GA T 1636-2019 法庭科学 毛发、血液中四氢大麻酚和四氢大麻酸检验 气相色谱-质谱法.pdf

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1、 ICS 13.310 A 92 中华人民共和国公共安全行业标准 GA 法庭科学 毛发 、血液 中 四氢大麻酚和四氢 大麻酸 检验 气相色谱 -质谱法 Forensic sciences Examination methods for tetrahydrocannabinol and tetrahydrocannabinol-9-carboxylicacid acid in hair and blood samples GC-MS - -发布 - -实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T GA/T I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容

2、可能涉及专利 。 本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（ SAC/TC 179/SC 1） 提出并 归口。 本标准 起草单位： 公安部物证鉴定中心、中国药品生物制品检定所 。 本标准 主要 起草人 ： 张云峰、常靖、 崔巍、刘耀、南楠、朱军、于忠山、陈华、左宁 。 GA/T 1 法庭科学 毛发、血液中 四氢大麻酚和四氢大麻酸 检验 气相色谱 -质谱法 1 范围 本标准规定了 法庭科学 毛发 、 血 液 中四氢大麻酚 （ 9-THC） 和 四氢大麻酸 （ 9-THC-COOH） 的 气 相色谱 -质谱（ GC-MS） 定性定量 检验

3、方法 。 本标准适用于 法庭科学 毛发 、 血液 中四氢大麻酚 和 四氢大麻酸的 定性分析和定量分析。其他可疑 样 品 中 四氢大麻酚 和 四氢大麻酸 的定性分析和定量分析可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分 析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，对毛发、血液进行提取、净

4、化 、 浓缩 及衍生化 ， 采用气相色谱 -质谱法定性定量，以 目标物 各组分 衍生化产物的 保留 时间、 质谱特征离子碎片峰和相对 丰度比作为定性判断依据；以峰面积为依据，采用外标法 或内标法 进行定量分析。 5 试剂 和 材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682中规定的三级水 。 除非另有说明，在分析中使用的试剂均为分析纯， 试 剂包括： a) 甲醇 ； b) 乙酸乙酯 ； c) 正己烷 ； d) 乙酸 ； e) 生理盐水 ； f) 乙腈 ； g) 0.1%十二烷基硫酸钠水溶液； h) 1mol/L 氢氧化钠溶液 ： 称取 4.0g 氢氧化钠，用 水 溶解并 稀释 至 100

5、mL； GA/T 2 i) 正己烷 /乙酸乙酯 (体积 比 9:1)混合溶剂 ； j) 衍生化试剂： 五氟丙醇（ PFPOH） 或五氟丙酸酐（ PFPA）或其他合适的酰化衍生化试剂 ； k) 标准 溶液： 1） 1.0mg/mL 标准物质溶液 ： 采用市售标准溶液 ； 2） 10.0g/mL 标准物质工作溶液 ： 移取 1.0mg/mL 的 四氢大麻酚和四氢大麻酸 标准物质溶液 各 0.1mL，用甲醇稀释至 10mL，混匀，配制成浓度为 10.0g/mL 的单一标准工作溶液， 密封，置于冰箱中冷藏保存 。 有效期 1 月。实验中所用其他浓度单一标准工作溶液均由 10.0g/mL 标准物质溶液用

6、甲醇稀释得到； 3） 1.0mg/mL 内标溶液：根据 甲芬那酸 内标 物 （ 或其他 等效 内标物 ） 的纯度， 称取适量， 用 甲醇配制 1.0mg/mL 甲芬那酸 内标 溶液，置于冰箱中冷藏保存。有效期 2 个月。 或采用市 售标准溶液 ； 4） 10.0g/mL 内标 工作溶液： 移取 1.0mg/mL 的 甲芬那酸 内标 物质溶 液 0.1mL，用甲 醇稀释 至 10mL，混匀，配制成浓度为 10.0g/mL 的 内标 工作溶液，密封，置于冰箱中冷藏保存 。 有效期 1 月。实验中所用其他浓度 内标 工作溶液均 由 10.0g/mL 内标溶液用甲醇稀释得到 。 注 ： 特殊情况下可使

