【考研类试卷】研究生入学考试专业课现代分子生物学-3及答案解析.doc

《【考研类试卷】研究生入学考试专业课现代分子生物学-3及答案解析.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《【考研类试卷】研究生入学考试专业课现代分子生物学-3及答案解析.doc（9页珍藏版）》请在麦多课文档分享上搜索。

1、研究生入学考试专业课现代分子生物学-3 及答案解析(总分：100.00，做题时间：90 分钟)一、论述题(总题数：28，分数：100.00)1.试述基因克隆载体进化过程。 （分数：3.00）_2.试述 PCR 扩增的原理和过程。 （分数：3.00）_3.说说荧光染料 SYBR Green 和 TaqMan 荧光探针的主要不同点。 （分数：3.00）_4.说出基因组 DNA 文库和 cDNA 文库的主要区别。 （分数：3.00）_5.cDNA 合成时的方向性是如何实现的? （分数：3.00）_6.试述不对称交错多聚酶链式反应(TAIL-PCR)的主要技术和原理? （分数：3.00）_7.在基因操

2、作实践中有哪些检测核酸和蛋白质相对分子质量的方法? （分数：3.00）_8.说说用 polyATtract 分离 mRNA 的主要过程。 （分数：3.00）_9.说说 cDNA 差示分析法的原理和主要实验流程。 （分数：3.00）_10.说说 Gateway 大规模克隆技术原理及基本操作流程。 （分数：3.00）_11.说说基因图位克隆法的原理和过程。 （分数：3.00）_12.说出基因组与蛋白质组的主要差别。 （分数：3.00）_13.说出蛋白质质谱技术的主要原理。 （分数：4.00）_14.说说蓝白斑筛选的分子机制。 （分数：4.00）_15.已知一个 cDNA3“端的部分序列，请设计实验

3、流程得到该基因的全长 cDNA。 （分数：4.00）_16.简述 RNA-seq 技术进行转录组学分析的原理。 （分数：4.00）_17.简述 RNA 原位杂交的主要实验过程及应用。 （分数：4.00）_18.简述基因芯片技术对分子生物学研究的意义。 （分数：4.00）_19.说出免疫共沉淀(CoIP)实验的原理与过程，比较酵母双杂交技术和免疫共沉淀技术在研究蛋白质相互作用方面的优缺点。 （分数：4.00）_20.简述 RNAi 原理以及在分子生物学领域应用的前景。 （分数：4.00）_21.简述基因定点突变的原理与实验过程。 （分数：4.00）_22.说出经典遗传学(forward gene

4、tics)与现代遗传学(reverse genetics)的异同。 （分数：4.00）_23.假设某哺乳动物基因可能编码了脂肪脱氢酶，请在酵母细胞中设计试验研究该基因的功能。 （分数：4.00）_24.蛋白质 Pull-down 实验原理与主要步骤。 （分数：4.00）_25.简述染色质免疫共沉淀(ChIP)技术原理与基本过程。 （分数：4.00）_26.什么是完全基因敲除和条件基因敲除? （分数：4.00）_27.简述酵母单、双杂交系统的基本原理与应用。 （分数：4.00）_28.说出凝胶滞缓实验的原理与应用。 （分数：4.00）_研究生入学考试专业课现代分子生物学-3 答案解析(总分：10

5、0.00，做题时间：90 分钟)一、论述题(总题数：28，分数：100.00)1.试述基因克隆载体进化过程。 （分数：3.00）_正确答案：()解析：自 Coben 等(1973)构建第一个质粒载体 pSC101 作克隆载体以来，随着分子生物学技术的发展，越来越多的克隆载体相继出现，克隆载体的发展划分为三个阶段：第一阶段以质粒(plasmid)、 噬菌体(bacteriophage)、柯斯质粒(cosmid，又称粘粒)为主，主要特点是载体在宿主细胞内稳定遗传、易分离、转化效率高，但是克隆容量有限，一般小于 45kb；第二阶段的克隆载体则突破了上述载体容量，显著特点是载体的容载能力扩大，为 10

