SN T 5200-2020 穿山甲物种鉴定技术规范.pdf

《SN T 5200-2020 穿山甲物种鉴定技术规范.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《SN T 5200-2020 穿山甲物种鉴定技术规范.pdf（20页珍藏版）》请在麦多课文档分享上搜索。

1、以正式出版文本为准 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5200 2020 代替 SN/T 11622002 穿山甲物种鉴定技术规范 Protocol for species identification of Manis Spp. 中华人民共和国海关总署发 布 ICS 65.020.01 CCS B 43 2020-12-30 发布 2021-07-01 实施 以正式出版文本为准 中华人民共和国出入境检验检疫 开本 8801230 1/16 印张 1.25 字数 37 千字 2021 年 6 月第一版 2021 年 6 月第一次印刷 印数 1500 书号： 15517532 定价

2、 20.00 元 穿山甲物种鉴定技术规范 行 业 标 准 SN/T 52002020 * * * 北京市朝阳区东四环南路甲 1 号（100023） 编辑部：（010）65194242-7509 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 中国海关出版社有限公司出版发行 网址 以正式出版文本为准 I SN/T 5200 2020 前 言 本文件按照 GB/T 1.12020 的规定起草。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本文件起草单位：中国检验检疫科学研究院、东北林业大学。 本文件主要起草人：吴绍强、吕继洲、林祥梅、袁向芬、王晓龙。 以正式出版文本为准 以正式出版文本为准 1 SN/T 5200

3、 2020 穿山甲物种鉴定技术规范 1范围 本文件规定了中华穿山甲、马来穿山甲、印度穿山甲、南非穿山甲、大穿山甲、长尾穿山甲和 树穿山甲等物种的形态特征和 SYBR Green I 实时荧光 PCR 鉴定方法，以及根据 PCR 产物测序结果和 序列分析对比判定穿山甲物种种类的方法。 本文件适用于中华穿山甲、马来穿山甲、印度穿山甲、南非穿山甲、大穿山甲、长尾穿山甲和 树穿山甲及其产品的物种鉴定。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适 用于本文

4、件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法 GB 19489实验室生物安全通用要求 GB/T 27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测。 3术语、定义和缩略语 本文件没有需要界定的术语和定义。下列缩略语适用于本文件。 Cytb ：细胞色素氧化酶 b（cytochrome b） DNA ：脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid） dNTP ：脱氧核糖核苷三磷酸（deoxy -ribonucleoside triphosphate） Real-time PCR ：实时荧光聚合酶链式反应（real -time polymerase chain reaction） S

5、DS ：十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate） 4形态特征 中华穿山甲、马来穿山甲、印度穿山甲、南非穿山甲、大穿山甲、长尾穿山甲和树穿山甲成体 典型形态特征见附录 A。 中华穿山甲、马来穿山甲、树穿山甲以及大穿山甲四种穿山甲鳞片典型形态特征见附录 B。 根据上述特征，可初步鉴别活体穿山甲或疑似穿山甲鳞片样品的物种种类，精确鉴定应进一步 核酸扩增、测序检测确定物种。 5Real -time PCR 检测 5.1仪器与设备 5.1.1Real -time PCR 仪。 以正式出版文本为准 2 SN/T 5200 2020 5.1.2组织研磨器。 5.1.3超净工作台。 5.

6、1.4制冰机。 5.1.5高速冷冻离心机。 5.1.6水浴锅。 5.1.7台式小型离心机。 5.1.8常规冰箱。 5.1.9旋涡混匀器。 5.1.10电泳仪。 5.1.11凝胶成像系统。 5.1.12微量可调移液器（10 L、100 L、1 000 L）及配套吸头。 5.2试剂与材料 5.2.1无水乙醇。 5.2.2蛋白酶 K（20 mmol/ L ）。 5.2.350TAE 电泳缓冲液：试剂配制见附录 C 中 C.1。 5.2.4穿山甲的基因组 DNA 阳性对照：阳性材料制备见附录 C 中 C.2。 5.2.5Tirs-Hcl 缓冲液：试剂配制见附录 C 中 C.3。 5.2.6生理盐水（0