7、用对照溶液代替标准溶液 。 5.2 材料 材料包括： a) 具塞玻璃试管 ； b) 具盖离心管 ； c) 一次性注射器 。 6 仪器和设备 仪器和设备包括： a) 气相色谱 -质谱仪：配有电子轰击离子源（ EI）及负化学离子源 （ NCI） ； b) 电子天平； c) 振荡器； d) 离心机； e) 超声波清洗器； f) 移液器； g) 浓缩器； h) 烘箱 。 7 操作 方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品 提取 7.1.1.1 毛发 样品 7.1.1.1.1 毛 发 清洗 GA/T 3 称 取 毛发 检材样品约 200mg， 将毛发 剪成长约 2cm 碎段，置于小烧杯中，依次用 甲醇

8、10mL、水 10mL、 甲醇 10mL 各振荡清洗 2min， 清洗 3 次以上， 自然晾干，于干净 铝箔纸 中 密封后保存。同时， 收集最后 一次 清洗毛发的甲醇溶液， 置于 浓缩器上 45 浓缩至干， 残留物按 7.1.1.1.3 进行衍生，供 GC 或 GC-MS 分析，结果呈阴性证明毛发外部无污染，否则重新清洗毛发，直至最后清洗溶液呈阴性。 7.1.1.1.2 液液 提取 将 晾干后 的毛发 检材样品 铰碎至 1mm 2mm 左右 （或用研磨仪研碎） ， 称取 50mg 置于玻璃试管中 （ 若采用内标法 ， 则再加入内标 1.0g/mL 甲芬那酸 30L， 混匀 ） ， 加入 1mo

9、l/L 氢氧化钠 溶液 1mL， ， 置于烘箱中 95 加热 ， 至毛发样品全部溶解。冷却 ， 将样品转移至具盖离心管中 ， 加入 乙酸 1.0mL， 混匀 ， 调 pH 值 至 3.5， 8000r/min 离心 10min， 取上清液， 加 入正己烷 /乙酸乙酯 (体积比 9： 1)混合溶剂 5mL， 超声 5min， 8000r/min 离心 10min， 提取有机相；重复提取一次，合并两次提取的有机相 。 置 于 浓缩器上 35浓缩至干，残留物按 7.1.1.1.3 进行衍生。 7.1.1.1.3 衍生化 取 7.1.1.1.3 中待衍生残留物， 加入 PFPA 100L 或 PFPO

10、H 75L，置于烘箱中 70 衍生化 30min。 冷却 ， 在浓缩器上 35 浓缩至干 ， 用 乙酸乙酯 50L 溶解 ， 作为检材样品衍生液供 GC-MS 分析。 7.1.1.1.4 毛发 质控样品制备 称 取 清洗 晾干 后的 等量 空白毛发 样品 两 份 ， 一份 作为 空白样品 ，一 份添加 四氢大麻酚和四氢大麻酸 标准物质 各 100ng 作为添加样品 ， 与 检材平行操作，得到空白样品衍生液和添加样品衍生液供仪器 分析 。 若采用内标法 ， 可不做添加样品 ， 空白样品 （不加内标）与检材平行操作，同时做内标物质 和 标准 物质的衍生化，供仪器分析。 7.1.1.2 血液 样品

11、7.1.1.2.1 血液 提取 移 取 血液 检材 样品 1.0mL 于 具盖离心管中 ，（ 若采用内标法 ， 则 加入内标 1.0g/mL 甲芬那酸（ MFA） 50L， 混匀 ） ，加乙腈 1mL， 振荡 15min， 8000r/min 离心 10min，取上清液， 加 10%乙酸 0.4mL、 生理 盐水 2mL，混匀后调 pH 值 至 3.5， 8000r/min 离心 10min，取上清液，加入有机相正己烷 /乙酸乙酯 混合 溶剂 （ 体积比为 9:1） 5mL， 振荡 5min， 8000r/min 离心 10min，取有机相 4.5mL 并转移至玻璃试管中， 在浓缩器上 35

