ISO 14718-1998 Animal feeding stuffs - Determination of aflatoxin B1 content of mixed feeding stuffs - Method using high-performance liquid chromatography《动物饲料 .pdf

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1、A Numroderfrence ISO14718:1998 (F) NORME INTERNATIONALE ISO 14718 Premiredition 19981215 AlimentsdesanimauxDterminationde lateneurenaflatoxineB 1 danslesaliments compossMthodeparchromatographie liquidehauteperformance AnimalfeedingstuffsDeterminationofaflatoxinB 1 contentofmixed feedingstuffsMethodu

2、singhighperformanceliquidchromatographyISO14718:1998(F) ISO1998 Droitsdereproductionrservs.Saufprescriptiondiffrente,aucunepartiedecettepublicationnepeuttrereproduiteniut ilisesousquelque formequecesoitetparaucunprocd,lectroniqueoumcanique,ycomprislaphotocopieetlesmicrofilms,sanslaccordcr itdelditeu

3、r. Organisationinternationaledenormalisation Casepostale56 CH1211Genve20 Suisse Internet isoiso.ch ImprimenSuisse ii Avantpropos LISO(Organisationinternationaledenormalisation)estunefdrationmondialedorganismesnationauxde normalisation(comitsmembresdelISO).LlaborationdesNormesinternationalesestengnra

4、lconfieaux comitstechniquesdelISO.Chaquecomitmembreintressparunetudealedroitdefairepartieducomit techniquecrceteffet.Lesorganisationsinternationales,gouvernementalesetnongouvernementales,en liaisonaveclISOparticipentgalementauxtravaux.LISOcollaboretroitementaveclaCommission lectrotechniqueinternatio

5、nale(CEI)encequiconcernelanormalisationlectrotechnique. LesNormesinternationalessontrdigesconformmentauxrglesdonnesdanslesDirectivesISO/CEI,Partie3. LesprojetsdeNormesinternationalesadoptsparlescomitstechniquessontsoumisauxcomitsmembrespour vote.LeurpublicationcommeNormesinternationalesrequiertlappr

6、obationde75 %aumoinsdescomits membresvotants. LaNormeinternationaleISO 14718atlaboreparlecomittechniqueISO/TC 34, Produitsagricoles alimentaires,souscomitSC10, Alimentsdesanimaux . LesannexesAetBdelaprsenteNormeinternationalesontdonnesuniquementtitredinformation.NORMEINTERNATIONALE ISO ISO14718:1998

7、(F) 1 AlimentsdesanimauxDterminationdelateneurenaflatoxine B 1 danslesalimentscompossMthodeparchromatographie liquidehauteperformance 1Domaine dapplication LaprsenteNormeinternationalespcifieunemthodeparchromatographieenphaseliquidehauteperformance (CLHP)pourladterminationdelateneurenaflatoxineB 1 d

8、anslesalimentspouranimaux,ycomprisceux contenantdelapulpedagrumes. Lalimiteinfrieurededtectionestde1g/kgdaflatoxineB 1 . NOTE1 LaprsenteNormeinternationalepeutsappliquerladterminationdelateneurenaflatoxineB 1 dansungrand nombredematirespremiresetdalimentssimples,telsqueglutendemas,arachide,curdepalm

9、ier,coprah,pulpe dagrumes,farinedemanioc,soja,sonderiz,son,grainesdecolza,grainesdenigeretgrainesdecoton(voirlesrfrences 1et2).Cesmatriauxnontcependantpastinclusdanslessaiinterlaboratoiresdelamthode. NOTE2 LaprsenteNormeinternationalepeutgalementsappliquerladterminationdelensembledesaflatoxinesB 1 ,

10、 B 2 ,G 1 etG 2 .Lamthodenacependantpastvalidepourceparamtrepardesessaisinterlaboratoires. 2Rfrence normative Ledocumentnormatifsuivantcontientdesdispositionsquiparsuitedelarfrencequienestfaite,constituentdes dispositionsvalablespourlaprsenteNormeinternationale.Pourlesrfrencesdates,lesamendements ul

