DIN 58909-1-2000 Haemostaseology - Determination of factor VIII coagulant activity (F VIII C) - Part 1 Reference measurement procedure for the one-stage method《止血学 测定凝血因子Ⅷ凝血活性系数(FⅧ.pdf

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1、h DIN Deutsches Institut fr Normung e.V. Jede Art der Vervielfltigung, auch auszugsweise,nur mit Genehmigung des DIN Deutsches Institut fr Normung e.V., Berlin, gestattet.Alleinverkauf der Normen durch Beuth Verlag GmbH, 10772 Berlinh No part of this standard may be reproduced without the prior perm

2、ission of DIN Deutsches Institut fr Normung e.V., Berlin.Beuth Verlag GmbH, Berlin, has the exclusive right of sale for German Standards (DIN-Normen).Ref. Nr. DIN 58909-1 : 2000-03Preisgr. 07 Vertr.-Nr. 0007Mrz 2000DEUTSCHE NORMHmostaseologieBestimmung derFaktor VIII-Gerinnungsaktivitt (F VIII C)Tei

3、l 1: Referenzmeverfahren fr die Einstufenmethode58909-1Normenausschu Medizin (NAMed) im DIN Deutsches Institut fr Normung e.V.Ersatz fr Ausgabe 1994-06Supersedes June 1994 editionICS 11.100Haemostaseology Determination of factor VIII coagulant activity (F VIII C) Part 1: Reference measurement proced

4、ure for the one-stage methodHmostasiologie Dosage de lactivit coagulante du facteur VIII (F VIII C) Partie 1: Mode opratoire de mesure de rfrence pour la mthode en un tempsVorwortDiese Norm wurde vom Arbeitsausschu C 5 Hmosta-seologie“ des Normenausschusses Medizin (NAMed) imDIN Deutsches Institut f

5、r Normung e. V. in Zusammenar-beit mit der Gesellschaft fr Thrombose- und Hmostase-forschung e. V. erarbeitet.DIN 58909 Bestimmung der Faktor VIII-Gerinnungsakti-vitt (F VIII C)“ besteht aus: Teil 1: Referenzmeverfahren fr die Einstufenme-thode Teil 2: Referenzmeverfahren mit einem syntheti-schen Pe

6、ptidsubstratnderungenGegenber der Ausgabe Juni 1994 wurden folgendenderungen vorgenommen: Die Aufbewahrungszeit des Blutes wurde nachDIN 58905-1 festgelegt. Die Norm wurde redaktionell berarbeitet.Frhere AusgabenDIN 58909-1: 1987-02, 1991-02, 1994-06Fortsetzung Seite 2 bis 6In case of doubt, the Ger

7、man-language version should beconsulted as the authoritative text.ForewordThis standard has been prepared by the Technical Com-mittee C 5 “Hmostaseologie” of the NormenausschuMedizin (Medicine Standards Committee) of DIN Deut-sches Institut fr Normung e. V. in cooperation with theGesellschaft fr Thr

8、ombose- und Hmostaseforschung e.V.DIN 58909 “Determination of factor VIII coagulant activity(F VIII C)” consists of: Part 1: Reference measurement procedure for theone-stage method Part 2: Reference measurement procedure using asynthetic peptide substrateAmendmentsThe following amendments have been

9、made to theJune 1994 edition: Storage time of blood as specified in DIN 58905-1. The standard has been editorially revised.Previous editionsDIN 58909-1: 1987-02, 1991-02, 1994-06Continued on pages 2 to 6Seite 2DIN 58909-1 : 2000-031 AnwendungsbereichDiese Norm gilt fr die Bestimmung der Faktor VIII-

10、Ge-rinnungsaktivitt mit der Einstufenmethode in Plasma undFaktorenkonzentraten.Zweck dieser Norm ist die Ermittlung vergleichbarerErgebnisse des Faktor VIII-Gehaltes in einem vorgege-benen Untersuchungsmaterial. Dabei ist ein einheitlichesVorgehen bei der Kalibrierung der Methode sowie die Ver-wendu

11、ng von Referenzplasmen bzw. -konzentraten mitdeklariertem Faktor VIII C-Anteil, der durch Kalibrierungam jeweils gltigen Internationalen Standard der WHO frFaktor VIII C ermittelt wurde, unerlliche Vorausset-zung.2 Normative VerweisungenDiese Norm enthlt durch datierte oder undatierte Verwei-sungen