6、0350 kb，主要有酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)以及源于噬菌体 P1 的人工染色体(PAC)；第三个发展阶段是以近几年发展起来的双元细菌人工染色体(BIBAC)和可转化人工染色体(TAC)，这些载体不仅具有较大的克隆容量，而且具备了直接转化植物进行功能互补实验的功能。这些载体的发展推动了结构基因组学和功能基因组学研究。2.试述 PCR 扩增的原理和过程。 （分数：3.00）_正确答案：()解析：PCR 技术是一种在体外快速扩增特定基因或 DNA 序列的方法。它可以快速将极微量的目的基因或某一特定的 DNA 片段扩增数十万乃至千百万倍。其基本原理是：首先将双链 DNA 分

7、子在临近沸点的温度下加热分离成两条单链 DNA 分子，DNA 聚合酶以单链 DNA 为模板并利用反应混合物中的四种脱氧核苷三磷酸合成新生的 DNA 互补链。新合成的 DNA 链的起点，由加入到反应混合物中的一对寡核苷酸引物在模板 DNA 链两端的退火决定的。DNA 解链(变性)、引物与模板 DNA 相结合(退火)、DNA 合成(延伸)三步，被不断重复。多次循环之后，反应混合物中所含有的双链 DNA 数，即两条引物位点之间的 DNA 区段的拷贝数，理论上的最高值是 2n。3.说说荧光染料 SYBR Green 和 TaqMan 荧光探针的主要不同点。 （分数：3.00）_正确答案：()解析：(1

8、)TaqMan 荧光探针(2 种荧光，短波长和长波长)：PCR 扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR 扩增时，Taq 酶的 5“-3“外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条 DNA 链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与 PCR 产物形成完全同步。 (2)SYBR 荧光染料(1 种荧光)：在 PCR 反应体系中，加入过量 SYBR 荧光染料，SYBR 荧光染料特异性地掺入 DNA

9、 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的 sYBR 染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。4.说出基因组 DNA 文库和 cDNA 文库的主要区别。 （分数：3.00）_正确答案：()解析：基因组 DNA 文库和 cDNA 文库的建库过程不同，产生的基因结构也不同，因此应用范围也不相同。主要表现在：(1)基因组文库克隆的是任何基因，包括未知功能的 DNA 序列，cDNA 文库克隆的是具有蛋白质产物的结构基因，包括调节基因；(2)基因组文库克隆的是全部遗传信息，不受时空影响，cDNA 文库克隆的是被转录 DNA 序列；(3)基因组文库中的编码基因是含有

10、内含子和外显子，而 cDNA 克隆的基因不含内含子；(4)基因组 DNA 文库可用于分离特定的基因片断、分析特定基因结构、研究基因表达调控、还可用于全基因组物理图谱的构建和全基因组序列测定，cDNA 文库可用于筛选目的基因、大规模测序、基因芯片杂交等功能基因组学研究。5.cDNA 合成时的方向性是如何实现的? （分数：3.00）_正确答案：()解析：在 cDNA 合成过程中，选用活性较高的反转录酶及甲基化 dCTP，在 cDNA 两端加上不同内切酶所识别的接头序列，可以保证所获得双链 cDNA 的方向性。6.试述不对称交错多聚酶链式反应(TAIL-PCR)的主要技术和原理? （分数：3.00）

11、_正确答案：()解析：TAIL-PCR 的基本原理：以基因组 DNA 为模板，利用依照目标序列旁的已知序列设计 3 个较高退火温度的嵌套特异性引物(special prime，SP)和 1 个具有低 T m 值的短的随机简并引物(Arbitrary degenerate prime，AD)相组合，通过 3 轮具热不对称的温度循环的分级反应来进行 PCR 扩增，获得已知序列的侧翼序列。 TAIL-PCR 一般分为 3 次反应： 第一次 PCR 反应是 TAIL-PCR 的重要环节，由 5 次高严谨循环、1 次低严谨循环、15 次热不对称的大循环构成。通过 5 次高严谨循环使 SP1 与已知的序列

12、退火并延伸，提高目标序列的浓度；1 次低严谨循环使简并引物结合到较多的目标序列上，随后进行 15 次 TAIL 循环。经过上述循环得到不同浓度的 3 种类型的产物：特异性序列(两端分别拥有 SP1 和 AD)、非特异性序列(只有 SP1，没有 AD)和非特异性序列(两端均为 AD) 第二次 PCR 反应：将第一次反应的产物稀释 1000 倍作为模板，以 SP2 和 AD 为引物，进行 12 个 TAIL-PCR 循环，特异性序列被选择性地扩增，而非特异性序列被压制到极低的含量。 第三次 PCR 反应：将第二次反应的产物稀释 1000 倍作为模板，以 SP3 和 AD 为引物，通过 15 次热不

