ISO 23753-2-2005 Soil quality - Determination of dehydrogenase activity in soils - Part 2 Method using iodotetrazolium chloride (INT)《土壤质量 土壤中脱氢酶活性的测定 第2部分 氯化四氮.pdf

《ISO 23753-2-2005 Soil quality - Determination of dehydrogenase activity in soils - Part 2 Method using iodotetrazolium chloride (INT)《土壤质量 土壤中脱氢酶活性的测定 第2部分 氯化四氮.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《ISO 23753-2-2005 Soil quality - Determination of dehydrogenase activity in soils - Part 2 Method using iodotetrazolium chloride (INT)《土壤质量 土壤中脱氢酶活性的测定 第2部分 氯化四氮.pdf（12页珍藏版）》请在麦多课文档分享上搜索。

1、 Numro de rfrence ISO 23753-2:2005(F) ISO 2005NORME INTERNATIONALE ISO 23753-2 Premire dition 2005-11-01Qualit du sol Dtermination de lactivit des dshydrognases dans les sols Partie 2: Mthode au chlorure de iodottrazolium (CIT) Soil quality Determination of dehydrogenase activity in soils Part 2: Me

2、thod using iodotetrazolium chloride (INT) ISO 23753-2:2005(F) PDF Exonration de responsabilit Le prsent fichier PDF peut contenir des polices de caractres intgres. Conformment aux conditions de licence dAdobe, ce fichier peut tre imprim ou visualis, mais ne doit pas tre modifi moins que lordinateur

3、employ cet effet ne bnficie dune licence autorisant lutilisation de ces polices et que celles-ci y soient installes. Lors du tlchargement de ce fichier, les parties concernes acceptent de fait la responsabilit de ne pas enfreindre les conditions de licence dAdobe. Le Secrtariat central de lISO dclin

4、e toute responsabilit en la matire. Adobe est une marque dpose dAdobe Systems Incorporated. Les dtails relatifs aux produits logiciels utiliss pour la cration du prsent fichier PDF sont disponibles dans la rubrique General Info du fichier; les paramtres de cration PDF ont t optimiss pour limpression

5、. Toutes les mesures ont t prises pour garantir lexploitation de ce fichier par les comits membres de lISO. Dans le cas peu probable o surviendrait un problme dutilisation, veuillez en informer le Secrtariat central ladresse donne ci-dessous. DOCUMENT PROTG PAR COPYRIGHT ISO 2005 Droits de reproduct

6、ion rservs. Sauf prescription diffrente, aucune partie de cette publication ne peut tre reproduite ni utilise sous quelque forme que ce soit et par aucun procd, lectronique ou mcanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans laccord crit de lISO ladresse ci-aprs ou du comit membre de lISO d

7、ans le pays du demandeur. ISO copyright office Case postale 56 CH-1211 Geneva 20 Tel. + 41 22 749 01 11 Fax + 41 22 749 09 47 E-mail copyrightiso.org Web www.iso.org Version franaise parue en 2011 Publi en Suisse ii ISO 2005 Tous droits rservsISO 23753-2:2005(F) ISO 2005 Tous droits rservs iiiSommai

8、re Page Avant-propos .iv Introduction.v 1 Domaine dapplication 1 2 Rfrences normatives.1 3 Principe 1 4 Ractifs et produits.2 5 Appareillage .3 6 Mode opratoire.3 7 Calculs3 8 Rapport dessai4 Bibliographie.5 ISO 23753-2:2005(F) iv ISO 2005 Tous droits rservsAvant-propos LISO (Organisation internatio

9、nale de normalisation) est une fdration mondiale dorganismes nationaux de normalisation (comits membres de lISO). Llaboration des Normes internationales est en gnral confie aux comits techniques de lISO. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de faire partie du comit technique cr cet ef

10、fet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec lISO participent galement aux travaux. LISO collabore troitement avec la Commission lectrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation lectrotechnique. Les Normes internationales s

11、ont rdiges conformment aux rgles donnes dans les Directives ISO/CEI, Partie 2. La tche principale des comits techniques est dlaborer les Normes internationales. Les projets de Normes internationales adopts par les comits techniques sont soumis aux comits membres pour vote. Leur publication comme Nor

