 VDRL、 RPR和 TRUST等试验均为此类试验，它们所采 用的抗原成分相同，敏感性和特异性基本相似。 A.4.2.2 VDRL玻片试验 A.4.2.2.1 材料 具 体材料如下： WS 2732018 11 a) VDRL 试剂盒 ：含 VDRL 抗原（ 0.5mL） ； VDRL 缓冲液 ， pH（ 6.00.1） ，

33、其配方 为 中性福尔马 林 0.5 mL， Na2HPO40.037g， KH2PO40.17g， NaCl10.0g， 蒸馏水 1000mL； 标准针头 （ 60 滴 /mL1 滴 /mL）， 直径 14mm 漆圈玻片 ； VDRL 试验结果图片 ； b) 其他： 0.85 NaCl 溶液（等渗盐水） ； 可调水平旋转器。 A.4.2.2.2 VDRL抗原配制方法 具体方法如下： a) 吸取 0.3mL VDRL 缓冲液置 30mL 小瓶 ； b) 吸取 0.3mL VDRL 抗原迅速滴入小瓶内 VDRL 缓冲液中（约 4s），随后摇动 10s，使之混匀 ； c) 立即加 2.4mL VDR

34、L 缓冲液，盖上瓶盖，来回颠倒摇动小瓶 10s 约 30 次，即为 VDRL 抗原，此 抗原只能用 1d。 A.4.2.2.3 定性试验 具体步骤如下： a) 血清标本需 56 灭活 30min 备用 ； b) 吸取 0.05mL 血清 加 入玻片圈内，将血清涂开至整个圈内 ； c) 用标准针头加入 1 滴抗原 。 d) 将玻片置旋转器上摇动 4 min， （ 1805） 次 /min，立即置 1010 倍显微镜下观察。 A.4.2.2.4 定量试验 经 VDRL定性试验为阳性、弱阳性， 或为 可疑反应或阴性但临床怀疑为梅毒者，需做定量试验，前者 需明确抗体滴度，后者为排除 “ 前带现象 ”，

35、具体步骤如下： a) 在反应板 1 8 孔各加等渗盐水 0.05 mL。 b) 吸取 0.05 mL 血清标本（血清已灭活）置第 1 孔与等渗盐水混匀，吸取 0.05 mL 稀释液至第 2 孔混匀，再吸取 0.05 mL 至第 3 孔，如此连续稀释至第 8 孔，弃 0.05 mL 稀释液。稀释度为原 倍、 1:2、 1:4、 1:8、 1:16、 1:32、 1:64、 1:128，必要时可稀释至更高倍数。 c) 每个稀释度加入抗原 1 滴 。 d) 旋转速度和时间同定性试验。 A.4.2.2.5 结果 判读及报告 3+ 4+： 大或中等大小的絮状物，液体清亮 。 2+：小到中等大小的 絮状物

36、，液体较清亮 。 1+：小的 絮状物，均匀分布，液体混浊 。 ：仅见 抗原颗粒 集于中央一点或均匀分散。 结果报告：出现 1+ 4+强度的凝集反应报告阳性，为产生凝集反应报告阴性。 A.4.2.3 RPR环状卡片试验 A.4.2.3.1 原理 RPR试验是 VDRL试验的一种改良方法。该法是在抗原中加入活性炭颗粒作为指示物， 加入了氯化胆 碱，因此 血清不需灭活 。 特制的白色纸卡替代了玻片。试验结果易于判断，肉眼即可观察 。 也可用血浆 进行检测，试验结果可保存。抗原放 4 冰箱可保存 1年。 A.4.2.3.2 材料 WS 2732018 12 材料如下： a) RPR 试剂盒 ：含 RP

37、R 抗原 ， 直径为 18mm 圆圈的特制白色反应卡片 ， 标准针头 （ 60 滴 /mL1 滴 /mL） ， RPR 试验结果图片 ； b) 其他： 可调水平旋转器。 A.4.2.3.3 定性试验 具体步骤如下： a) 吸取 0.05 mL 血清或血浆加于卡片圈内，并均匀地涂布在整个圈内（每张纸卡有 10 个或 12 个反应圈） ； b) 将抗原轻轻摇匀，用标准针头吸取抗原，每个标本加 1 滴抗原 ； c) 将卡片置水平旋转器旋转 8 min， （ 1005） r/min； d) 立即在明亮光线下观察结果。 A.4.2.3.4 结果 判读及报告 参见 A.4.2.2.5。 A.4.2.3.5

