DIN 58908-2015 Haemostaseology - Determination of activated partial thromboplastin time (APTT) - Reference measurement procedure Text in German and English《止血学 激活部分促T凝血酶原激酶时间的测定(AP.pdf

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1、September 2015DEUTSCHE NORM DIN-Normenausschuss Medizin (NAMed)Preisgruppe 7DIN Deutsches Institut fr Normung e. V. Jede Art der Vervielfltigung, auch auszugsweise, nur mit Genehmigung des DIN Deutsches Institut fr Normung e. V., Berlin, gestattet.ICS 11.100.30!%Cvn“2328375www.din.deDDIN 58908Hmosta

2、seologie Bestimmung der aktivierten partiellen Thromboplastinzeit (APTT) Referenzmethode;Text Deutsch und EnglischHaemostaseology Determination of activated partial thromboplastin time (APTT) Reference measurement procedure;Text in German and EnglishHmostase Dtermination du temps de cphaline + activ

3、ateur (TCA) Mode opratoire de mesure de rfrence;Texte en allemand et anglaisAlleinverkauf der Normen durch Beuth Verlag GmbH, 10772 BerlinErsatz frDIN 58908:2000-03www.beuth.deGesamtumfang 16 SeitenDIN 58908:2015-09 2 Inhalt Seite Vorwort 3 1 Anwendungsbereich .4 2 Normative Verweisungen 4 3 Begriff

4、e .5 4 Bezeichnung .5 5 Probenahme .5 6 Durchfhrung .6 6.1 Reaktionsansatz.6 6.2 Durchfhrung der Bestimmung .6 7 Auswertung 7 7.1 APTT-Referenzbereich .7 7.2 Ergebnismitteilung 7 Literaturhinweise 8 DIN 58908:2015-09 3 Vorwort Diese Norm wurde vom Arbeitsausschuss NA 063-03-05 AA Hmostaseologie“ des

5、 DIN-Normenausschusses Medizin (NAMed) in Zusammenarbeit mit der Gesellschaft fr Thrombose- und Hmostaseforschung e. V. erarbeitet. Es wird auf die Mglichkeit hingewiesen, dass einige Elemente dieses Dokuments Patentrechte berhren knnen. DIN ist nicht dafr verantwortlich, einige oder alle diesbezgli

6、chen Patentrechte zu identifizieren. nderungen Gegenber DIN 58908:2000-03 wurden folgende nderungen vorgenommen: a) der Anwendungsbereich wurde aktualisiert; b) die Terminologie sowie die mathematischen Gleichungen wurden aktualisiert; c) die Norm wurde redaktionell berarbeitet. Frhere Ausgaben DIN

7、58008: 1989-10, 1994-06, 2000-03 DIN 58908:2015-09 4 1 Anwendungsbereich Diese Norm gilt fr die Bestimmung der aktivierten partiellen Thromboplastinzeit (APTT) in aus Venenblut gewonnenem Citratplasma. Die aktivierte partielle Thromboplastinzeit wird angewendet: a) als Globaltest fr den endogenen Ge

8、rinnungsablauf (Faktoren VIII, IX, XI, XII, Prkallikrein, HMW-Kininogen); sie erfasst auch Fibrinogen sowie die Faktoren II, V und X; b) zur berwachung einer pharmakotherapeutischen Beeinflussung der Blutgerinnung, z. B. bei der Behandlung mit unfraktioniertem Heparin oder Argatroban; c) zum Nachwei

9、s erworbener Inhibitoren der Faktoren des endogenen Gerinnungssystems. vor allem Faktor VIII-Inhibitoren infolge Hmophiliebehandlung und sogenannter Lupus-Antikoagulanzien. Die APTT darf nicht zur berwachung einer pharmakotherapeutischen Beeinflussung der Blutgerinnung durch einige direkte Thrombin-

10、 oder Faktor Xa-Inhibitoren angewendet werden (z. B. Dabigatran, Rivaroxaban, Apixaban, Edoxaban). Bei der Ermittlung der aktivierten partiellen Thromboplastinzeit mit dem in dieser Norm beschriebenen Verfahren sind die Ergebnisse nur dann vergleichbar, wenn qualitativ gleiche partielle Thromboplast