7、.85%NaCl 溶液）：试剂配制见附录 C 中 C.4。 5.2.7EDTA 溶液：试剂配制见附录 C 中 C.5。 5.2.8TES 缓冲液：试剂配制见附录 C 中 C.6。 5.2.910% SDS 溶液：试剂配制见附录 C 中 C.7。 5.2.10氯化钠。 5.2.11三氯甲烷。 5.2.12异戊醇。 5.2.13冰乙酸。 5.2.14Tris-饱和酚。 5.2.1570% 乙醇。 5.2.16SYBR Premix Ex Taq 酶 1） 。 5.2.17灭菌双蒸水：应符合 GB/T 6682 中一级水的规格：见附录 C 中 C.8。 5.3引物对 MAF: 5 null CTAT

8、TCTTAGCAATACAYTACACRG -3null，扩增中华穿山甲、马来穿山甲、印度穿山 甲、南非穿山甲、大穿山甲、长尾穿山甲和树穿山甲 Cytb 基因通用上游引物。 MAR: 5 null ATTCCGATGTTTCATGTTYCRTTRT -3null，扩增中华穿山甲、马来穿山甲、印度穿山 甲、南非穿山甲、大穿山甲、长尾穿山甲和树穿山甲 Cytb 基因通用下游引物。 用双蒸水将引物稀释为 20 mol/L 工作浓度，-20 保存备用。 除特别说明以外，本标准所用试剂均为分析纯，试验用水应符合 GB/T 6682、GB 19489 的规定。 1）TAKARA 宝生物公司 SYBR 荧光

9、定量试剂盒是适合的市售产品的实例。给出这一信息是为了方便本标准的 使用者，并不表示对这一产品的认可。 以正式出版文本为准 3 SN/T 5200 2020 5.4检测方法 5.4.1样品的处理 5.4.1.1直接取新鲜的、冷藏的或冷冻的样品 200 L 用于核酸提取。 5.4.1.2使用生理盐水（5.2.6）洗去血污，取 100mg200 mg 样品置于液氮中充分研磨，将所研磨的粉 末放入 1.5 mL 的离心管中用于核酸提取。 5.4.2样品 DNA 的提取 采用以下方法提取 DNA，也可使用等效的商品化 DNA 提取试剂盒，按操作说明书进行操作。 5.4.2.1 取处理好的样品（5.4.1

10、），加入 450 L TES 缓冲液（5.2.8）混匀后再加入 50 L 10%SDS 溶液， 5 L 蛋白酶 K（5.2.2），充分混匀后，于 56 保温 4 h，每 2 h 摇 1 次。 5.4.2.2加入等体积的 Tris - 饱和酚（500 L），混匀。 5.4.2.3取上层水相于新管，加入等体积的酚三氯甲烷（5.2.11）异戊醇（25 : 24 : 1）（试剂配制见 C.9）混匀，12 000 r/min 室温离心 5 min。 5.4.2.4取上层水相于新管，加入等体积的三氯甲烷（5.2.11）混匀，12 000 r/min 室温离心 5 min。 5.4.2.5 取上层水相，加入

11、2.5倍体积的无水乙醇（5.2.1），混匀，置于-20 中2 h以上或过夜， 12 000 r/min 室温离心 15 min。 5.4.2.6弃上清，加入 1 mL 预冷的 70% 乙醇（5.2.15），12 000 r/min 室温离心 5 min。 5.4.2.7吸弃残留液体，室温干燥 10 min 左右，用 50 L 灭菌双蒸水（5.2.17）溶解，-20 保存备用。 5.4.3SYBR Green I 实时荧光 PCR 扩增检测 5.4.3.1SYBR Green I 实时荧光 PCR 反应体系 5.4.3.1.1SYBR Premix Ex Taq 酶 （2），12.5 L。 5.

