SF T 0065-2020 毛发中二甲基色胺等16种色胺类新精神活性物质及其代谢物的液相色谱-串联质谱检验方法.pdf

《SF T 0065-2020 毛发中二甲基色胺等16种色胺类新精神活性物质及其代谢物的液相色谱-串联质谱检验方法.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《SF T 0065-2020 毛发中二甲基色胺等16种色胺类新精神活性物质及其代谢物的液相色谱-串联质谱检验方法.pdf（19页珍藏版）》请在麦多课文档分享上搜索。

1、 ICS 07.140 C 06 SF 中 华 人 民 共 和 国 司 法 行 政 行 业 标 准 SF/T 0065 2020 毛发中二甲基色胺等 16种色胺类新精神活 性物质及其代谢物的液相色谱 -串联质谱检 验方法 Determination of 16 tryptamine hallucinogens and their metabolites in hair samples by liquid chromatography- tandem mass spectrometry 2020 - 05 - 29发布 2020 - 05 - 29实施 中华人民共和国司法部 发布 SF/T 00

2、65 2020 I 目 次 前言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 术语和定义 . 1 4 原理 . 1 5 试剂、仪器和材料 . 1 6 操作方法 . 2 7 分析结果评价 . 6 附录 A（资料性附录） 16 种色胺类新精神活性物质及其代谢物的提取离子流图 . 8 附录 B（资料性附录） 方法学有效性验证数据 . 13 SF/T 0065 2020 II 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由司法鉴定科学研究院提出。 本标准由司法部信息中心归口。 本标

3、准起草单位：司法鉴定科学研究院。 本标准主要起草人：施妍、向平、刘伟、沈保华、严慧、卓先义、沈敏、吴何坚。 SF/T 0065 2020 1 毛发中二甲基色胺等 16种色胺类新 精神活性物质及其代谢物的液 相色谱 -串联质谱检验方法 1 范围 本标准规定了毛发中 二甲基色胺等 16种色胺类新精神活性物质及其代谢物 的 液相色谱 -串联质谱 （ LC-MS/MS） 检验 的 试剂、仪器和材料、操作方法 以及 分析结果评价等要求 。 本标准适用于毛发中 二甲基色胺等 16种色胺类新精神活性物质及其代谢物 的定性与定量分析，其它 检材中 二甲基色胺等 16种色胺类新精神活性物质及其代谢物 的定性及定

4、量分析可参照使用 。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的 引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122中确立的术语和定义适用于本 文件 。 4 原理 毛发 样品 经 有机溶剂 提取 后，采用液相色谱 -串联质谱法 (LC-MS/MS)进行检测， 经与平行操作的空 白样品和添加样品作对照 ，以 两对母离子 /子离子对的 保留时间、相对丰度比 进行定性分析；以 定量离 子对 峰面积

5、为依据， 采用内标法进行定量分析。 5 试剂、仪器和材料 5.1 试剂 试验用水 应 为 符合 GB/T 6682规定 的 一级 水，所用试剂 和要求如下 ： a) 甲醇 ： HPLC 级； b) 乙腈： HPLC 级； c) 98%甲酸 ： 优级纯 ； d) 乙酸铵 ：色谱 纯 ； e) 丙酮： 分析纯 ； f) 标准物质溶液： SF/T 0065 2020 2 1) 标准物质储备液：市售 5-甲氧 -N， N-二异丙基色胺（ 5-MeO-DiPT） ， 5-甲氧基 -N-甲基 -N- 异丙基色胺（ 5-MeO-MiPT） ， 5-甲氧 -N,N-二烯丙基色胺（ 5-MeO-DALT） ，