11、ine und Aktivatorsubstanzen verwendet werden. ANMERKUNG Unter qualitativ gleich“ ist gleiche Empfindlichkeit gegenber gerinnungsfrdernden und gerinnungshemmenden Faktoren zu verstehen. 2 Normative Verweisungen Die folgenden Dokumente, die in diesem Dokument teilweise oder als Ganzes zitiert werden,

12、sind fr die Anwendung dieses Dokuments erforderlich. Bei datierten Verweisungen gilt nur die in Bezug genommene Ausgabe. Bei undatierten Verweisungen gilt die letzte Ausgabe des in Bezug genommenen Dokuments (einschlielich aller nderungen). DIN 58905-1, Hmostaseologie Blutentnahme Teil 1: Gewinnung

13、von vensem Citratplasma fr hmostaseologische Analysen DIN 58911-1, Hmostaseologie Kalibrierung von Meverfahren Teil 1: Gerinnungszeit-Meverfahren DIN 58970-2, Laborzentrifugen Zentrifugenrhrchen fr RZB bis 4000 DIN EN ISO 8655-2, Volumenmessgerte mit Hubkolben Teil 2: Kolbenhubpipetten DIN 58908:201

14、5-09 5 3 Begriffe Fr die Anwendung dieses Dokuments gelten die folgenden Begriffe: 3.1 aktivierte partielle Thromboplastinzeit APTT ln-vitro-Gerinnungszeit von Plasma aus vensem Citratblut nach Zusatz eines partiellen Thromboplastins (als Phospholipidquelle), von Calciumionen und einer Aktivatorsubs

15、tanz Anmerkung 1 zum Begriff: Die aktivierte partielle Thromboplastinzeit wird in Sekunden angegeben. 3.2 partielles Thromboplastin Phospholipidgemisch verschiedener Quellen, z. B. synthetische oder biologische Extrakte (aus tierischem Gehirn, Sojabohnen), welches in der partiellen Thromboplastinzei

16、t die Plttchenquelle imitiert und die Gerinnungszeit von menschlichem und tierischem Plasma in Gegenwart einer definierten Calciumionenkonzentration verkrzt 3.3 Aktivatorsubstanz anorganische (z. B. Silikate, Kaolin) oder organische Substanz (z. B. Ellagsure), die eine Kontaktoberflche fr die beschl

17、eunigte Aktivierung des endogenen Systems der Gerinnung im Plasma bietet 3.4 Referenzplasma gepooltes Normalplasma, das bei Verwendung der gleichen Reagenzien, Methoden und Arbeitstechnik an verschiedenen Orten die gleiche Gerinnungsfhigkeit aufweist und an zentraler Stelle bei -70 C tiefgefroren od

18、er lyophilisiert gelagert wird QUELLE: DIN 58939-1:2000, 3.1 4 Bezeichnung Bezeichnung der Bestimmung der aktivierten partiellen Thromboplastinzeit (APTT) nach dieser Norm: Bestimmung DIN 58908 2015 APTT 5 Probenahme Die Entnahme und Aufbereitung des Blutes erfolgen nach DIN 58905-1. Die Plasmaprobe

19、 darf bis zu 4 h nach der Blutentnahme bei einer Temperatur im Bereich von 18 C bis 22 C aufbewahrt werden. Dies gilt nicht fr heparinhaltige Proben, die direkt nach der Blutentnahme geprft werden mssen. Sofern die Bestimmung innerhalb dieser Zeitspanne nicht mglich ist, darf die Plasmaprobe nach DI

20、N 58905-1 eingefroren werden. Wenn eine heparinhaltige Plasmaprobe gefroren gelagert werden sollte, muss der Plasmaberstand in ein neues Probenrhrchen (en: vial) berfhrt und bis zur wesentlichen Freiheit von Plttchen (d. h. 10 000 Plttchen/l) zentrifugiert werden. Anschlieend ist der Plasmaberstand

21、in einem separaten Polypropylenrhrchen einzufrieren. DIN 58908:2015-09 6 6 Durchfhrung 6.1 Reaktionsansatz 0,1 ml Plasmaprobe; 0,1 ml partielles Thromboplastin mit Aktivatorsubstanz bei (37,0 0,5) C inkubieren (die Inkubationszeit richtet sich nach den verwendeten APTT-Reagenzien); 0,1 ml CaCl2-Lsun