12、4.3.1.2MAF（20 pmol/ L），2.0 L。 5.4.3.1.3MAR（20 pmol/ L），1.0 L。 5.4.3.1.4样品 DNA 模板，1 L。 5.4.3.1.5灭菌双蒸水（5.2.17），3.5 L。 总体积为 20 L 体系，用漩涡混匀器进行混匀，瞬间离心，4备用。 注：可采用其他商品化的 SYBR Green I 实时荧光 PCR 的扩增试剂盒 2） 。 样品检测时，同时要设阳性对照（5.2.4）和空白对照。阳性对照是已知的穿山甲提取的基因组 DNA（见附录 C 中 C.2），空白对照是灭菌双蒸水（5.2.17）。 5.4.3.2 SYBR Green I 实

13、时荧光 PCR 程序及反应条件 反应参数为95 2 min，95 变性15 s，60 退火/延伸30 s，40个循环。在每一循环的退火/延 伸步骤 60 结束时读取荧光信号；总延伸结束后，加入熔解曲线分析步骤（60 ，2min；以 0.1 /s 的速率开温；直到 95 ；整个过程进行连续采集荧光。） 5.5结果判定 5.5.1实验成立的判定依据 在扩增动力学曲线图中，阳性对照可扩增出典型 S 型曲线，熔解曲线峰单一，扩增产物的 Tm 值 均一，典型曲线图见附录 D ；与此同时，阴性对照既无典型 S 型扩增曲线，也无溶解曲线峰。则阳 2）如凯杰公司的 QuantiNDva SYBRGreen P

14、CR Kit 荧光定量试剂盒。 以正式出版文本为准 4 SN/T 5200 2020 性对照与阴性对照成立，SYBR Green I 实时荧光 PCR 成功。 5.5.2疑似样本的判定依据 若样品出现典型 S 型扩增曲线，Ct 值 35，且溶解曲线峰单一且与阳性对照扩增产物 Tm 值相似， 则可判定样品中疑似含有穿山甲源性成分，后将扩增获得的 Cytb 序列进行测序；若样品 35 Ct 值 40，则重复实验，继续出现 35 Ct 值 40，且样品溶解曲线峰单一且与阳性对照扩增产物 Tm 值相 似，则可判定样品中疑似含有穿山甲源性成分，否则判定样品穿山甲源性成分阴性；若无目的条带， 判定样品穿山

15、甲源性成分阴性。 5.5.3穿山甲物种的判定 将测序获得序列与中华穿山甲、马来穿山甲、南非穿山甲、印度穿山甲、大穿山甲、长尾穿山 甲和树穿山甲 Cytb 参考序列（见附录 E）进行多重序列比对，如果与所获序列同源性最近的序列属 于中华穿山甲、马来穿山甲等 7 种穿山甲中的一种，且同源性达到 98% 以上时，可判定对应实验的 结果为阳性，进而确定检出中华穿山甲、马来穿山甲、南非穿山甲、印度穿山甲、大穿山甲、长尾穿 山甲或树穿山甲源性成分。 以正式出版文本为准 5 SN/T 5200 2020 附录A （规范性） 七种穿山甲形态特征概述 A.1中华穿山甲形态特征概述 头体长 40 cm55 cm，

16、尾长 27 cm33 cm，成体质量 3.1 kg5.2 kg。尾长与头体长的百分比约 为 65%。后足长 64 cm，耳长 1.96 cm。头骨粗短，脑颅大，四肢粗壮，前后足各具 5 趾。 两颊、眼及喉不披鳞，而披以黄白或红棕色稀毛。全身披以覆瓦状排列的、像鱼鳞一般的硬角质 厚鳞片，在披鳞的部位各鳞片之间，还有黄棕色硬毛 , 56 根成丛的伸出鳞外。胸腹平坦并且到尾基 下面以及四肢的内侧均不披鳞而覆以黄白色或红棕色的稀毛，绒毛极少。鳞片长呈半圆形并且与体轴 平行，全身约有 560688 片。鳞片为黑褐色或灰褐色，老年个体边缘呈黄褐色或橙褐色，幼兽尚未 角化的鳞片呈黄色。背部隆起，鳞片呈菱形且