12、mes internationales requiert lapprobation de 75 % au moins des comits membres votants. Lattention est appele sur le fait que certains des lments du prsent document peuvent faire lobjet de droits de proprit intellectuelle ou de droits analogues. LISO ne saurait tre tenue pour responsable de ne pas av

13、oir identifi de tels droits de proprit et averti de leur existence. LISO 23753-2 a t labore par le comit technique ISO/TC 190, Qualit du sol, sous-comit SC 4, Mthodes biologiques. LISO 23753 comprend les parties suivantes, prsentes sous le titre gnral Qualit du sol Dtermination de lactivit des dshyd

14、rognases dans les sols: Partie 1: Mthode au chlorure de triphnylttrazolium (CTT) Partie 2: Mthode au chlorure de iodottrazolium (CIT) ISO 23753-2:2005(F) ISO 2005 Tous droits rservs vIntroduction La microflore du sol est responsable de la dcomposition et de la transformation des matires organiques,

15、de la stabilit de sa structure et des cycles du carbone, de lazote, du soufre et du phosphore. Les dshydrognases, en tant quenzymes de la chane respiratoire, jouent un rle fondamental dans la production dnergie par les organismes. Elles permettent loxydation des composs organiques en transfrant deux

16、 atomes dhydrogne. Les dshydrognases sont des composants essentiels du systme enzymatique des micro-organismes. Lactivit des dshydrognases peut donc tre utilise comme indicateur des ractions biologiques doxydorduction ainsi que pour mesurer lactivit microbienne dans le sol. NORME INTERNATIONALE ISO

17、23753-2:2005(F) ISO 2005 Tous droits rservs 1Qualit du sol Dtermination de lactivit des dshydrognases dans les sols Partie 2: Mthode au chlorure de iodottrazolium (CIT) 1 Domaine dapplication La prsente partie de lISO 23753 spcifie une mthode de dtermination de lactivit des dshydrognases dans le sol

18、 laide de chlorure de 2-(4-iodophnyl)-3-(4-nitrophnyl)-5-phnylttrazolium (CIT). Comme la rduction par le CIT est moins sensible la prsence dO 2 , cette mthode est plus reproductible que la mthode au CTT dcrite dans lISO 23753-1. Elle ne sapplique pas la dtermination de lactivit des dshydrognases dan

19、s les couches suprieures (horizons L, F et H) des formes dhumus de fort faible activit microbienne (par exemple le mor), ou dans les sols prsentant des proprits rductrices (par exemple les sols saturs deau). 2 Rfrences normatives Les documents de rfrence suivants sont indispensables pour lapplicatio

20、n du prsent document. Pour les rfrences dates, seule ldition cite sapplique. Pour les rfrences non dates, la dernire dition de la publication laquelle il est fait rfrence (y compris tous les amendements) sapplique. ISO 10381-6, Qualit du sol chantillonnage Partie 6: Lignes directrices pour la collec

21、te, la manipulation et la conservation de sols destins une tude en laboratoire des processus microbiens arobies ISO 10390, Qualit du sol Dtermination du pH ISO 11259, Qualit du sol Description simplifie du sol ISO 11465, Qualit du sol Dtermination de la teneur pondrale en matire sche et en eau Mthod

22、e gravimtrique 3 Principe La solution de CIT est ajoute un chantillon de sol et le mlange est incub 30 C pendant 18 h. Liodonitrottrazolium formazan (INTF) dgag est extrait lactone (dans le cas des sols humiques) et dos par photomtrie une longueur donde de 485 nm. NOTE 1 Cette mthode est fonde sur u

23、ne version modifie de la mthode dcrite dans la Rfrence 1. NOTE 2 Lactone est utilis comme solvant dextraction et il nest pas procd une extraction complte des chantillons. Dans le cas des sols ayant des caractristiques rductrices (par exemple les sols saturs deau), il convient de ne pas utiliser lact