12、Festlegungen aus anderen Publikationen. Diesenormativen Verweisungen sind an den jeweiligen Stellenim Text zitiert, und die Publikationen sind nachstehendaufgefhrt. Bei datierten Verweisungen gehren spterenderungen oder berarbeitungen dieser PublikationennurzudieserNorm,fallssiedurchnderungoderberar

13、-beitung eingearbeitet sind. Bei undatierten Verweisungengilt die letzte Ausgabe der in Bezug genommenen Publi-kation.DIN 12650-2Mechanische, physikalische und elektrische Laborge-rte Volumenmegerte mit Hubkolben Kolben-hubpipettenDIN 58905-1Hmostaseologie Blutentnahme Teil 1: Gewin-nung von vensem

14、Citratplasma fr hmostaseologi-sche AnalysenDIN 58908Hmostaseologie Bestimmung der aktivierten parti-ellen Thromboplastinzeit (APTT) Referenzmever-fahrenDIN 58911-1Hmostaseologie Kalibrierung von Meverfahren Teil 1: Gerinnungszeit-MeverfahrenDIN 58939-1Hmostaseologie Referenzplasma Teil 1: Anfor-deru

15、ngen, HerstellungDIN 58970-2Laborzentrifugen Zentrifugenrhrchen fr RZB bis40003BegrifeFr die Anwendung dieser Norm gelten die folgendenBegriffe:3.1 Faktor VIII CFaktor VIII-Gerinnungsaktivitt3.2 Faktor VIII C-EinstufenmethodeEine Modifikation der Methode zur Bestimmung deraktivierten partiellen Thro

16、mboplastinzeit, deren Fak-tor VIII C-Spezifitt durch Zugabe eines Faktor VIII C-Mangelplasmas zum Reaktionsansatz erreicht wird.1ScopeThis standard is applicable to the determination offactor VIII coagulant activity in plasma and factor con-centrates by using the one-stage method.The purpose of this

17、 standard is to achieve comparableresults for the factor VIII contentinagivenspecimen.Essential preconditions for achieving this objective are astandardized procedure for calibration of the method, aswell as the use of reference plasmas or reference concen-trates with a declared factor VIII C propor

18、tion which hasbeen determined by calibration against the InternationalStandard of WHO for factor VIII C which is valid at thetime of use.2 Normative referencesThis standard incorporates by dated or undated referenceprovisions from other publications. These normative refer-ences are cited at the appr

19、opriate places in the text andthe publications are listed hereafter. For dated references,subsequent amendments to or revisions of any of thesepublications apply to this standard only when incor-porated in it by amendment or revision. For undated refer-ences the latest edition of the publication ref

20、erred toapplies.DIN 12650-2Mechanical, physical and electrical laboratory appara-tus Piston-operated volumetric apparatus PistonpipettesDIN 58905-1Haemostaseology Blood collection Part 1: Prep-aration of plasma from citrated venous blood for coag-ulation testingDIN 58908Haemostaseology Determination

21、 of activated par-tial thromboplastin time (APTT) Reference meas-urement procedureDIN 58911-1Haemostaseology Calibration of measurement pro-cedures Part 1: Clotting time measurement proce-duresDIN 58939-1Haemostaseology Reference plasma Part 1:Requirements, preparationDIN 58970-2Laboratory centrifug

22、es Centrifuge tubes for relativecentrifugal acceleration up to 40003 Terms and definitionsFor the purposes of this standard, the following terms anddefinitions apply:3.1 Factor VIII CFactor VIII coagulant activity3.2 Factor VIII C one-stage methodA modification of the method for the determination of

23、the activated partial thromboplastin time, the specificityfor factor VIII C of which is achieved by adding afactor VIII C-deficient plasma to the reaction mixture.Seite 3DIN 58909-1 : 2000-033.3 Aktivierte partielle Thromboplastinzeit(APTT)Die In-vitro-Gerinnungszeit von Plasma aus vensemCitratblut

24、nach Zusatz eines partiellen Thromboplastins(als Plttchenfaktor 3-Ersatz), von Calciumionen undeiner Aktivatorsubstanz.ANMERKUNG: Die aktivierte partielle Thromboplastinzeitwird in Sekunden angegeben.3.4 Faktor VIII C-MangelplasmaDas Plasma aus vensem Citratblut eines Patienten mitschwerer Hmophilie