17、鳞片每列约为 1516 片，腹侧带棱脊鳞片约 3 列，脊 鳞比马来穿山甲的钝圆。前肢从远端到近端鳞片呈背后方斜行排列，而后肢则从近端覆盖排列。尾巴 呈扁平状，尾背鳞每列约为 18 片，尾巴上另有纵向鳞片 910 片。如图 A.1 中 a）所示。 A.2马来穿山甲形态特征 头体长约 65 cm，尾长 56 cm，成体质量 2.7 kg4.7 kg，尾长与头体长的百分比约为 90 %。雄性 个体较雌性个体要大。前后足各有 5 趾，脚爪厚而强壮。头骨较中华穿山甲的要细长。耳较小。吻 细长而尖窄，没有牙齿，舌头很长且带有黏性。身体由成列的鳞片及绒毛覆盖着。背部鳞片共有 16 列，每列约为 19 片；腹

18、侧每侧约有 5 列带棱脊鳞片，脊鳞尖锐而窄小；尾背部鳞片有 3 列，每列约 为 2627 片；尾部腹侧鳞片有 5 列，每列约为 2627 片；尾侧缘鳞片 2 列，每列约为 26 片。腿部 鳞片约有 1011 列，每列约为 9 片。脚部的皮肤呈颗粒状的，前肢上有垫。如图 A.1 中 b）所示。 A.3大穿山甲形态特征 它与非洲先前已经发现的树穿山甲相比 , 大穿山甲的鼻子更长 , 身体和尾巴上的鳞片更多。大穿 山甲是目前所有穿山甲中体重最重的 , 成年个体质量可达 20 kg35 kg 。尾长与头体长比约为 1 1。 如图 A.1 中 c）所示。 A.4长尾穿山甲形态特征 体形狭长 , 背部略隆

19、起 , 腹面平坦 , 尾扁平而长。全身除了脸部和腹部之外 , 自额顶部至背、四 肢外侧、尾背腹面都披着覆瓦状排列的、像鱼鳞一般的硬角质厚甲片 , 鳞片为黑褐色。鳞片之间杂有 硬毛。两颊、眼、耳以及颈部、腹部、四肢外侧、尾基都生有长的白色和棕黄色稀疏的硬毛 , 绒毛极 少。成体两相邻鳞片基部毛相合 , 似成束状。头部鳞片约 26 列，每约 910 片，从嘴巴到头部鳞 片的数目逐渐增加；背部鳞片共 7 列，列约为 1112 片；侧脊状鳞共 4 列，侧靠近背部 1 列鳞片为 1415 列 , 另一列鳞片约为 1314 片；部鳞片为 28 列，每列约为 910 片 , 腿部中间鳞片数目最 多；足两侧腋

20、下各有 2 片特大鳞片 , 与身体几乎呈垂直状，其面积是正常鳞片的 3 倍左右；背部鳞片 共 3 列（从第 3536 片之后鳞片列数减少为 2 列），每列约为 4546 片；部楯鳞两侧各 1 列，列约 为 4344 片；腹脊状鳞共 3 列，每列约为 4243 片。如图 A.1 中 d）所示。 以正式出版文本为准 6 SN/T 5200 2020 A.5树穿山甲形态特征 头体长 35 cm45 cm , 尾长 50 cm。成体质量是目前所有穿山甲中质量最轻的，约 1.5 kg2 kg。 尾长与头体长比约为 1.25 1 。除了脸部和腹部之外 , 全身披着覆瓦状排列的、像鱼鳞一般的硬角质 厚甲片

21、, 为暗褐色。头为圆锥状，眼小，耳小，吻尖。四肢比较粗壮。尾巴呈扁平状并且很长 , 仅次 于长尾穿山甲并且较长尾穿山甲的要窄而细 , 具缠绕性。背部隆起 , 腹面平坦。如图 A.1 中 e）所示。 A.6南非穿山甲形态特征 头体长 50 cm60 cm，尾长 40 cm50 cm，成体质重 15 kg18 kg。尾长与头体长比约为 0.851.0。眼睑很厚, 外耳已退化到几乎看不到。脚强壮有力,脚爪又大。除了脸部和腹部之外 全身(包 括尾巴 ) 披着覆瓦状排列的黄啡色的、像鱼鳞一般的硬角质厚甲片。如图 A.1 中 f）所示。 A.7印度穿山甲形态特征 头体长 45 cm75 cm，尾长 33