11、trieursoulesrvisionsdecespublicationsnesappliquentpas.Toutefois,lespartiesprenantesauxaccords fondssurlaprsenteNormeinternationalesontinvitesrechercherlapossibilitdappliquerlditionlaplus rcentedudocumentnormatifindiquciaprs.Pourlesrfrencesnondates,ladernireditiondudocument normatifenrfrencesapplique

12、.LesmembresdelaCEIetdelISOpossdentleregistredesNormes internationalesenvigueurunmomentdonn. ISO6498:1998, AlimentspouranimauxPrparationdeschantillonspouressai. 3Principe Lchantillonestextraitauchloroforme.Lextraitestfiltretunepartiealiquoteestpurifiesurunecartouchede Florisil 1) etsurunecartouchedeC

13、 18 .Lasparationfinaleetladterminationsontralisesparchromatographie enphaseliquidehauteperformance(CLHP),enutilisantunecolonneC 18 polaritdephasesinverse,suivie, lasortiedelacolonne,delaformationdedrivsavecdeliodeoudubrome,etdunemesuredelafluorescence. 1) Florisil estlappellationcommercialedunprodui

14、tdisponiblesurlemarch.Cetteinformationestdonnelintentiondes utilisateursdelaprsenteNormeinternationaleetnesignifienullementquelISOapprouveourecommandelemploiexclusif duproduitainsidsign.Desproduitsquivalentspeuventtreutilisssilestdmontrquilsconduisentauxmmesrsultats.ISO14718:1998(F) ISO 2 4 Ractifse

15、tmatriaux Saufindicationcontraire,utiliseruniquementdesractifsdequalitanalytiquereconnue. 4.1 Eau,dminraliseoudsionise,dunersistivitdaumoins10M W cm,oudeleaudepuretaumoins quivalente. 4.2 Acidesulfuriqueconcentr , c(H 2 SO 4 )=18mol/l, r (H 2 SO 4 ) =1,84g/ml. 4.3 Acidesulfurique , c(H 2 SO 4 )=2mol

16、/l. Ajouteravecprcaution105mldacidesulfuriqueconcentr(4.2)895mldeau,puismlangersoigneusement. viterdechaufferlasolutiondefaonexcessive. 4.4chantillontmoin. Prparerunchantillontmoindenviron2 kgdalimentscomposs,prsentantuneteneurenaflatoxine B 1 denviron5g/kg,encombinantdeschantillonsayantsubiundosage

17、pralableetprsentantuneteneuren aflatoxineB 1 denviron5g/kg.Mlangersoigneusement. IlestsouhaitablequelateneurenaflatoxineB 1 delchantillontmoinsoitdterminecinqfoispardeuxanalystes, ensuivantlemodeopratoiredcritlarticle8.Ilconvientensuite,partirdesrsultats,decalculerlateneur moyenneenaflatoxineB 1 ,lc

18、arttypeetlecoefficientdevariation. 4.5Celite 2) 545,lavlacide ,ouproduitdequalitquivalente. 4.6CartouchedetypeFlorisil SepPakn51960,deWaters 3) ,ouproduitdequalitquivalente. 4.7CartouchedetypeC 18 SepPakn51910,deWaters 3) ,ouproduitdequalitquivalente. 4.8Actone. 4.9 Mthanol. 4.10Actonitrile. 4.11 Ch

19、loroforme,stabilisavecdelthanol(fractionmassiquede0,5%1,0%). AVERTISSEMENTLechloroformeestunesubstancetoxique.viterlinhalationdechloroformeet lexpositionauchloroforme.Travaillersoushotteventilelorsdelamanipulationdusolvantoudeses solutions. LescaractristiquesdadsorptiondelacartouchedeFlorisil (4.6)p

20、euventvariersidesstabilisantsautresque lthanolsontutiliss.Lorsquelechloroformedcritnestpasdisponible,ilconvientdevrifiersesproprits conformmentlarticle8. 2) Celite estlappellationcommercialedunproduitdisponiblesurlemarch. 3) Florisil lappellationcommercialedunproduitdisponiblesurlemarch.LacartoucheF

21、lorisil SepPak,numrode rfrence51960etlacartoucheC 18 SepPak,numroderfrence51910,deWatersAssociates(Milwaukee,USA)sontdes exemplesdeproduitsapproprisdisponiblessurlemarch CetteinformationestdonnelintentiondesutilisateursdelaprsenteNormeinternationaleetnesignifienullementquel ISO approuveourecommandel