6、5-甲氧基 -N,N- 二甲基色胺（ 5-MeO-DMT） ， 5-羟基 -N,N-二异丙基色胺（ 5-OH-DiPT） ， 4-羟基 -N,N- 二异丙基色胺（ 4-OH-DiPT） ， N,N-二 甲基色胺（ DMT） ， N,N-二丙基色胺（ DPT） ， 5- 甲氧基 -N-异丙基色胺（ 5-MeO-NiPT） ， 4-羟基 -N-甲基 -N-乙基色胺（ 4-OH-MET） ， 赛洛 新（ Psilocin） ， 赛洛西宾（ Psilocybin） ， 4-羟基 -N-甲基 -N-异丙基色胺（ 4-OH-MiPT） ， 4-乙酰氧基 -N,N-二异丙基色胺（ 4-Acetoxy-DiP

7、T） ， 5-甲氧基 -2-甲基色胺（ 5-MeO-AMT） N-异丙基色胺（ NiPT）标准品溶液，质量浓度均为 100g/mL；置于冰箱中冷冻保存，保 存时间为 12 个月； 2) 标准 物质 工 作溶液：试验中所用其 它 浓度的标准工作溶液均从 5.1 f） 1） 所述 标准 物质 工作 溶液用甲醇稀释而得。 密封， 置于冰箱中冷藏保存， 保存时间 3 个月 。 g) 内标溶液： 1) 内标储备液：市售 100g/mL 赛洛西宾 -d4（ Psilocybin-d4） 和 赛洛新 -d10（ Psilocin-d10） 标准品 溶液 （或其他性质相近物） ， 置 于冰箱中冷冻保存， 保存

8、时间 12 个月； 2) 内标工作溶液： 试验中所用其 它 浓度的 内标 工作溶液均从上述 内标储备液用 甲醇稀释而 得。密封，置于冰箱中冷藏保存，保存时间 3个月 。 h) 提取溶 液： 取 1mL 甲酸，加入 1L 去离子水，配 置成 0.1%的甲酸水溶液。用 0.1%的甲酸水溶液 稀释内标工作溶液，配制成含有 1ng/mL内标的提取溶液。 5.2 仪器和材料 仪器和材料 及要求如下： a) 液相色谱 -串联质谱仪：配有电喷雾离子源 (ESI)； b) 电子分析天平 ： 分度值 0.1mg； c) 离心机 ： 转速 14000 g； d) 超声波清洗仪； e) 研磨 管 ； f) 滤膜 ：

9、 0.22m； g) 冷冻研磨仪； h) 微量移液器。 6 操作方法 6.1 定性分析 6.1.1 样品 前处理 6.1.1.1 案件样品 依次用适量的水和丙酮振荡 将 毛发样品 洗涤两次，晾干后剪成约 1mm段， 称取毛发样品 20mg于 2mL 研磨管中，加研磨珠适量，再加含 1ng/mL内标的提取 溶 液 1mL，液氮冷冻研磨， 14000 g离心 5min，取 上清液，过 0.22m滤膜 ，滤液直接 供 仪器分析。 6.1.1.2 质控 样品 SF/T 0065 2020 3 称 取空白毛发样品 20mg两份 ，一份作为空白样品，一份添加 10L 100ng/mL的 16种色胺类新精神

10、活 性物质的混标工作液， 制得 0.05ng/mg添加样品， 然后按照 6.1.1.1方法 ， 与案件样品平行 操作 。 6.1.2 仪器检测 6.1.2.1 仪器条件 6.1.2.1.1 液相色谱条件 液相色谱 条件包括： a) 色谱柱： Acquity TM UPLC HSS T3（ 100mm2.1mm ， 1.8m）（或其他等效柱） ； 注： Acquity TM UPLC HSS T3柱为美国 waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并 不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 流动相：流动相 A为 20mmo

11、l/L乙酸铵缓冲溶液（含 0.1%甲酸和 5%乙腈），流动相 B为乙腈； 采用梯度洗脱， 梯度 洗脱程序见表 1； c) 流速： 300L/min（或适宜流速） ； d) 柱温：室温； e) 进样量： 5L。 注： 可根据不同仪器的实际情况进行液相 色谱条件 调整。 表 1 梯度洗脱程序 时间 min 流动相 A (%) 流动相 B (%) 0 90 10 2 90 10 4 75 25 6 75 25 8 10 90 9 10 90 9.01 90 10 11 90 10 6.1.2.1.2 质谱条件 质谱条件 包括： a) 离子源：电喷雾电离 -正离子模式 (ESI+)； b) 检测方式：