22、cm50 cm，成体质量 4.7 kg9.5 kg 。尾长与头体长的百分比约 a）中华穿山甲 b）马来穿山甲 c）大穿山甲 f）南非穿山甲e）树穿山甲d）长尾穿山甲 g）印度穿山甲 图 A.1七种穿山甲（成体）的典型形态 以正式出版文本为准 7 SN/T 5200 2020 为 70 %。后足长可达 10 cm，颅全长 10.1 cm，尾长与体长的百分比约为 2/3。尾巴比中华穿山甲的 要更短更粗大，体形比中华穿山甲大。头为圆锥状，眼小，外耳较小 ( 几乎看不到 )，鼻骨始终同宽。 吻较中华穿山甲的要钝和大，四肢比较粗壮，前足 4 趾、后足 5 趾，趾端上的爪子粗大而锐利，后足 覆有很多鳞甲。

23、除了脸部和腹部之外，全身披着呈覆瓦状排列的、像鱼鳞一般的硬角质厚甲片，鳞片 相对较大并且呈黑褐色。背部隆起并且鳞片数目每列约为 1315 片，体中部鳞甲环的鳞片数每列约 为 1113 片，腹侧每侧约有 23 列带棱脊鳞片，脊鳞较中华穿山甲的还要钝圆。尾巴很粗并且呈扁 平状，尾背部鳞片每列约为 1415 片，尾端腹部覆有鳞甲且鳞片较大。肛腺分泌一种恶臭的黄色液 体，明显起着防御作用。如图 A.1 中 g）所示。 以正式出版文本为准 8 SN/T 5200 2020 附录B （规范性） 四种穿山甲鳞片形态特征 B.1中华穿山甲鳞片 呈扇面、三角形、菱形或盾形的扁平状，中间较厚，边缘较薄，大小不一。

24、外表面黑褐色或黄褐 色，有光泽，宽端有数十条排列整齐的纵纹以及数条横线纹，窄端光滑。背甲鳞片后缘形状平圆或凹 入。腹甲鳞片形体较小，窄端光滑处有 1 条纵向突起的棱，边缘的甲片呈三角盔状。内表面色较浅， 中部有 1 条明显突起的弓形横向棱线，其下方有数条与棱线平行的细纹。少数甲片的基部两侧内角有 24 根硬毛，角质，半透明，坚韧，略有弹性，不易折断。气微腥，味淡。如图 B.1 所示。 图 B.1中华穿山甲鳞片 B.2马来穿山甲鳞片 呈扇面形、三角形、菱形或盾形的扁平状，中间较厚，边缘较薄，大小不一。外表面灰黄色或黄 褐色，有光泽，宽端有数十条排列整齐的纵纹及数条横线纹，窄端光滑。背甲鱗片后缘形

25、状向后凸突。 腹甲鱗片形体较小，窄端光滑处有条纵向突起的棱，边缘的甲片呈三角盔状。内表面色较浅，中部 有1条明显突起的弓形横向棱线，其下方有数条与棱线平行的细纹。角质，半透明，坚韧，略有弹性， 不易折断。气微腥，味淡。如图 B.2 所示。 以正式出版文本为准 9 SN/T 5200 2020 图 B.2马来穿山甲鳞片 B.3树穿山甲鳞片 呈长形片状，或略呈扇形，小片成簇状，尾部有一明显尖端，有的尖端两侧各有一小突出，形成 “三尖”，有的尖端两侧圆滑无突出，片薄，大小不一，长 1.0 cm6.0 cm，宽小于 2.0 cm，表面棕褐色、 黄棕色、黄白色。略有光泽，表面具排列整齐的纵纹，纹理细而清

26、晰。成簇状的小片，形体较小，中 央有一明显凸起的棱线。角质，透明或半透明，略柔韧有弹性，不易折断。气微腥，味淡。如图B.3所示。 图 B.3树穿山甲鳞片 以正式出版文本为准 10 SN/T 5200 2020 B.4大穿山甲鳞片 呈扇面形、三角形、菱形或盾形的扁平状，中间特厚，可达 0.5 cm，甲片呈灰黄色，体形较大， 宽可达 10 cm。宽端有数十条排列整齐的纵纹及数条横线纹，纹理明显，窄端光滑。中部突起弓形横 向棱线明显。如图 B.4 所示。 图 B.4大穿山甲鳞片 以正式出版文本为准 11 SN/T 5200 2020 附录C （规范性） 试剂的配制 C.150TAE 电泳缓冲液 Tr