38、 定量试验 RPR定量试验的指证与 VDRL试验相同。 其具体步骤如下 ： a) 在圈内加入 0.05 mL 等渗盐水（一般作 6 8 个稀释度），勿将盐水涂开 。 b) 吸取 0.05 mL 血清或血浆作系列稀释（ 1:2 1:64），当稀释到最后的第 6 孔时，弃去 0.05 mL 稀释液。从第 6 孔起将血清稀释液涂布整个圈内，再涂布第 5 孔，依此向前到第 1 孔。 c) 滴加抗原，旋转时间、速度和观察结果同定性试验。 A.4.2.4 TRUST试验 A.4.2.4.1 原理 TRUST试验原理与 RPR试验原理相同。唯 TRUST试验的抗原中加入甲苯胺红颗粒代替活性炭颗粒指示 物，使

39、阳性结果出现红色絮状现象，阴性结果见红色颗粒集于中央或均匀分散。 A.4.2.4.2 方法 TRUST试验方法及结果 判 读 均与 RPR试验相同。 A.4.2.5 注意事项 A.4.2.5.1 实验环境温度应为 23 29 ，抗原应保存于 4 冰箱，试验前应恢复到室温。抗原应防止 冻结，以免抗原被破坏。 A.4.2.5.2 校 准针头， VDRL、 RPR和 TRUST等抗原为 （ 601） 滴 /mL。 A.4.2.5.3 血液标本应防止污染，放置室温应在 24 h内完成。如血清 56 灭活或放 4 保存，在试验前 应恢复 适宜 温 度后再开始试验。 A.4.2.5.4 试验完毕，应立即观

40、察结果。 A.4.2.6 临床意义 A.4.2.6.1 非梅毒螺旋体血清学试验方法简便、快速，敏感性和特异性较 高 。对一期梅毒的敏感性为 7 4 87，二期梅毒达 100，三期梅毒 34 94。特异性 96 99。 WS 2732018 13 A.4.2.6.2 非梅毒螺旋体血清学试验适用于各期梅毒的诊断。早期梅毒经治疗后血清滴度可下降或转 阴，故可用于疗效观察、判愈、判定复发或再感染。也适用于人群的筛查、产前检查及健康体检等。 A.4.2.6.3 非梅毒螺旋体血清学试验 可出现“前带现象”，应在临床上注意识别。 A.4.2.6.4 VDRL试验适用于神经梅毒的脑脊液检查 ， 特异性高，但敏

41、感性低。 A.4.2.6.5 非梅毒螺旋体血清学试验可在某些传染病及胶原 性疾病 时出现假阳性反应，因此对阳性反 应结合临床进行鉴别，或作梅毒螺旋体血清学试验以进一步证实。 A.4.3 梅毒螺旋体血清学试验 A.4.3.1 基本原理 梅毒螺旋体血清学试验的基本原理 ： 采用梅毒螺旋体 提取物或其重组蛋白 作 为 抗原，为特异性抗原， 检测血清中抗梅毒螺旋体 IgG或 IgM抗体，其敏感性和特异性均较高。 因 TPHA的基本原理和方法与 TPPA 相似，且目前临床较少应用，故不赘述。 A.4.3.2 梅毒螺旋体颗粒凝集试验（ TPPA） A.4.3.2.1 原理 TPPA试验用梅毒螺旋体 提取物

42、 致敏明胶颗粒，此致敏颗粒与人血清中的抗梅 毒螺旋体抗体结合，产 生可见的凝集反应。明胶颗粒为玫瑰红色，便于肉眼观察结果。 A.4.3.2.2 材料 具体材料如下： a) TPPA 试剂盒 ：含 蒸馏水（标记 为 A），用于溶解致敏颗粒、未致敏颗粒和质控血清；标本稀释 液（标记 为 B），用于稀释血清标本；致敏颗粒（标记 为 C），冷冻干燥品，用前 30 min 按规 定量加 A 液溶解并混匀；未致敏颗粒（标记 为 D），冷冻干燥品，用前 30 min 按规定量加 A 液溶解并混匀；质控血清（标记 为 E），冷冻干燥品，用时按规定量加入 A 液 ； b) 其他： U 型微量反应板 、 移液 器

43、 、 保湿盒 、 微量板振荡器 。 A.4.3.2.3 方法 试验前试剂应恢复到 15 30 ，具体方法如下： a) B 液加至微量反应板孔内，第 1 孔 25 L，第 2 孔 100 L，第 3、 4 孔各 25 L 液 ； b) 取血清 25 L 加至第 1 孔，混匀后取 25 L 至第 2 孔，混匀后取 25 L 至第 3 孔，混匀后取 25 L 至第 4 孔，混匀后弃去 25 L； c) 第 3 孔加 D 液（未致敏颗粒） 25 L，第 4 孔加 C 液（致敏颗粒） 25 L； d) 将反应板置振荡器振荡 30 s； e) 置有盖湿盒， 15 25避光孵育 2 h 后，或放 4冰箱过夜