12、多反应监测 (MRM）； c) 离子源电压 (IS)： 5500V； d) 碰撞气 (CAD)、气帘气 (CUR)、雾化气 (GS1)、辅助气 (GS2)均为高纯氮气，使用前调节各气流流 量以使质谱灵敏度达到检测要求； e) 去簇电压 (DP)、碰撞能量 (CE)应优化至最佳灵敏度 。 注： 可根据不同仪器的实际情况进行质谱 条件 调整。 在 6.1.2.1.1 和 6.1.2.1.2 的 色谱 和 质谱条件下， 16 种色胺类新精神活性物质及其代谢物 和内标 的定性离子对、定量离子对和保留时间见表 2。 16 种目标物的 MRM色谱图参见附录 A。 SF/T 0065 2020 4 表 2

13、16种色胺类新精神活性物质及其代谢物、 内标的质谱参数和保留时间 目标物化学名 目标物 Q1 m/z Q3 m/z 去簇电压 V 碰撞能量 ev 保留时间 min 5-甲氧 -N,N-二异 丙基色胺 5-MeO-DiPT CAS： 4021-34-5 275.5 114.1 a 45 20 5.89 174.0 45 30 5-甲氧基 -N-甲基 -N-异丙基色胺 5-MeO-MiPT CAS： 96096-55-8 247.2 86.2 a 40 19 4.95 174.2 40 25 5-甲氧 -N,N-二烯 丙基色胺 5-MeO-DALT CAS： 928822-98-4 271.4 1

14、10.4 a 45 20 6.08 174.2 45 25 5-甲氧基 -N,N-二 甲基色胺 5-MeO-DMT CAS： 1019-45-0 219.3 58.0 a 45 30 4.08 174.2 45 23 5-甲氧基 -2-甲基 色胺 5-MeO-AMT CAS： 1137-04-8 205.3 173.2 a 45 31 4.19 147.1 45 30 5-羟基 -N,N-二异 丙基色胺 5-OH-DiPT CAS： 36288-76-3 261.3 114.0 a 58 20 3.78 160.3 58 29 5-甲氧基 -N-异丙 基色胺 5-MeO-NiPT CAS： 1

15、09921-55-3 233.1 174.2 a 52 20 4.77 162.1 52 18 N,N-二丙基色胺 DPT CAS： 61-52-9 245.2 144.0 a 54 29 7.31 114.1 54 19 N-异丙基色胺 NiPT CAS： 7558-73-8 203.2 144.1 a 45 46 4.83 132.1 45 16 N,N-二甲基色胺 DMT CAS： 61-50-7 189.2 58.0 a 45 14 3.98 144.0 45 24 赛洛新 Psilocin CAS： 520-53-6 205.3 160.2 a 45 25 2.16 58.0 45

16、35 赛洛西宾 Psilocybin CAS： 520-52-5 285.2 205.2 a 45 24 1.12 160.2 45 42 4-羟基 -N-甲基 -N-异丙基色胺 4-OH-MiPT CAS： 77872-43-6 233.0 160.0 a 55 25 3.70 86.1 55 18 4-羟基 -N,N-二异 丙基色胺 4-OH-DiPT CAS： 132328-45-1 261.2 160.0 a 67 27 4.83 115.0 67 63 4-乙酰氧基 -N,N- 二异丙基色胺 4-Acetoxy-DiPT CAS: 936015-60-0 303.0 160.0 a