27、is 242.0 g Na 2 EDTA2H 2 O 37.2 g 冰乙酸 57.1 mL 双蒸水定容至 1 000 mL 充分溶解，室温保存 C.2阳性对照 称取 100 mg 穿山甲组织（鳞片、肌肉等），按 5.4.2 的要求提取试剂盒，提取基因组 DNA，使用 50 L 灭菌双蒸水（5.2.17）溶解或洗脱基因组 DNA，-20 保存。 C.31 mol/L Tris -HCl 缓冲液（pH=8.0） 40 mL 双蒸水，6.057 g 固体 Tris 放入烧杯中溶解，用浓盐酸调 PH 值到 8.0，转移到 50 mL 容量 瓶中，加入双蒸水定容，摇匀后，转到准备好的溶液瓶中，贴上标签，

28、高压灭菌后，降至室温，4 保存备用。 C.4生理盐水 在 20 mL 双蒸水中溶解 0.85 g 固体 NaCl，加水定容至 100 mL，摇匀后，转到准备好的输液瓶中， 贴上标签，高压灭菌后，降至室温，4 保存备用。 C.50.5mol/L EDTA 溶液（pH=8.0） 将 9.08 g 的 Na 2 EDTA2H 2 O 溶解于 40 mL 双蒸水，用 1 g 的 NaOH 颗粒（慢慢逐步加入）调 pH 到 8.0，用 50 mL 容量瓶定容，如果 EDTA 难溶，先加 NaOH 溶解，然后逐步加 Na 2 EDTA2H 2 O。 C.6TES 缓冲液 将 0.5844 g 的 NaCl

29、 溶解于 80 mL 双蒸水，在分别加入 1 mL 的 0.5 mol/L EDTA、0.2 mL 的 Tris -HCl (pH=8.0)，加定容至 100 mL，摇匀后，转到准备好的输液瓶中，贴上标签，高压灭菌后，降至室温， 4 保存备用。 C.710% SDS 溶液 将10 g的十二烷基硫酸钠（SDS）溶解于80 mL双蒸水于68 加热溶解，用浓HCl调至 以正式出版文本为准 12 SN/T 5200 2020 pH=7.2，定容至 100 mL，摇匀后，转到准备好的输液瓶中，贴上标签，4 保存备用。 C.8灭菌双蒸水 双蒸水是重蒸水的一种，是将经过一次蒸馏后的水再次蒸馏得到的水。双蒸水

30、再经过高压蒸汽灭 菌（压力升至 103.4 kPa，温度达 121 ，持续 20 min），得到灭菌双蒸水。 C.9酚 : 三氯甲烷 : 异戊醇 饱和酚（pH=8.0） 25 mL 三氯甲烷 24 mL 异戊醇 1 mL 使用前配制，4 可保存 2 月。 以正式出版文本为准 13 SN/T 5200 2020 附录D （规范性） SYBR Green Real-time PCR 典型扩增曲线图 图 D.1穿山甲 SYBR Green Real -time PCR 典型扩增曲线图 图 D.2穿山甲 SYBR Green Real -time PCR 典型熔解曲线图 以正式出版文本为准 14 SN

31、/T 5200 2020 附录E （规范性） 穿山甲参考序列 E.1中华穿山甲（Manis pentadactyla）Cytb 参考序列（206 bp）（NCBI 序列号：MG196307.1） CTATTCCTAGCCATACATTACACAGCAGACACATCCACCGCATTTTCATCAGTTACCCATATCTGC CGAGACGTCAACTACGGATGAATCATTCGATATATACACGCTAACGGAGCCTCCATGTTCTTCATCTG CCTATTCATACACATCGGACGAGGCATCTATTATGGATCTTACGCCTACAAAGAAACATGAAACAT