12、下浓缩至 约 1mL，定量转移至 玻璃试管中， 35 下快速浓缩至干 。残 留物需 按 7.1.1.2.2 进行 衍生 。 7.1.1.2.2 衍生化 在 7.1.1.2.1 的残留物中， 加入 PFPA 20L 和 PFPOH 5L，置于烘箱中 70 衍生化 30min， 冷却 ， 在浓缩器上 35 浓缩至干 ， 用 乙酸乙酯 50L 溶解， 作为检材样品衍生液供 GC-MS 分析 。 7.1.1.2.3 血液 质控样品制备 取 等量 空白血液 两 份 于 具盖离心管中 ， 一份作为空白样品， 一份添加 四氢大麻酚和四氢大麻酸 标准 物质 作为添加样品 （添加样品的浓度为 50ng/mL）

13、， 与 检材平行 操作，得到空白样 品 衍生液 和添加样品 衍生液 供仪器 分析 。 若采用内标法 ， 可不做添加样品 ， 空白样品 （不加内标）与检材平行操作，同时做内标物质 和 标准 物质的衍生化，供仪器分析。 GA/T 4 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 气相色谱 -质谱 条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品 等 实际情况进行调整： a) 离子源：电子轰击离子源（ EI） 或 负化学离子源（ NCI） ； b) 色谱柱： DB-5MS 毛细色谱柱 （ 30m0.25mm0.25m） 或等效色谱柱 ； 注 ： DB-5MS 为 Agilent 公司产品的商品名称，给出这

14、一信息是为了方便本标准的使用者， 并不是表示对该产品的 认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 c) 色谱柱温程： 80保持 2min，以 30/min 速率升温至 280，保持 16.5min； d) 进样口温度： 280； e) 传输线温度： 250； f) 离子源 温度 ： 230； g) 载气：高纯 氦 ； h) 柱流量： 1mL/min； i) 进样方式 ： 分流进样 ， 分流比 为 5： 1； j) 扫描方式：全扫描（ SCAN） ， 质谱扫描范围 40amu 700amu； 或选择离子监测 (SIM)； k) 四氢大麻酚和 四氢大麻酸 五氟丙酸酐衍生物的 质

15、谱特征离子碎片峰 ： 见表 1 及表 2。 表 1 电子轰击离 子源（ EI）检测特征峰值表 目标物 特征峰 1 特征峰 2 特征峰 3 四氢大麻酚五氟丙酸酐衍生物 m/z 73 m/z 377* m/z 460 四氢大麻酸五氟丙酸酐衍生物 m/z 129 m/z 459* m/z 622 甲芬那酸五氟丙酸酐衍生物 m/z 194 m/z 398* m/z 519 注： *为定量离子 。 表 2 负化学离子源（ NCI）检测特征峰值表 （未标定量离子） 目标物 特征峰 特 征峰 四氢大麻酸五氟丙酸酐衍生物 m/z 602 m/z 622 甲芬那酸五氟丙酸酐衍生物 m/z 479 m/z 519

16、 7.1.2.2 进样 分别吸取检材、空白和添加样品衍生液及标准工作溶液衍生液，按 7.1.2.1 的分析条件进样分析。 7.2 定量分析 7.2.1 样品 提取 7.2.1.1 毛发 样品 毛发检材样品按 7.1.1.1.1 进行清洗晾干后 ， 称 取 50mg 两份 （ 若采用内标法 ， 则加入内标甲芬那酸 GA/T 5 30ng， 混匀 ） ，按 7.1.1.1.27.1.1.1.4 操作 。 同时 称 取 清洗 晾干 后的 等量 空白毛发 样品 三 份， 其中两份分别添加 四氢大麻酚和四氢大麻酸标准物 质作为添加样品 （ 添加样品中目标物含量应为检材样品中目标物含量的 （ 100 30

17、） %，若采用内标法， 则添加样品中还需加入内标甲芬那酸 30ng）， 另一份作为空白样品 ， 与检材 样品 平行操作，得到空白样 品衍生液和添加样品衍生液供仪器 分析 。 7.2.1.2 血液样品 制备 移取 血液 检材 样品 1.0mL 两份 （ 若采用内标法 ， 则加入内标甲芬那酸 100ng， 混匀 ），按 7.1.1.2 操 作 。 同时 移 取等量空白血液 三 份， 其中两份分别添加四氢大麻酚和四氢大麻酸标准物质作为添加样品 （添加样品中目标物含量应为检材样品中目标物含量的（ 100 30） %，若采用内 标法，则添加样品中 还需加入内标甲芬那酸 100ng），另一份作为空白样品，