17、45 46 5.98 202.0 45 23 4-羟基 -N-甲基 -N-乙基色胺 4-OH-MET CAS： 77872-41-4 219.2 160.0 a 65 27 2.76 132.0 65 37 赛洛新 -d10 Psilocin-d10 215.3 164.1 45 25 2.14 赛洛西宾 -d4 Psilocybin-d4 289.2 209.4 65 37 1.12 a 为定量离子对 。 6.1.2.2 进样 分别 吸 取案件样品、空白 样品 和添加样品提取液，按 6.1.2.1条件进样分析 。 6.1.2.3 记录 记录各样品中 目标物 可疑色谱峰的保留时间、离子对丰度比

18、。 6.1.2.4 定性判断依据 以保留时间、质谱特征碎片离子峰和相对丰度比作为定性判断依据。 如果案件样品 中 出现目标物的两对定性离子对的色谱峰，保留时间与添加样品中 相应标准物质的色 谱峰保留时间比较 ，相对误差在 2.5%内，且 定性离子对丰度比与浓度相近添加样品的离子对丰度比之 相对误差不超过表 3规 定的范围，则可判断案件样品中存在该种目标物 。 SF/T 0065 2020 5 表 3 相对离子对丰度比的最大允许 相对误 差 (%) 单位 为百分数 （ %） 相对离子对丰度比 50 2050 1020 10 允许的相对 误 差 20 25 30 50 6.2 定量分析 6.2.1

19、 分析方法 采用内标 -工作曲线法或内标 -单点校正法 进行 定量 分析 。 6.2.2 样品 前处理 称取案件样品 毛发 20mg两份， 余下 样品前处理 同 6.1.1.1。 另取相同基质空白 毛发 若干份，添加适量 目标物，制得系列质量分数或单点质量分数的添加样品， 与案件样品平行操作。方法学有效性验证数据参见附录 B。 案件样品中目标物的质量分数应在工作曲线的线性范围内。 配 制单点 质量 分数的添加样品时，案件 样品中目标物质量分数 应 在该质量分数的 50%内 。 6.2.3 仪器检测 6.2.3.1 仪器条件 仪器条件应符合 6.1.2.1中的要求 。 6.2.3.2 进样 应

20、分别将案件样品、系列 质量分数 的添加样品或单点 质量分数 添加 样品，按 照 6.1.2.1条件进样分 析。 6.2.4 记录与计算 6.2.4.1 基本要求 应 记录案件样品、 系列 质量分数 的添加样品或单点 质量分数 添加 样品 中目标物 及内标 的 峰面积值， 然后计算含量。 6.2.4.2 内标 -工作曲线法 在系列 质量分数 的添加样品中， 应 以目标物与内标定量离子对的峰面积比 (Y)为纵坐标、目标物 质 量分数 (C)为横坐标进行线性回归，得线性方程。 根据各样品中目标物及内标定量离子对的峰面积值，按式 (1)计算出案件样品中目标物的 质量分数 。 baYC . (1) 式中

21、： C 案件样品中目标物的 质量分数 ，单位为 纳克每 毫克 (ng/mg)； Y 案件样品中目标物与内标定量离子对的峰面积比； a 线性方程的截距； SF/T 0065 2020 6 b 线性 方程的斜率。 6.2.4.3 内标 -单点校正法 应 根据案件样品和添加样品中目标物与 内标 定量离子对的峰面积值，按式 (2)计算出案件样品中目 标物的 质量分数 。 AcAC . (2) 式中： C 案件样品中目标物的 质量分数 ，单位为 纳克每 毫克 (ng/mg)； A 案件样品中目标物 与 内标 的峰面积比值 ； A 添加样品中目标物 与 内标 的峰面积比值 ； c 添加样品中目标物的 质量

22、分数 ， 单位为 纳克每 毫克 (ng/mg)。 6.2.5 计算 相对相差 案件样品同时平行测 定两份，双样相对相差按公式 (3)计算： RD = 10021 CCC % . (3) 式中： RD 相对相差（ %）； C1、 C2 两份案件样品平行定量测定的 质量分数 ， 单位为 纳克每 毫克 (ng/mg)； C 两份案件样品中平行定量测定 质量分数 的平均值 (C1+C2)/2， 单位为 纳克每 毫克 (ng/mg)。 7 分析结果评价 7.1 定性分析结果评价 7.1.1 阴性结果评价 阴性结果评价包括： a) 如果案件样品中 仅检出内标赛洛西宾 -d4和 赛洛新 -d10， 未检出