24、ivit des dshydrognases pour mesurer lactivit biologique dans le sol 3 . Des composs abiotiques, tels que les composs du fer(II) ou les sulfures, peuvent rduire le CIT. ISO 23753-2:2005(F) 2 ISO 2005 Tous droits rservs4 Ractifs et produits 4.1 Sol Prlever et prparer des chantillons de sol comme spcif

25、i dans lISO 10381-6. Si les chantillons qui ont t tamiss ltat frais ne sont pas analyss immdiatement, ils peuvent tre conservs pendant une dure maximale de trois mois une temprature de 4 C. Dterminer la teneur en matire sche de lchantillon conformment lISO 11465. La conservation pouvant modifier lac

26、tivit enzymatique, il convient de ne pas comparer lactivit des dshydrognases dchantillons conservs pendant une dure diffrente. 4.2 Acide chlorhydrique, c(HCl) = 1 mol/l. 4.3 Solution tampon tris, c = 0,1 mol/l. Dissoudre 12,11 g de tris (hydroxymthyl) aminomthane dans 600 ml deau distille et ajuster

27、 le pH : a) 7,7 pour les sols dont la teneur en carbonate est suprieure 2 %, ou b) 7,9 pour les sols dont la teneur en carbonate est infrieure ou gale 2 % en utilisant une solution dacide chlorhydrique 1 mol/l, puis complter 1 000 ml avec de leau distille. Dterminer le pH conformment lISO 10390. 4.4

28、 Solution de substrat (CIT) Peser 900 mg de chlorure de 2-(4-iodophnyl)-3-(4-nitrophnyl)-5-phnylttrazolium dans une fiole conique de 100 ml place sur un agitateur magntique et y ajouter 100 ml de la solution tampon tris (4.3). Ajouter ensuite le reste de la solution tampon tris et traiter le mlange

29、avec une sonde ultrasons pendant 1 min 2 min pour dissoudre le CIT autant que possible et obtenir une suspension. Enlever ultrieurement une partie de la suspension tout en agitant pour garder une solution homogne. Dterminer la texture du sol conformment lISO 11259. La solubilit du CIT dans la soluti

30、on tampon tris de pH 7,7 est au plus de 5 mg/ml. Au cours de lincubation, la dissolution du CIT dans la suspension provoque une lgre augmentation jusqu 7 mg/ml au maximum. Par consquent, il convient dutiliser 9 mg/ml. 4.5 Actone de qualit analytique 4.6 Solutions dINTF 4.6.1 Solution mre dINTF Peser

31、 50 mg diodonitrottrazolium formazan dans une fiole jauge de 100 ml, le dissoudre dans de lactone et complter 100 ml. 4.6.2 Solutions dtalonnage dINTF Introduire la pipette respectivement 0 ml, 0,5 ml, 1,0 ml, 2,0 ml, 3,0 ml et 4,0 ml de la solution mre dans une srie de fioles jauges de 50 ml. Ajout

32、er un peu dactone (utiliser le solvant dextraction dj utilis dans les chantillons), ajouter 10 ml de solution tampon tris et complter au trait avec de lactone afin dobtenir des concentrations respectives de 0 g, 5 g, 10 g, 20 g, 30 g et 40 g dINTF par ml de mlange de solution tampon et dactone. Puis

33、que le CIT et lINTF sont sensibles la lumire, il convient de protger les solutions des rayons lumineux tout au long de lanalyse. ISO 23753-2:2005(F) ISO 2005 Tous droits rservs 35 Appareillage 5.1 Photomtre. 5.2 pH-mtre. 5.3 Tubes essai, par exemple de 2 cm de diamtre et dune capacit minimale de 30

34、ml (prise dessai de 5 g; voir galement lArticle 6). 5.4 tuve, rglable (30 1) C. 5.5 Fioles coniques, fioles jauges, pipettes et entonnoirs appropris. 5.6 Filtre plis, filtrage lent (90 s 100 s). 5.7 Sonde ultrasons. 5.8 Agitateur pour tubes essai. 6 Mode opratoire Peser 2,00 g 5,00 g de sol naturell

35、ement humide dans chacun de quatre tubes essai. Ajouter 2 ml 5 ml de la solution de substrat (4.4) trois chantillons. Introduire la pipette 2 ml 5 ml de solution tampon tris (4.3), au lieu de la solution de substrat (4.4), dans lchantillon blanc. Homogniser les chantillons sur lagitateur pour tubes