13、对称的大循环可以得到较高含量的与已知序列邻近的目标序列。7.在基因操作实践中有哪些检测核酸和蛋白质相对分子质量的方法? （分数：3.00）_正确答案：()解析：凝胶电泳技术、双向电泳技术、质谱分析技术等方法都可用来检测核酸和蛋白质相对分子质量的方法。 (1)凝胶电泳技术。 将某种蛋白质或核酸分子放到特定的电场中，它就会以一定的速度向适当的电极移动，其迁移率与电场强度和该分子本身所携带的净电荷数成正比，由于凝胶为无反应活性的稳定的支持介质，故迁移率与分子的摩擦系数成反比(相对分子质量大小、极性、介质的粘度系数等)。 (2)双向电泳技术。 双向电泳技术是分离混合蛋白质最常用的方法。该方法是依赖于蛋

14、白质的等电点的不同和相对分子质量的不同而构建的，运用等电聚焦和 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，把复杂的蛋白质混合物中的蛋白在二维平面上分离展开。 (3)质谱分析技术。 质谱分析技术是一种超灵敏的鉴定技术，常用的 MALDI-TOF 的工作原理是将从 2-D 胶中分离得到的或其他来源的蛋白质酶解成小肽段后与基质混合，将样品混合物点到金属靶表面上并使之干燥结晶，然后用激光轰击，将呈离子化气体状态的待分析物从靶表面喷射出去。离子化的气体中每个分子带有一个或更多的正电荷，这些气体肽段在电场中被加速后到达检测器的时间由肽段的分子质量和其所带电荷数的比值(m/z)决定。8.说说用 polyATtract 分

15、离 mRNA 的主要过程。 （分数：3.00）_正确答案：()解析：polyAT tract mRNA 分离系统将生物素标记的寡(dT)引物与细胞总 RNA 温育，加入与微磁球相连的抗生物索蛋白以结合 polyA mRNA，通过磁场吸附作用将 poly(A)mRNA 从总 RNA 中分离。9.说说 cDNA 差示分析法的原理和主要实验流程。 （分数：3.00）_正确答案：()解析：基本原理：该法充分发挥了 PCR 技术以指数形式扩增双链 DNA 模板的特性，通过降低 cDNA 群体复杂性和更换 cDNA 两端接头等方法，特异性扩增目的基因片段。试验对象和供试探针经 4 碱基切割酶处理，形成平均

16、长度 256bp 的代表群然后通过 PCR 和杂交等步骤获得差异表达的基因。 主要实验流程：将含目的基因的试验对象(Tester，T)与不含目的基因的供试探针(Driver，D)分别用 4 碱基切割酶处理，得到平均长度为 256bp 的代表群，加 12/24 碱基接头，补平末端，以 24 碱基的互补序列为引物进行 PCR，T 改换新接头，D 不加接头，将 T 与 D 按 1:100 杂交，设计新接头引物，通过 PCR，指数扩增产物差异产物。10.说说 Gateway 大规模克隆技术原理及基本操作流程。 （分数：3.00）_正确答案：()解析：基本原理：利用 噬菌体进行位点特异性 DNA 片段重

17、组，通过整合与切除反应，实现基因快速克隆和载体间平行转移。 Gateway 大规模克隆技术包括 TOPO 反应和 LR 反应两步。基本操作流程：TOP0 反应将目的基因 PCR 产物连入 Entry 载体，载体上的 CCCTT 被拓扑异构酶所识别，通过与切口处的磷酸基团形成共价键，将该酶偶联在载体上。5“GTGG 粘性末端攻击 PCR 产物的互补性末端并与接头序列 CACC 退火，使 PCR 产物以正确方向连入 Entry 载体。LR 反应将目的片段从 Entry 载体中重组入表达载体，Entry 载体上基因两端具有 attL1和 attL2 位点，目的载体上含有 attR1 和 attR2