18、与检材样品平行操作，得到空白样品衍生液和 添加样品衍生液供仪器分析。 7.2.2 仪器检测 7.2.2.1 仪器条件 按 7.1.2.1 规定的条件分析。 7.2.2.2 进样 分别吸取检材、空白和添加样品 衍生液 及标准工作溶液衍生液，按 7.1.2.1 分析条件每个样品进样 分析 2 3 次。若要报告测量不确定度，每个样品分析次数应不少于 6 次。 7.2.3 计算 7.2.3.1 计算含量 7.2.3.1.1 外标 -单点法 记录各样品 衍生液 平 行进样 2 3 次的目标物保留时间和峰面积值，按公式（ 1）计算含量： 样样添 添添样 VMA VMAW = . (1) 式中： W 检材样

19、品 中目标物的含量，单位为 纳克 每毫克 （ ng/mg） 或 纳克 每毫升（ ng/mL） ； A 样 检材 样品 衍生液 中目标物峰面积平均值； M 添 添加样品中标准物添加量，单位为 纳克 （ ng） ； V 样 检材 样品 的定容体积，单位为毫升 （ mL） ； A 添 添加样品 衍生 液 中目标物峰面积平均值； M 样 检材 样品 的取样量，单位为毫克 （ mg） 或毫升 （ mL） ； V 添 添加样品的定容体积，单位为毫升 （ mL） 。 7.2.3.1.2 内标 -单点 法 记录各样品衍生液平行进样 2 3 次的目标物保留时间和峰面积值，按公式（ 2）计算校正因子，按 GA/T

20、 6 公式（ 3）计算含量： MAf = 标内 内标 . (2) 式中： f 校正因子； M 标 添加样品中 目标物添加量 ，单位为 纳克 (ng)； A 内 添加样品中 内标物添加峰面积 平均值 ； M 内 添加样品中 内标物添加量 ，单位为 纳克 (ng)； A 标 添加样品中 目标物添加峰面积 平均值 。 样样添 添添样 VMA VMAfW = . (3) 式中： W 检材 样品中 目 标物 的 含量 ，单位为 纳克每毫克（ ng/mg）或纳克每毫升 （ ng/mL） ； f 校正因子； A 样 检材 样品 衍生液 中目标物平均峰面积； A 添 添加样品 衍生液 中目标物平均峰面积； M

21、 添 添加样品中 目标物 添加量 ，单位为 纳克 (ng)； M 样 检材样品的取样量 ， 单位为纳克每毫克（ ng/mg）或纳克每毫升（ ng/mL）； V 添 添加样品的定容体积 ，单位为 毫升 (mL)； V 样 检材 样品的定容体积 ，单位为 毫升 (mL)。 7.2.2.3.2 计算相对相差 记录 两 份平行操作的 检材 样品中目标物的 含量，按公式（ 4）计算相对相差： %10021 = X XXRD . (4) 式中： RD 相对相差 ，用百分比（ %）表示 ； X1、 X2 两个检材 样品 平行定量测定的含量数值； X 两个检材 样品 平行定量测定含量的平均值。 8 结果评价

22、8.1 定性结果评价 8.1.1 阳 性结果评价 在相同条件下进行样品测定时，检材样品中目标物的色谱峰保留时间与标准溶液一致（相对误差在 1%之内），且在扣除背 景后的检材样品质谱图中，目标物的质谱特征离子与标准溶液一致，特征离子 丰度比与浓度接近的标准溶液相比，相对偏 差不超过表 3 规定的范围，空白样品无干扰，则可判断检材 GA/T 7 样品中检出目标物。 表 3 特征离子丰度比的最大允许相对偏差范围 特征离子丰度比 50% 20 50 10 20 10% 最大允许相对偏差 10 15 20% 50% 8.1.2 阴 性结果评价 检材样品未出现与目标物标准溶液一致的色谱峰，且添加样品中出现