32、CG GCAT E.2马来穿山甲（Manis javanica）Cytb 参考序列（206 bp）（NCBI 序列号：MG196309.1） CTATTTCTAGCCATACACTACACAGCAGACACAGCAACCGCATTCTCATCAGTAACTCACATCTG CCGAGATGTAAACTACGGATGAATTATCCGATACATACACGCTAACGGAGCTTCCCTGTTCTTCATCT GCCTATTCGCACACATCGGACGAGGCATCTACTACGGATCCTTTGCCTACAAAGAGACATGAAACATC GGTAT E.3大穿山甲（Manis gigan

33、tea）Cytb 参考序列（206 bp）（NCBI 序列号：MF536684.1） CTATTCCTAGCAATGCACTACACGGCAGACACCATAACCGCATTCTCATCAGTCACACACATTTG CCGAGACGTAAACTACGGCTGAATTATCCGTTACATACACGCCAACGGCGCATCAATATTCTTTATTT GCCTATTTATCCATATCGGACGAGGCCTATATTACGGATCCTTCATCTACAAAGAAACATGAAACATT GGAAT E.4树穿山甲（Manis tricuspis）Cytb 参考序列（206 bp） E.4.1

34、参考序列 1（NCBI 序列号：KX642007.1） CTATTCCTGGCAATACACTACACAGCGGACACTATAACCGCATTCTCATCAGTCACACACATCTG CCGAGACGTCAACTACGGATGAATTATTCGCTATATTCACGCTAACGGCGCATCAATATTCTTCATTTG CCTATTCATTCATATCGGACGAGGTCTGTACTATGGATCCTTTATATATAATGAAACATGAAACGTCG GAAT E.4.2参考序列 2 （NCBI 序列号：KX642059.1） CTATTCCTAGCAATGCACTACACAGCAG

35、ACACTATAACTGCATTCTCATCAGTCACACACATCTG TCGAGACGTCAACTACGGATGAATCATTCGCTATATCCACGCTAACGGCGCATCAATATTTTTCATTTG CCTATTCATTCATATCGGACGAGGTCTGTACTATGGATCCTTTATGTATAATGAAACATGAAATATCG GAAT E.5南非穿山甲（Manis temminckii）Cytb 参考序列（206 bp）（NCBI 序列号：MF536687.1） CTATTCTTAGCAATACACTACACAGCAGACACTACAACCGCATTCTCATCAAT

36、TACTCATATCTG TCGAGATGTGAACTATGGCTGAATTATCCGTTACATACATGCCAATGGCGCATCAATATTCTTCATCTG 以正式出版文本为准 15 SN/T 5200 2020 CTTATTTATCCATATTGGACGAGGCTTATATTACGGATCCTTCACCTACAAAGAAACATGAAACATCG GAAT E.6长尾穿山甲（Manis tetradactyla）Cytb 参考序列（206 bp）（NCBI 序列号：AJ421454.1） CTATTCCTAGCAATACACTACACAGCTGACACTATAACCGCATTCTCA

37、TCAGTCATACACATCTG CCGAGACGTCAACTATGGATGAATTATCCGCTATATCCACGCTAACGGCGCATCAATATTTTTTATTTG CCTATTTATTCACATCGGGCGAGGTCTATATTATGGGTCCTTTATATATAATGAAACATGAAACATTGG AAT E.7印度穿山甲（Manis crassicaudata）Cytb 参考序列（206 bp）（NCBI 序列号：MG196304.1） CTATTCCTAGCCATACACTACACAGCAGACACATCCACCGCATTCTCATCAGTCGCCCATATCTG CCGA

38、GACGTCAACTACGGATGAATTATCCGACACATACACGCCAACGGAGCCTCCATGTTCTTCATCT GCCTATTCATTCACATCGGACGAGGAATTTACTATGGATCATTCGCCTACAAAGAGACATGAAACATC GGCAT 图 E.17 种穿山甲 Cytb 序列比对图 以正式出版文本为准 SN/T 5200 2020 参考文献 刘曦庆，彭建军，高赛飞，等 . 穿山甲的走私贸易概况、物种鉴定与形态比较 J. 北京：林业实 用技术，2011（5）：11-14. 吴芝园 . 四种穿山甲属动物类药材的生药鉴别研究 D. 南京：南京中医药大学 , 2015. SN/T 5200 2020 书号：155175 38 定价： 20.00 元