36、essai, obturer les tubes avec un bouchon en caoutchouc et les mettre incuber dans lobscurit 30 C pendant 18 h. Pour extraire le formazan dgag, ajouter 20 ml dactone aux chantillons et les laisser reposer 2 h labri de la lumire. Agiter les chantillons sur lagitateur 1 h, et de nouveau 2 h, aprs avoir

37、 ajout le solvant dextraction. Filtrer ensuite les chantillons en conditions de semi-obscurit laide dun filtre plis. Dans lheure qui suit, mesurer labsorbance des filtrats en fonction du point zro de la courbe dtalonnage par photomtrie une longueur donde de 485 nm. 7 Calculs Dterminer lactivit des d

38、shydrognases (pour des sols secs) laide de la courbe dtalonnage et de lquation suivante: () cs bs 100 DM V a mt = o a est lactivit des dshydrognases, en g/g de sol sec par heure; cs est la concentration en INTF moyenne de lchantillon complet, en g/ml; bs est la concentration en INTF moyenne de lchan

39、tillon blanc, en g/ml; V est le volume de la solution = volume de la solution de substrat ou de la solution tampon (5 ml) + volume du solvant dextraction (25 ml), en ml; m est la masse initiale de lchantillon de sol, en g; DM est la teneur en matire sche de lchantillon conformment lISO 11465, en pou

40、rcentage; t est le temps dincubation (ici 18 h), en h. ISO 23753-2:2005(F) 4 ISO 2005 Tous droits rservs8 Rapport dessai Le rapport dessai doit faire rfrence la prsente partie de lISO 23753 et comporter les lments suivants: a) lidentification de lchantillon; b) la dure et la temprature de conservati

41、on (4.1); c) la classe de texture du sol; d) la teneur en carbonate du sol (voir Rfrence 7); e) les rsultats dessai; f) tous les dtails facultatifs et tous les carts par rapport aux spcifications de la prsente partie de lISO 23753, ainsi que tous les effets susceptibles davoir eu une incidence sur l

42、es rsultats. ISO 23753-2:2005(F) ISO 2005 Tous droits rservs 5Bibliographie 1 SPOTHELFER-MAGANA, J., THALMANN, A. and SCHWEIKLE, V., Methode zur Bestimmung der Dehydrogenaseaktivitt von Bden unter Einsatz von Iodotetrazoliumchlorid (INT): Chemische Reduktion in autoklavierten sowie bestrahlten Bden

43、sowie der Einflu der Inkubationstemperatur und zeit. Agribiol. Res., 46, 1993, pp. 250268 2 THALMANN, H., Zur Methodik der Bestimmung der Dehydrogenaseaktivitt im Boden mittels Triphenyltetrazoliumchlorid (TTC). Landwirtsch. Forsch., 21, 1968, pp. 243258 3 GLATHE, H. and THALMANN, H., Microbial acti

44、vity and its relationship to fertility characteristics of some agricultural soils, with particular reference to dehydrogenase activity. Part 2. Zbl Bakt II, 124, 1970, pp. 2436 4 MERSI, W. VON and SCHINNER, F., An improved and accurate method for determining the activity of soils with iodotetrazoliu

45、m chloride. Bio. Fertil. Soils, 11, 1991, pp. 216220 5 HLINGER, R., Determination of dehydrogenase activity using TTC. In: Methods in soil biology. (SCHINNER, F., HLINGER, R., KANDELER, E. and MARGESIN, R. eds.). Springer-Verlag, Berlin/Heidelberg/New York, 2nd ed., 1993 6 FUCHS, M., KOCH, C. and WI

46、LKE, B.-M., Modification of the determination of dehydrogenase activity using tetrazolium chloride for soils contaminated by heavy metals. VDLUFA-Schriftenreihe, 38, 1994, pp. 899902 7 ISO 10693, Qualit du sol Dtermination de la teneur en carbonate Mthode volumtrique ISO 23753-2:2005(F) ICS 13.080.30 Prix bas sur 5 pages ISO 2005 Tous droits rservs