18、位点，在重组蛋白的作用下发生定向重组，形成新的位点attB1 和 attB2，将目的基因转移到表达载体中。11.说说基因图位克隆法的原理和过程。 （分数：3.00）_正确答案：()解析：所有具有某种表现型的基因都可以通过基因图位克隆法克隆得到。其基本原理和过程： 首先，通过构建遗传连锁图，将目的基因定位到某染色体的特定位点，并在其两侧确定紧密连锁的 RFLP或 RAPD 分子标记。其次通过对许多不同的生态型及大量限制性内切酶和杂交探针的分析，找出与目的基因距离最近的 RFLP 标记，通过染色体步移技术将位于这两个标记之间的基因片段克隆并分离出来。然后，根据基因功能互作原理鉴定目的基因。12.说

19、出基因组与蛋白质组的主要差别。 （分数：3.00）_正确答案：()解析：基因组是确定的，每个个体只有一个基因组，而基因的表达调控水平(蛋白组)却会发生显著的变化。13.说出蛋白质质谱技术的主要原理。 （分数：4.00）_正确答案：()解析：现行质谱仪主要有三个连续的组成部分，即离子源，离子分离区和检测器，较常用的有基质辅助的激光解析电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF)和电喷雾质谱(ESI-MS)。MALDI-TOF 的工作原理：将蛋白质酶解成小肽段后与基质(主要是有机酸)混合，将样品混合物点到金属靶表面上并使之干燥结晶，然后用激光轰击，将呈离子化气体状态的待分析物从靶表面喷射出去。离子化气

20、体肽段在电场中被加速后到达检测器的时间由肽段的质量和其所带电荷数的比值(m/z)决定。14.说说蓝白斑筛选的分子机制。 （分数：4.00）_正确答案：()解析：蓝白斑筛选是一种基因工程常用的重组子筛选方法，是根据载体的遗传特征筛选重组子。大肠杆菌-半乳糖苷酶可分成 2 部分即 -肽段(N-端的 146 个 aa)和 C-段。-肽段的基因位于载体上并含有不影响其 ORF 的多克隆位点(MCS)，而 C-段的基因位于工程菌 E.coli DH5 上。二者在同一菌株中表达时，菌株中的 C-段与载体上的 -肽段互补而具有酶活性，能将无色化合物 X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-D-半乳糖苷)切割成

21、半乳糖和深蓝色的物质 5-溴-4-靛蓝。在 MCS 上插入新基因将会改变其 0RF 而使得载体上的 -肽段不能与菌株中的 C-段互补而不能无色化合物 X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-D-半乳糖苷)切割成半乳糖和深蓝色的物质 5-溴-4-靛蓝产生白斑。15.已知一个 cDNA3“端的部分序列，请设计实验流程得到该基因的全长 cDNA。 （分数：4.00）_正确答案：()解析：提取 RNA，以 oligo dT 在 M-MLV 反转录酶的作用下引导反转录合成 cDNA，用 TdT 在合成的 cDNA 末端加上 poly C 尾，在反应体系中加 1.0L 的 TdT 于 37反应 15min

22、以加尾的 dC-cDNA 为模板，用接头引物 Adapter dG 分别和基因特异性引物进行 PCR，扩增基因 5“末端。将 5“端的扩增片段克隆到 pMD18-T simple 载体上，转化大肠杆菌 E.coli Top10F 感受态细胞，阳性转化子经 PCR 筛选后测序。16.简述 RNA-seq 技术进行转录组学分析的原理。 （分数：4.00）_正确答案：()解析：利用高通量测序技术对转录组进行测序分析，对测序得到的大量原始读长(reads)进行过滤、组装及生物信息学分析的过程被称为 RNA-Seq。对于有参考基因组序列的物种，需要根据参考序列进行组装，对于没有参考序列的，需要进行从头组

23、装，利用大量读长之间重叠覆盖和成对读长的相对位置关系，组装得到尽可能完整的转录本，并以单位长度转录本上覆盖的读长数目作为衡量基因表达水平的标准。在实际组装过程中，覆盖度过低且读长缺乏相对位置信息的区域，其可信度较低，应当剔除，保留两侧序列。17.简述 RNA 原位杂交的主要实验过程及应用。 （分数：4.00）_正确答案：()解析：RNA 原位杂交用放射性或非放射性(如地高辛、生物素等)标记的特异性探针与被固定的组织切片反应，若细胞中存在与探针互补的 mRNA 分子，两者杂交产生双链 RNA，就可通过检测放射性标记或经酶促免疫显色，对该基因的表达产物在细胞水平上做出定性定量分析。RNA 原位杂交