44、观察结果。 A.4.3.2.4 结果 颗粒光滑覆盖整个孔底，有时边缘有折叠 4+阳性 颗粒光滑覆盖大部分孔底 3+阳性 颗粒光滑集聚覆盖孔底，周围有一颗粒环 2+阳性 颗粒光滑集聚覆盖孔底，周围有一明显颗粒环 1+阳性 颗粒沉集孔底，中央形成一小点 可疑 颗粒紧密沉积 于 孔底中央 阴性 WS 2732018 14 A.4.3.2.5 报告方法 阳性报告：定性试验，血清在 1:80以上稀释度与致敏颗粒发生凝集反应（ 1+或更强），与未致敏颗 粒（第 3孔）不发生凝集反应。 阴 性报告：血清与致敏颗粒和未致敏颗粒均不发生凝集反应。 A.4.3.2.6 注意事项 微量反应板要清洁干净，孔内无异物

45、。 加入血清后，使用微量板振荡器振荡反应板，而不可使用水平旋转仪 。 试剂盒不可置于 0 以下，防止冻结 ， 不同批号试剂不可混合使用 。 如未致敏颗粒出现凝集反应，应将血清进行吸收处理后再进行试验，或改用其他试验方法。 A.4.3.2.7 血清吸收处理 具体步骤如下： a) 取 0.95mL 已恢复体积的未致敏颗粒加入清洁的小试管内 ； b) 试管内加入 50 L 血清标本并充分混匀，置 15 25 20 min 或更长时间 ； c) 离心 2000r/min， 5min，取 25 L 上清液（血清标本稀释 1:20）置第 3 孔，注意不要混入颗粒 ； d) 自第 4 孔第 10 孔各加 2

46、5 LB 液 ； e) 自第 3 孔吸 25 L 至第 4 孔，混匀后吸 25 L 至第 5 孔 ， 如此稀释至第 10 孔，弃去 25 L； f) 按定量试验法加入 D 液和 C 液，将反应板置微量板振荡器上振荡 30 s，置湿盒内， 15 25 孵育 2 h 观察结果。 A.4.3.3 荧光螺旋体抗体吸收试验（ FTA-ABS） A.4.3.3.1 原理 FTA-ABS试验以完整形态的梅毒螺旋体 Nichol株 作为抗原，加上经吸收剂（用 梅毒 螺旋体 Reiter株 制备而成）处理过的患者血清形成抗原抗体复合物，再加 异硫氰酸荧光素 标记的抗人免疫球蛋白，与血 清梅毒螺旋体抗体结合。在荧

47、光显微镜下，螺旋体显示苹果绿色的荧光，即为阳性反应。 A.4.3.3.2 材料 具体材料如下： a) 梅毒螺旋体抗原玻片，有直径 0.5 cm 涂布梅毒螺旋体的圆圈，在高倍镜下每视野不少于 30 条螺旋体，丙酮固定 ； b) 吸收剂（ 5 mL 冷冻干燥品），由体外培养的 Reiter 株螺旋体制备而成 ， 使用前用无菌蒸馏水 恢复原体积 ； c) 荧光抗体，用荧光素标记羊或鼠抗人免疫球蛋白 ； d) 血清稀释板。 A.4.3.3.3 方法 具体方法如下： a) 将血清标本于 56 灭活 30 min，备用 ； b) 吸收剂加入 5 mL 无菌蒸馏水，用作血清的稀释 ； c) 血清标本和吸收剂

48、按 1:5 1:20 稀释，混匀后置有盖湿盒内于 35 37 孵育 30 min； WS 2732018 15 d) 将系列稀释的血清分别加到抗原片上（每孔不少于 30 L），放入有盖湿盒内，置 35 37 孵育 30 min； e) 用 0.01mol/L 的 PBS 冲洗抗原片，用磁力搅拌器低速以 0.01mol/L PBS 溶液洗涤抗原片，每 5 min 更换 PBS 液 1 次，共 3 次 ， 最后一次用蒸馏水冲洗一遍，冷风吹干备用 ； f) 抗原片每个圈内加 30 L 荧光抗体（荧光抗体稀释为工作液），放湿盒 35 37 孵育 30min； 重复步骤 e 的洗涤和吹干 ； g) 抗原片加固封剂（甘油缓冲液） 1 滴，覆以盖玻片 ， 在荧光显微镜下观察 ； h) 试验对照：每批次试验包括下列对照 ： 4+阳性血清和 1+阳性血清对照，血清用 PBS 液和吸收剂分别按 1:5 1:20 稀释 ； 非特异血清对照 ； 染色对照：用 0.01 mol/L PBS 和吸收剂分别替代