23、16 种目标物 成分，添加样品中 检出 16 种色胺类新精神活性物质 成分，则阴性结果可靠； b) 如果 案件样品中未检出内标赛洛西宾 -d4和 赛洛新 -d10，或 添加样品中未检出 16 种色胺类新精 神活性物质 成分，则阴性结果不可靠，应按 6.1 重新检验。 7.1.2 阳性结果评价 阳性结果评价包括： a) 如果案件样品中检出 16 种色胺类新精神活性物质中的一种或多种 成分 且空白样品无干扰 ，则 判断为 阳性结果可靠； b) 如果空白样品亦呈阳性，则阳性结果不可靠 ，应按 6.1 重新检验 。 SF/T 0065 2020 7 7.2 定量分析结果评价 两份案件样品的相对相差不超

24、过 20%时，结果按两份案件样品含量的平均值计算，否则 应 重新测定。 SF/T 0065 2020 8 A A 附 录 A （资料性附录） 16种色胺类新精神活性物质及其代谢物的提取离子流图 16种色胺类新精神活性物质及其代谢物 的 提取离子流 图 见图 A.1。 SF/T 0065 2020 9 SF/T 0065 2020 10 SF/T 0065 2020 11 SF/T 0065 2020 12 注： 定量限浓度：毛发 0.05ng/mg 图 A.1 16种色胺类新精神活性物质及其代谢物的提取离子流 图 4-Acetoxy-DiPT 5-MeO-DiP T SF/T 0065 202

25、0 13 B B 附 录 B （资料性附录） 方法学有效性验证数据 B.1 毛发 中 16种色胺类新精神活性物质及其代谢物 的 检测方法 工作曲线 线性方程和线性范围见 表 B.1。 表 B.1 线性方程和线性范围 目标物化学名 目标物 线性范围 ng/mg 回归方程 相关系数 R2 5-甲氧 -N,N-二异丙基色胺 5-MeO-DiPT 0.003-1 y=23.31135x-0.05404 0.992 5-甲氧基 -N-甲基 -N-异丙基色胺 5-MeO-MiPT 0.003-1 y=16.69741x-0.00439 0.995 5-甲氧 -N,N-二烯丙基色胺 5-MeO-DALT 0

26、.003-1 y=9.55911x-0.02399 0.991 5-甲氧基 -N,N-二甲基色胺 5-MeO-DMT 0.003-1 y=4.06577x-0.00549 0.995 5-甲氧基 -2-甲基色胺 5-MeO-AMT 0.05-1 y=0.24068x+7.70240 0.992 5-羟基 -N,N-二异丙基色胺 5-OH-DiPT 0.003-1 y=7.82639x-0.00828 0.992 5-甲氧基 -N-异丙基色胺 5-MeO-NiPT 0.01-1 y=7.47573x-0.01941 0.993 N,N-二丙基色胺 DPT 0.003-1 y=27.29272x-

27、0.02350 0.995 N-异丙基色胺 NiPT 0.05-1 y=0.15992x+0.00120 0.992 N,N-二甲基色胺 DMT 0.003-1 y=8.17506x-0.01056 0.995 赛洛新 Psilocin 0.01-1 y=0.36517x-3.16101e-4 0.994 赛洛西宾 Psilocybin 0.01-1 y=1.99377x-0.00371 0.992 4-羟基 -N-甲基 -N-异丙基色胺 4-OH-MiPT 0.01-1 y=1.50947x-0.00131 0.993 4-羟基 -N,N-二异丙基色胺 4-OH-DiPT 0.003-1 y