24、常被用于检测动植物组织中某种特定基因的 mRNA 的分布状况，以了解该基因的表达模式；在基因分析和诊断方面能够进行定性、定位和定量分析。18.简述基因芯片技术对分子生物学研究的意义。 （分数：4.00）_正确答案：()解析：基因芯片技术以其可同时、快速、准确地分析数以千计基因组信息的本领而在分子生物学领域显示出了巨大的威力。(1)在基因表达检测方面，可以一次性检测数千个基因表达谱的差异。(2)在核酸突变的检测及基因组多态性方面，可以用于核酸突变的检测，甚至可与生物传感器相结合，通过改变探针阵列区域的电场强度可以检测到基因(ras 等)的单碱基突变；以成功应用于人类基因组单核苷酸多态性的鉴定、作

25、图和分型、人线粒体基因组多态性的研究，对酵母基因组作图等方面。(3)基因芯片技术可以比较容易地合成并固定大量核酸分子，所以它的问世无疑为杂交测序提供了实施的可能性。19.说出免疫共沉淀(CoIP)实验的原理与过程，比较酵母双杂交技术和免疫共沉淀技术在研究蛋白质相互作用方面的优缺点。 （分数：4.00）_正确答案：()解析：(1)免疫共沉淀(CoIP)实验的核心是通过抗体来特异性识别候选蛋白。首先，将靶蛋白的抗体通过亲和反应连接到固体基质上，再将可能与靶蛋白发生相互作用的待筛选蛋白加入反应体系中，用低离心力沉淀或微膜过滤法在固体基质和抗体的共同作用下将蛋白复合物沉淀到试管的底部或微膜上。如果靶蛋

26、白质与待筛选蛋白发生了相互作用，那么，这个待筛选蛋白质就通过靶蛋白与抗体和固体基质相互作用而被分离出来。 免疫共沉淀技术在研究蛋白质相互作用方面的优点：相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的，处于天然状态；蛋白的相互作用是在自然状态下进行的，可以避免人为的影响；可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。缺点：可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质-蛋白质相互作用；两种蛋白质的结合可能不是直接结合，而可能有第三者在中间起桥梁作用；必须在实验前预测目的蛋白是什么，以选择最后检测的抗体，所以，若预测不正确，实验就得不到结果，方法本身具有冒险性。 (2)酵母双杂交系统检测蛋白之间的相互作用具有以下优点：作用信

27、号是在融合基因表达后，在细胞内重建转录因子的作用而给出的，省去了纯化蛋白质的繁琐步骤；检测在活细胞内进行，可以在一定程度上代表细胞内的真实情况；检测的结果可以是基因表达产物的积累效应，因而可检测存在于蛋白质之间的微弱的或暂时的相互作用；酵母双杂交系统可采用不同组织、器官、细胞类型和分化时期材料构建 cDNA 文库，能分析细胞浆、细胞核及膜结合蛋白等多种不同亚细胞部位及功能的蛋白。酵母双杂交系统局限性和存在的问题：双杂交系统分析蛋白间的相互作用定位于细胞核内，而许多蛋白间的相互作用依赖于翻译后加工如糖基化、二硫键形成等，这些反应在核内无法进行；有些蛋白的正确折叠和功能有赖于其他非酵母蛋白的辅助，

28、这限制了某些细胞外蛋白和细胞膜受体蛋白等的研究；酵母双杂交系统的一个重要的问题是“假阳性”。20.简述 RNAi 原理以及在分子生物学领域应用的前景。 （分数：4.00）_正确答案：()解析：利用双链小 RNA 高效、特异性降解细胞内同源 mRNA 从而阻断靶基因表达，使细胞出现靶基因缺失的表型。 RNAi 的生物学意义主要是维持基因组稳定、抑制转基因表达和保护基因组免受外源核酸侵入。将可用于以下几个方面：(1)进行基因功能分析；(2)为研究信号传导通路提供一条新的途径；(3)RNAi 还可以作为寻找新的药物靶标的工具，可以高通量地发现药物靶基因，帮助新药物的研究和开发，了解药物作用的生化模式

29、等；(4)用于基因治疗；(5)RNAi 还可用于细胞周期调控、代谢、膜转运以及 DNA 损伤反应、转录或甲基化等多种方面的基因功能研究。21.简述基因定点突变的原理与实验过程。 （分数：4.00）_正确答案：()解析：基本原理：通过聚合酶链式反应(PCR)等方法向目的 DNA 片段(可以是基因组，也可以是质粒)中引入所需变化(通常是表征有利方向的变化)，包括碱基的添加、删除、点突变等。目前，主要采用两种 PCR方法，重叠延伸技术和大引物诱变法，在基因序列中进行定点突变。 重叠延伸技术：首先将模板 DNA 分别与引物对 1(正向诱变引物 FM 和反向引物 R2)和 2(正向引物 F2 和反向诱变