22、emploiexclusifdesproduitsainsidsigns.Desproduitsquivalentspeuventtreutilisssilest dmontrquilsconduisentauxmmesrsultats.ISO ISO14718:1998(F) 3 4.12Mlangedactoneetdeau ,98+2(parvolume). Combiner980mldactone(4.8)et20mldeau(4.1).Mlangersoigneusement. 4.13Mlangedactoneetdeau ,15+85(parvolume). Combiner15

23、0mldactone(4.8)et850mldeau(4.1).Mlangersoigneusement. 4.14Mlangedactoneetdeau ,5+95(parvolume). Combiner50mldactone(4.8)et950mldeau(4.1).Mlangersoigneusement. 4.15Mlangedemthanoletdeau ,20+80(parvolume). Combiner200mldemthanol(4.9)et800mldeau(4.1).Mlangersoigneusement. 4.16 Acidenitriqueconcentr, c(

24、HNO 3 )=14mol/l, r (HNO 3 )=1,40g/ml,pourCLHPavecformationdedrivs debrome. 4.17 Bromuredepotassium (KBr),pourCLHPavecformationdedrivsdebrome. 4.18PhasemobilepourCLHP. 4.18.1PhasemobilepourCLHPavecformationdedrivsdiode. Mlanger120mldactonitrile(4.10),210mldemthanol(4.9)et390mldeau(4.1),puishomogniser

25、.Filtrer lluantsurunfiltremembranedePTFEde0,45menutilisantle systmedefiltrationdesolvant(5.1),puis dgazerpendant10mindanslebainultrasons(5.2)avantutilisation. NOTE Lacompositiondusolvantdelaphasemobilepeutncessiterunajustementenfonctiondescaractristiquesdela colonnepourCLHPutilise. 4.18.2Phasemobile

26、pourCLHPavecformationdedrivsdebrome. Mlanger400mldactonitrile(4.10),700mldemthanol(4.9)et1300mldeau(4.1),puishomogniser.Ajouter cemlange286mgdebromuredepotassium(4.17)et152ldacidenitrique(4.16).Mlangersoigneusementet dgazersousuncourantdegazinertependant15min. 4.19SolutionaqueusesatureeniodepourCLHP

27、avecformationdedrivsdiode. Ajouter2gdiode400mldeau.Mlangerpendantaumoins90min,puisfiltrersurunfiltremembranedePTFE de0,45m(voir5.1).Prparerunesolutionfrachelejourdesonutilisation. Protgerlasolutionsaturedelalumireafindempchertoutedcompositionphotochimique. 4.20 Solutiondhypochloritedesodium (qualitd

28、omestique), r (chloreactif)=100g/l. 4.21Solutiondhypochloritedesodium ,1%defractionvolumique. Diluer10mldesolutiondhypochloritedesodium(4.20)avec990mldemlangeactoneeau(4.14). 4.22 Gazinerte ,parexempleazote. 4.23 AflatoxineB 1 talon (C 17 H 12 O 6 ),2,3,6aa ,9aa ttrahydro4mthoxycyclopenta cfuro3,2:4

29、,5furo2,3h1 benzopyran1,11dione;numro1162658duRegistreduChemicalAbstractsService(CAS).ISO14718:1998(F) ISO 4 AVERTISSEMENTS 1 Lesmycotoxinessontdessubstancesextrmementtoxiques.Ilconvientdeffectuertoutesles manipulationsdansunehottefermeconueceteffet.Ilestrecommanddeprendredesprcautions particuliresl

30、orsquelestoxinessontsousformesche,enraisondeleurnaturelectrostatiquequifait quellesonttendancesedisperserdansleszonesdetravail. 2tantdonnlasensibilitdesaflatoxinesauxultraviolets,ralisertouslesessaislabridelalumire dujouroudetoutelumireblancheartificielle.Utiliserunclairementsuffisant,maisnonexcessi