28、=1.77558x+0.00457 0.993 4-乙酰氧基 -N,N-二异丙基色胺 4-Acetoxy-DiPT 0.01-1 y=3.42391x-0.00697 0.998 4-羟基 -N-甲基 -N-乙基色胺 4-OH-MET 0.01-1 y=0.63714x-0.00112 0.992 B.2 方法 的 准确度、精密度 、 回收率和基质效应 方法的精密度、准确度、回收率和基质效应见表 B.2。 SF/T 0065 2020 14 表 B.2 方法 的精密度 、 准确度 、回收率和基质效应 单位 为 百分数 （ %） 目标物 添加质量分数 ng/mg 精密度 准确度 回收率 基质效应

29、 日内 n=6 日间 n=24 5-MeO-DiPT 0.01 12.5 10.2 94.8 101.8 104.4 0.1 8.6 7.2 93.9 83.9 96 0.8 8.7 3.5 100.5 92.7 101.8 5-MeO-MiPT 0.01 9.4 4.9 92.8 94 100.7 0.1 8.6 4.8 99.4 93.9 96.7 0.8 8.7 3.4 104.4 93.8 97.2 5-MeO-DALT 0.01 8 2.9 95.0 99 102.8 0.1 11.2 5.5 96.8 83.5 108.1 0.8 11.3 7.7 102.3 97.9 99.6

30、5-MeO-DMT 0.01 11.3 7.2 96.8 93.2 100.3 0.1 11.8 7.4 98.9 104.5 102.2 0.8 10 5.6 101.3 94.4 95.1 5-MeO-AMT 0.05 10.5 10.1 107.4 102.6 103.1 0.1 8.9 7.3 97.2 101.4 98.5 0.8 9.4 6.5 101.5 93.4 99.8 5-OH-DiPT 0.01 13.9 13.5 91.3 99 105.2 0.1 8.17 3.5 96.1 83.5 99 0.8 12.4 6.6 98.3 97.9 100.1 5-MeO-NiPT

31、 0.01 7 8.9 107.5 95.5 100.5 0.1 9.1 12.4 93.9 99.7 103.4 0.8 10.1 5.1 107.7 90.1 99.2 DPT 0.01 12.9 9.9 95.2 93.5 87.3 0.1 11.2 8.5 103.3 92.3 90.6 0.8 9.3 2.7 105.6 95 102.3 NiPT 0.05 7.1 3.1 113.5 98.7 101.4 0.1 9.8 8.3 101.9 101.6 101.9 0.8 8.6 8.7 106.9 96.4 101.5 DMT 0.01 10.6 8.2 91.5 96.6 95

32、 0.1 9 6 97.8 90.2 93 0.8 10.6 8.7 101.5 109.7 95.1 Psilocin 0.01 6.1 2.2 108.4 87.1 93.1 0.1 9.09 3.9 97.5 86 90.8 0.8 9.2 5.5 105.5 101.7 102.7 SF/T 0065 2020 15 表 B.2（续） Psilocybin 0.01 9.5 2.8 111.8 88.2 90.4 0.1 9.3 4 94.6 92 106.5 0.8 9.8 4 110.1 100.8 104.2 4-OH-MiPT 0.01 7.9 2.1 109.5 86.8 1

33、00.3 0.1 8.7 3.6 95.2 93.6 102.8 0.8 11 9 100.9 92.8 92.3 4-OH-DiPT 0.01 10.3 9.5 102.6 80.7 101.1 0.1 9.5 4.1 97.3 107.7 99.3 0.8 9.6 7.8 101.7 84 108.2 4-Acetoxy-DiPT 0.01 8.1 3.5 108.6 83.2 99.3 0.1 9.9 8.6 94.5 87 95 0.8 9.3 3.8 107.8 88 98.1 4-OH-MET 0.01 9 6.6 105.5 94.7 102.2 0.1 8.4 3.8 93.7 93.8 89.1 0.8 11.4 7.7 107.2 86.9 98.6 B.3 检出限和定量下限 毛发样品中 16种色胺类新精神活性物质及其代谢物 的检出限均为 0.01ng/mg，定量下限均为 0.05ng/mg。 _