23、与目标物标准溶液一致的色谱 峰，空白样品无干扰，则可判断检材样品中未检出目标物。 8.2 定量结果评价 如果目标物 含量的 RD 20%，定量数据可靠，其含量按 两 份检材的平均值计算。 如果 检材样品中 目标物含量的 RD 20%，定量数据不可靠 ， 应按 7.2重新提取检验。 本方法 的相关实验数据及谱图参加附录 A和附录 B。 GA/T 8 附 录 A （资料性附录） 相关实验数据 A.1 毛发样品 相关线 性 范围 ： a） 采用 EI 作为离子源检测四氢大麻酚的五氟丙酸酐衍生物的线性范围在 1ng/mg 100ng/mg； b） 采用 EI 作为离子源检测四氢大麻酸的五氟丙酸酐衍生物

24、的线性范围在 1ng/mg 100ng/mg； c） 采用 NCI 作为离子源检测四氢大麻酸的五氟丙酸酐衍生物的线性范围在 0.5ng/mg 50ng/mg。 不同提取方法和仪器检测线性范围可能有 所差异，均属正常。 A.2 血液样品 相关线性 范围 及检出限 ： a） 采用 EI 作为离子源检测四氢大麻酚的五氟丙酸酐衍生物的线性范围在 1ng/mL 1000ng/mL； b） 采用 EI 作为离子源检测四氢大麻酸的五氟丙酸酐衍生物的线性范围在 1ng/mL 1000ng/mL； c） 采用 NCI 作为离子源检测四氢大麻酸的五氟丙酸酐衍生物的线性范围在 0.5ng/mL 500ng/mL；

25、d） 本方法四氢大麻酚五氟丙酸酐衍生物的检 出 限 为 1ng/mg 或 1ng/mL（ EI）；四氢大麻酸五氟丙酸 酐衍生物的检 出 限为 1ng/mg 或 1ng/mL（ EI）、 1ng/mg 或 1ng/mL（ NCI）。 不同提取方法和仪器检测线性范围可能有所差异，均属正常。 GA/T 9 附 录 B （资料性附录） 相关 谱图 B.1 四氢大麻酚的五氟丙酸酐衍生物的 GC-MS-EI 分析谱 图 见图 B.1。 图 B.1 四氢大麻酚的五氟丙酸酐衍生物的 GC-MS-EI 分析谱 图 B.2 四氢大麻酸的五氟丙酸酐衍生物的 GC-MS-EI 分析谱 图 见图 B.2。 图 B.2

26、四氢大麻酸的五氟丙酸酐衍生物的 GC-MS-EI 分析谱 图 B.3 甲芬那酸五氟丙酸酐衍生物的 GC-MS-EI 分析谱 图 见图 B.3。 GA/T 10 图 B.3 甲芬那酸五氟丙 酸酐衍生物的 GC-MS-EI 分析谱 图 B.4 四氢大麻酸的五氟丙酸酐衍生物的 GC-MS-NCI分析谱 图 见图 B.4。 图 B.4 四氢大麻酸的五氟丙酸酐衍生物的 GC-MS-NCI 分析谱 图 GA/T 11 B.5 甲芬那酸五氟丙酸酐衍生物的 GC-MS-NCI 分析谱 图 见图 B.5。 图 B.5 甲芬那酸五氟丙酸酐衍生物的 GC-MS-NCI 分析谱 图 B.6 9-THC、 9-THCA、 MFA 的衍生化物 EI 检测 总 离子 流 色谱图 见图 B.6。 说明 ： 1-MFA 衍生化物； 2- 9-THC 衍生化物； 3- 9-THCA 衍生化物。 图 B.6 9-THC、 9-THCA、 MFA 的衍生化物 EI 检测 总 离子 流 色谱图 GA/T 12 B.7 9-THCA、 MFA 的衍生化物 NCI 提取离子色谱图 见图 B.7。 说明 ： 1-MFA 的衍生化物； 2-9-THCA 的衍生化物。 图 B.7 9-THCA、 MFA 的衍生化物 NCI 提取离子色谱图