25、 A ohne Hemmkrper (isolierter Fak-tor VIII C-Mangel, Restaktivitt I 1%), das die brigenFaktoren des endogenen Systems der Blutgerinnung ineiner ausreichenden Menge enthlt, so da die gemes-sene Gerinnungszeit in der Faktor VIII C-Einstufenme-thode ausschlielich vom Faktor VIII CderProbeabhngt.ANMERKU

26、NG: Andere Faktor VIII C-Mangelplasmen, diediesen Kriterien entsprechen, knnen ebenfalls ver-wendet werden.3.5 Partielle ThromboplastinePhospholipidgemische, die in der partiellen Thrombopla-stinzeit den Plttchenfaktor 3 ersetzen und die Gerin-nungszeit von menschlichem und tierischem Plasma inGegen

27、wart einer definierten Calciumionenkonzentrationdeutlich verkrzen.3.6 AktivatorsubstanzenAnorganische (z. B. Silikate) oder organische Substanzen(z. B. Ellagsure), die eine Kontaktoberflche bieten fr diebeschleunigte Aktivierung des endogenen Systems derGerinnung im Plasma.3.7 Faktor VIII C-Normalak

28、tivittFaktor VIII C in einem frischen gepoolten Normalplasmanach DIN 58911-1.ANMERKUNG: Die Faktor VIII C-Normalaktivitt betrgtdefinitionsgem 100% oder 1 Internationale Einheitje ml Plasma 1, 2.3.8 Faktor VIII C-ReferenzplasmaGepooltes Normalplasma, z. B. nach DIN 58939-1, das bei709C tiefgefroren b

29、zw. lyophilisiert gelagert und dessenFaktor VIII C am jeweils gltigen Internationalen Stan-dard der WHO fr Faktor VIII Ckalibriertwird.ANMERKUNG: Faktor VIII C-Referenzplasma dient zurKalibrierung und kann auch zur Erstellung einerBezugskurve verwendet werden.3.9 Faktor VIII C-ReferenzkonzentratEin

30、lyophilisiertes Faktor VIII-Konzentrat, dessenFaktor VIII C an dem jeweils gltigen InternationalenKonzentratstandard der WHO fr Faktor VIII C kalibriertwird.ANMERKUNG: Faktor VIII C-Referenzkonzentrat dientzur Kalibrierung und kann auch zur Erstellung einerBezugskurve verwendet werden.3.10 Faktor VI

31、II C-KalibrierplasmaEin frisches, tiefgefrorenes oder lyophilisiertes gepooltesPlasma von mindestens zehn gesunden Spendern, dasan einem Faktor VIII C-Referenzplasma kalibriert wird.3.3 Activated partial thromboplastin time(APTT)The in vitro clotting time of plasma from citrated venousblood after ad

32、ding partial thromboplastin (as platelet fac-tor 3 substitute), calcium ions and an activating agent.NOTE: The activated partial thromboplastin time is givenin seconds.3.4 Factor VIII C-deficient plasmaThe plasma from citrated venous blood of a patient withsevere haemophilia A without inhibitors (is

33、olatedfactor VIII C deficiency, residual activity I 1%) whichcontains the other factors of the endogenous system ofblood coagulation in a sufficient quantity so that themeasured clotting time in the factor VIII Cone-stagemethod depends exclusively on the factor VIII Cofthesample.NOTE: Other factor V

34、III C-deficient plasmas which meetthese criteria may also be used.3.5 Partial thromboplastinsMixtures of phospholipids which replace the plateletfactor 3 in the partial thromboplastin time and clearlyreduce the clotting time of human and animal plasma inthe presence of a defined concentration of cal

35、cium ions.3.6 Activating agentsInorganic (e.g. silicates) or organic substances (e.g. ella-gicacid)whichprovideacontactsurfacefortheacceler-ated activation of the endogenous coagulation system inplasma.3.7 Factor VIII C normal activityFactor VIII C in a fresh pooled normal plasma as speci-fied in DI

36、N 58911-1.NOTE: Factor VIII C normal activity is defined as 100% or1 International Unit per ml of plasma 1, 2.3.8 Factor VIII C reference plasmaPooled normal plasma, e.g. as specified in DIN 58939-1,which is stored deep-frozen at 709C or lyophilized andthe factor VIII C thereof is calibrated against

37、 the Interna-tional Standard of WHO for factor VIII C which is valid atthe time of use.NOTE: Factor VIII C reference plasma serves for calibra-tion and can also be used for establishing a referencecurve.3.9 Factor VIII C reference concentrateA lyophilized factor VIII concentrate, the factor VIII Cof