31、f,avec deslampesfilamentdetungstne.Deslampesbassenergieoudestubesfluorescentspeuventtre utiliss,maislutilisationdeverrerieambre(fioles,fiolesjauges)estrecommande. 3LaverrerieayanttencontactavecdessolutionsdaflatoxineB 1 doittreplongependanttouteune nuitdansunesolutiondhypochlorite(4.21),avantdtrenet

32、toye,afindesupprimertoutetrace daflatoxineB 1 . 4.24SolutiontalondaflatoxineB 1 , r (aflatoxineB 1 ) 10g/ml. TransfrerlecontenuduneampouledaflatoxineB 1 (4.23)dansunefioleetdissoudrelaidedechloroforme (4.11).Transvasercettesolutiondansunefiolejaugedunvolumepermettantdobtenirunesolutionuneteneur enaf

33、latoxineB 1 denviron10g/ml.Diluerautraitavecduchloroforme(4.11).Mlanger. Transfrerdansdesfiolesambresoudansunrcipientbouchonvisstanchelair.Conserverbienfermet enrouldansunefeuilledaluminiumetdansunendroitfrais(4C)etdanslobscurit. 4.25SolutionmretalondaflatoxineB 1 . Transfrerquantitativement2,5mldel

34、asolutiontalondaflatoxineB 1 (4.24)dansunefiolejaugede50ml,puis diluerautraitavecduchloroforme(4.11). Transfrercettesolutiondansdesfiolesambresoudansunrcipientbouchonvisstanchelair.Conserver bienfermetenrouldansunefeuilledaluminiumetdansunendroitfrais(4C)etdanslobscurit. 4.26Solutionsdtalonnagedafla

35、toxineB 1 pourCLHP. 4.26.1 Solutiondtalonnage I , r (aflatoxineB 1 ) 4ng/ml. Laisserlafiolejauge,contenantlasolutionmretalon(4.25)etplacedansunefeuilledaluminium,atteindrela tempratureambiante(quelquesheures). Transfrer400ldesolutionmretalon(quivalent200ngdaflatoxineB 1 )dansunefiolejaugede50mllave

36、lacide,etvaporerlasolutionjusqusiccitsousuncourantdegazinerte(4.22).Dissoudrelersidudans20ml demlangeactoneeau(4.13).Diluerautraitavecdumlangeactoneeauetmlangersoigneusement. 4.26.2Solutiondtalonnage II , r (aflatoxineB 1 ) 3ng/ml. Transfrerquantitativement7,5mldelasolutiondtalonnage I (4.26.1)dansu

37、nefiolejaugede10mllave lacide,complterautraitavecdumlangeactoneeau(4.13)etmlangersoigneusement. 4.26.3Solutiondtalonnagederfrence , r (aflatoxineB 1 ) 2ng/ml. Transfrerquantitativement25mldelasolutiondtalonnage I (4.26.1)dansunefiolejaugede50mllave lacide.Diluerautraitavecdumlangeactoneeau(4.13)etml

38、angersoigneusement. CettesolutionestutilisepourtouteslesinjectionsprvueslorsdelanalyseCLHP(8.5).ISO ISO14718:1998(F) 5 4.26.4Solutiondtalonnage III , r (aflatoxineB 1 ) 1ng/ml. Transfrerquantitativement2,5mldelasolutiondtalonnage I (4.26.1)dansunefiolejaugede10mllave lacide.Diluerautraitavecdumlange

39、actoneeau(4.13)etmlangersoigneusement. 4.27Solutiondessaipourchromatographie. PrpareruneampoulecontenantunmlangedaflatoxinesB 1 ,B 2 ,G 1 etG 2 dans1mldechloroforme,des concentrationsrespectivesdenviron1,0g/ml,0,5g/ml,1,0g/mlet0,5g/ml. Transvaserlecontenudelampouledansuntubeessaibouchlmerioudansunef

40、iolebouchonvis. Transvaser40ldecettesolutiondansuntubeessailavlacide(5.4)etbouchlmeri.vaporerle chloroformesousuncourantdegazinerte(4.22)etdissoudredans10mldemlangeactoneeau(4.13). 5Appareillage Avantsonutilisation,laverreriedelaboratoireentrantencontactavecdessolutionsaqueusesdaflatoxinesdoit treplongependantplusieursheuresdansdelacidesulfurique(4.3),puisrincesoigneusement(parexemple troisfois)l