DB37 T 604-2006 鸡肝中金霉素残留量的测定 高效液相色谱法.PDF

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1、 ICS 65.020.30 B40 备案号 山东省地方标准 DB37/T6042006 鸡肝中金霉素残留量的测定 高效液相色谱法 Determination of chlortetracycline residue in chicken liver high performance liquid chromatography 200- - 发布 2006-07-01 实施 DB37 山东省质量技术监督局发布 DB37/T6042006 I 前言 本标准由山东省畜牧办公室、山东省畜牧业标准化技术委员会提出。 本标准起草单位：山东省畜产品质量检测中心。 本标准主要起草人：高迎春、陈玲、冯修光、魏

2、秀丽。 DB37/T6042006 1 鸡肝中金霉素残留量的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了鸡肝中金霉素残留量的高效液相色谱测定法。 本标准适用于鸡肝中金霉素残留量的测定。本方法的检出限为50 g/Kg。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的 修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 鸡肝组织经磷酸氢二钠-柠檬酸-乙二胺四乙酸二

3、钠缓冲液(PH4.0)提取，过滤后，通过C 18萃取柱水 洗后，用草酸曱醇液洗脱，洗脱液用HPLC分离，紫外检测器在360nm处测定。 4 试剂与材料 除非另有规定，仅使用分析纯试剂，水符合GB/T6682一级水的规定。 4.1 金霉素标准品：含金霉素不少于 90.0。 4.2 乙腈（CH 3CN）：色谱纯。 4.3 甲醇（CH 3OH）：色谱纯。 4.4 正己烷（C 6H14）。 4.5 三氯甲烷（HCCl 3）。 4.6 草酸（C 2H2O42H2O）。 4.7 磷酸氢二钠(NaHPO 4)。 4.8 柠檬酸(C 6H8O7)。 4.9 乙二胺四乙酸二钠(Na 2EDTA)。 4.10 提

4、取液：称取磷酸氢二钠（4.7）28.4g，用水溶解并定容于 1000mL 量瓶中。称取柠檬酸（4.8） 21g 用水溶解并定容于 1000mL 量瓶中。量取柠檬酸溶液 1000mL，加磷酸氢二钠溶液 625mL，加 60.5g 乙二胺四乙酸二钠（4.9），混匀备用。 4.11 草酸溶液c【（C 2H4O4）】0.01moL/L：称取草酸（4.6）1.26g，用水溶解并定容于 1000mL量瓶中。 4.12 草酸甲醇溶液c【（C 2H4O4）】0.01moL/L：称取草酸（4.6）1. 26g，用甲醇（4.3）溶解并定容于 1000mL量瓶中。 4.13 金霉素标准储备液：称取金霉素标准品（4.

5、1）100mg（准确至 1mg）,用甲醇（4.3）溶解并定容 至100mL 棕色量瓶中。其浓度为1mg/mL。 4.14 金霉素标准中间液： 精密量取 1mg/mL 金霉素标准储备液（4.13）1.00mL,用甲醇（4.3）稀释并 定容于100mL 棕色容量瓶中。其浓度为10gmL。 4.15 金霉素标准工作液：精密吸取标准中间液（4.14）50L、100L、250L、500L、1500L 于 10mL 棕色容量瓶中，加6.0 mL 草酸甲醇溶液（4.12），并用水稀释至刻度，摇匀，配制成浓度为 0.05g mL、0.1gmL、0.25gmL、0.5gmL、1.0gmL 和1.5gmL 的系列

6、标准工作液。 5 仪器 DB37/T6042006 2 5.1 高效液相色谱仪：具紫外检测器。 5.2 天平：感量0.01g。 5.3 分析天平：感量0.0001。 5.4 匀浆机（10000r/min）。 5.5 离心机（4000r/min）。 5.6 C18萃取柱。 5.7 针头过滤器：孔径为0.45m 有机系滤膜。 5.8 离心管：50ml。 5.9 微量移液器：单道1 L1000 L。 6 分析步骤 6.1 C18萃取柱前处理 取C 18柱，依次使用2ml甲醇（4.3）和 2ml水 润洗后备用。 6.2 提取 称取5g0.05g供试试样，置50mL离心管（5.8） 中，加提取液（4.1

7、0）15.0 mL，三氯甲烷（4.5） 5mL，正己烷（4.4）5mL，匀浆30S，离心10min，分离后的残渣用10mL提取液（4.10）处理，振荡5min, 离心5min，合并两次提取液，离心5min，取10mL上清液过C 18萃取柱（6.1），用水洗至中性。再先后以 草酸甲醇溶液（4.12）0.60mL,水0.40mL 洗脱。洗脱液经0.45m微孔滤膜过滤，滤液待测。同时做试剂 空白。 6.3 测定 6.3.1 高效液相色谱参考条件 色谱柱：C 18柱,250mm4.6mm，粒径 5 m。 流动相：乙腈（4.2）+甲醇（4.3）草酸溶液（4.11）122068。 流速：1.0mL/min

8、。 检测器：紫外检测器。 检测波长：360nm。 柱温：室温。 进样量：20 L。 6.3.2 定量测定 调整仪器参数，向色谱柱中注入标准工作液（4.15），积分得到色谱峰面积，作标准曲线。同法测 定样品和空白溶液（6.2），用标准曲线定量。 7 结果计算 按照（1）式计算： （C i-Co）V1000 X i = - （1） m 式中： Xi 试样中金霉素的残留量，单位为微克每千克（ g/Kg）； Ci供试样品溶液中金霉素的浓度，单位为微克每毫升（ g/mL）； Co空白溶液中金霉素的浓度，单位为微克每毫升（ g/mL）； m 试样的质量，单位为克(g)； V 供试试样固相萃取洗脱液总体积，单位为毫升（mL）。 DB37/T6042006 3 以两次平行测定结果的算术平均值为测定结果，计算结果保留三位有效数字。 8 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的15。