38、which is calibrated against the International ConcentrateStandard of WHO for factor VIII Cwhichisvalidatthetime of use.NOTE: Factor VIII C reference concentrate serves forcalibration and can also be used for establishing areference curve.3.10 Factor VIII C calibration plasmaA fresh, deep-frozen, or

39、lyophilized pooled plasma ob-tained from at least ten healthy donors which is calibratedagainst a factor VIII Creferenceplasma.Seite 4DIN 58909-1 : 2000-03ANMERKUNG 1: Das Faktor VIII C-Kalibrierplasma dientzur Erstellung der Bezugskurve nach DIN 58911-1.ANMERKUNG 2: Verdnnungen zur Mehrpunktkalibri

40、e-rung sind zulssig, soweit diese den Kalibrierbezie-hungen eines adquat verdnnten Faktor VIII C-Refe-renznormalplasmas entsprechen (siehe DIN 58911-1).4 BezeichnungBezeichnung der Einstufenmethode zur Bestimmung desFaktors VIII C:Einstufenmethode DIN 58909 F8 C5 Entnahme und Aufbereitung des Blutes

41、Die Entnahme und Aufbereitung des Blutes erfolgen nachDIN 58905-1.DiePlasmaprobedarfbiszu2hnachderBlutentnahmebei einer Temperatur im Bereich von 189Cbis229Cauf-bewahrt werden. Sofern die Bestimmung innerhalb dieserZeitspanne nicht mglich ist, darf die Plasmaprobe nachDIN 58905-1 eingefroren werden.

42、6 Rekonstitution lyophilisierter Proben6.1 Lyophilisierte Proben werden nach Angaben desHerstellers unter Vermeidung von Schaumbildung voll-stndig rekonstituiert.6.2 Fr die Bestimmung des Faktors VIII CinKonzen-traten ist bei der Rekonstitution auf ein genau definiertesVolumen zu achten.6.3 Nach vol

43、lstndiger Lsung wird die Probe vor derBestimmung etwa 30 min bei Raumtemperatur belassen,um die maximale Faktor VIII-Gerinnungsaktivitt zu errei-chen.7 Durchfhrung7.1 Vorbereitung der Proben und Reagenzien7.1.1 PlasmaprobeDie Plasmaprobe ist unmittelbar vor der Bestimmung imVerhltnis von 1 Volumente

44、il Probe zu 4 VolumenteilenPuffer vorzuverdnnen.ANMERKUNG: Als Puffersysteme knnen benutzt wer-den:a) Imidazol-PufferLsung mit c(Imidazol) = 0,05 mol/l und c(NaCl)=0,1 mol/l, eingestellt mit HCl auf pH = 7,4oderb) Diethylbarbituratacetat-Puffer5,88 g Natriumdiethylbarbiturat (M =206,18g/mol)und 3,88

45、 g Natriumacetat 3H2O(M =136,01 g/mol)in950ml destilliertem Wasserlsen, mit HCl auf pH = 7,6 einstellen und mitdestilliertem Wasser auf 1 000 ml auffllen.7.1.2 KonzentratprobeKonzentratproben mit einer spezifischen Aktivitt 1I.E. FaktorVIII C/mg Protein werden zunchst mitPuffernach7.1.1soweitverdnnt

46、,daeineKonzentrationvon etwa 1 I.E./ml erwartet werden kann.NOTE 1: The factor VIII C calibration plasma is used forestablishing the reference curve as specified inDIN 58911-1.NOTE 2: Dilutions for multi-point calibration are permittedas long as they match the calibration ratio of an ade-quately dil

47、uted factor VIII C normal reference plasma(see DIN 58911-1).4DesignationDesignation of the one-stage method for the determina-tion of factor VIII C:One-stage method DIN 58909 F8 C5 Collection and processing of bloodThe collection and processing of blood shall be carriedout as described in DIN 58905-

48、1.Theplasmasamplemaybestoredupto2hafterbloodcolectionatatemperatureintherangefrom189Cto229C. Unless the determination can be performed withinthis period of time, the plasma sample may be frozen asdescribed in DIN 58905-1.6 Reconstitution of lyophilized samples6.1 Lyophilized samples are completely r

49、econstitutedin accordance with the manufacturers instructions whileavoiding foam formation.6.2 ForthedeterminationoffactorVIII Cinconcen-trates, attention shall be paid to the use of an exactly de-fined volume during reconstitution.6.3 After complete dissolution, the sample is left atroom temperature for about 30 min before the assay isperformed in order to allow the maximum factor VIIIcoagulant a