30、引物 RM)退火，通过 PCR1 和 2 反应扩增出两种靶基因片段；FMR2 和 RMF2 片段在重叠区发生退火，用 DNA 聚合酶补平缺口，形成全长双链 DNA，进行 PCR3 扩增；最后，用引物 F2 和 R2 扩增出带有突变位点的全长 DNA 片段(PCR4)。 大引物诱变法：首先用正向突变引物(M)和反向引物(R1)，扩增模板 DNA 产生双链大引物(PCR1)，与野生型 DNA 分子混合后退火并使之复性，第二轮 PCR 中加入正向引物(F2)，与 PCRl 中产生的一条互补链配对，扩增产生带有突变的双链 DNA；进行 DNA 序列分析验证突变位点。22.说出经典遗传学(forward

31、 genetics)与现代遗传学(reverse genetics)的异同。 （分数：4.00）_正确答案：()解析：两者都是探讨基因结构与功能的关系。经典遗传学是从一个突变体的表型出发，研究其基因型，进而找出该基因的编码序列；而现代遗传学首先从基因序列出发，推测其表型，进而推导出该基因的功能。23.假设某哺乳动物基因可能编码了脂肪脱氢酶，请在酵母细胞中设计试验研究该基因的功能。 （分数：4.00）_正确答案：()解析：首先，克隆该哺乳动物中可能编码脂肪脱氢酶的全长基因，然后，将克隆的目的基因插入到酵母表达载体的相应启动子下，接着，把构建好的携带目的基因的表达载体转化到酵母脂肪脱氢酶突变体，检

32、测表达载体的基因产物能否在突变体中功能互补。脂肪脱氢酶突变体中，代谢活动异常，涉及的代谢反应在这一步终止，当该基因转到突变体后，相应代谢途径的生化反应恢复正常即说明该基因编码了脂肪酸脱氢酶，并执行了相应的功能。24.蛋白质 Pull-down 实验原理与主要步骤。 （分数：4.00）_正确答案：()解析：(1)实验原理：通过与 GST 融合蛋白质探针蛋白质相互作用从可溶性蛋白质库中亲和纯化一个未知蛋白质，再通过 GST 与谷胱甘肽偶联的琼脂糖球珠的结合收集相互作用蛋白质，从而分离出蛋白质复合物。(2)主要步骤：GST 融合蛋白先与下列蛋白溶液之一孵育(a单一明确的重组蛋白；b细胞裂解蛋白混合液

33、；c体外翻译 cDNA 表达得到的未知蛋白)；混合液与谷胱甘肽琼脂糖球珠在 4反应 2 h；离心弃上清；沉淀加入 2蛋白 Loading Buffer 煮沸，离心；取上清进行 SDS-PAGE 电泳；考马氏亮兰染色观察特异沉降的蛋白带，进一步做质谱分析确定沉降的蛋白；电泳后的胶也可以做 Western Blot 来确定沉降的蛋白中是否有目的蛋白。25.简述染色质免疫共沉淀(ChIP)技术原理与基本过程。 （分数：4.00）_正确答案：()解析：(1)基本原理：在活细胞状态下固定蛋白质-DNA 复合物，并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过免疫学方法沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的 DNA 片段，通过对目的片断的纯化与检测，从而获得能真实、完整地反映蛋白质与 DNA 相互作用的信息。 (2)基本过程：甲醛处理细胞，使 DNA 和蛋白质固定在交联状态超声或酶法等处理，获得一定长度范围内的染色质小片段加入目的蛋白的抗体，与靶蛋白-DNA 复合物相互结合加入 ProteinA，结合抗体-靶蛋白-DNA 复合物，并沉淀对沉淀下来的复合物进行清洗，除去一些非特异性结合得到富集的靶蛋白-DNA 复合物解除交联，对纯化富集的 DNA-片断进行 PCR 检测与分析，获得蛋白质与 DNA 相互作用的信息。26.什么是完全基因敲除和条件基因敲除? （分数：4.00）_