22、g mit c(CaCl2) = 0,02 mol/l oder mit c(CaCl2) = 0,025 mol/l1), vorgewrmt auf (37,0 0,5) C. Sofern das partielle Thromboplastin mit Aktivatorsubstanz eine Partikelsuspension ist, muss es im Vorratsbehlter vor der Zugabe zum Reaktionsansatz gut gemischt werden. 6.2 Durchfhrung der Bestimmung Fr die Du

23、rchfhrung der Bestimmung der aktivierten partiellen Thromboplastinzeit wird die manuelle Hkchen-methode wegen der einfachen Handhabung und guten Reproduzierbarkeit ausgewhlt. Andere Messprinzipien, die vergleichbare Ergebnisse liefern, drfen auch verwendet werden. Zur Bestimmung werden in einem Wass

24、erbad bei (37,0 0,5) C unsilikonisierte Zentrifugenrhrchen aus Glas, z. B. Rhrchen DIN 58970 14 100 G1, mindestens 5 min vorgewrmt. In eines dieser Zentrifugenrhrchen werden nacheinander mit einer Kolbenhubpipette nach DIN EN ISO 8655-2 0,1 ml unverdnnte Plasmaprobe und 0,1 ml partielles Thromboplas

25、tin mit Aktivatorsubstanz, das nach den Angaben des Herstellers aufbewahrt wird, pipettiert, durch leichtes Schtteln gemischt und eine definierte Zeitspanne im Wasserbad bei (37,0 0,5) C inkubiert. Danach werden dem Reaktionsgemisch 0,1 ml Calciumchloridlsung mit einer Kolbenhubpipette zugegeben und

26、 der Ansatz unter Vermeidung von Schaumbildung sorgfltig gemischt. Gleichzeitig mit der Zugabe der Calciumchloridlsung ist eine Stoppuhr in Gang zu setzen. Das Rektionsgemisch wird etwa 20 s ruhig stehengelassen und dann ein Hkchen aus Platin in Abstnden von 0,5 s durch das Reaktionsgemisch gefhrt.

27、Das Hkchen aus Platin darf vor der Bestimmung nicht ausgeglht werden. Beim Auftreten eines ersten, am Hkchen erkennbaren Gerinnsels muss die Uhr gestoppt und die angezeigte Gerinnungszeit registriert werden. Eine zweite Bestimmung muss in gleicher Weise durchgefhrt werden. Falls beide Thromboplastin

28、zeiten mehr als 10 % vom Mittelwert abweichen, ist eine erneute Doppelbestimmung erforderlich. Der Mittelwert der Doppelbestimmung ist die APTT der Citratplasmaprobe. 1)Nach Angaben des Herstellers. DIN 58908:2015-09 7 7 Auswertung 7.1 APTT-Referenzbereich Der APTT-Referenzbereich eines APTT-Reagenz

29、es ergibt sich aus der APTT dieses Reagenzes von mindestens 100 Plasmen gesunder Personen. Er lsst sich durch die 2,5 Perzentile und die 97,5 Perzentile der Messwerte beschreiben, siehe 1 und 2. ANMERKUNG Der Referenzbereich eines APTT-Reagenzes kann chargenabhngig sein. 7.2 Ergebnismitteilung Das E

30、rgebnis der aktivierten partiellen Thromboplastinzeit (APTT) wird in Sekunden angegeben. Ergebnisse knnen auch als APTT-Quotient, bezogen auf das Referenznormalplasma, angegeben werden: npQuotientAPTTAPTTAPTT- = Dabei ist APTTpAPTT der Plasmaprobe in Sekunden; APTTnAPTT des Referenzplasmas in Sekund

31、en. DIN 58908:2015-09 8 Literaturhinweise DIN 58939-1, Hmostaseologie Referenzplasma Teil 1: Anforderungen, Herstellung DIN EN ISO 7886-1, Sterile Einmalspritzen fr medizinische Zwecke Teil 1: Spritzen zum manuellen Gebrauch 1 Stevenson, K. J., Easton, A. C., Curry, A., Thomson, J. M., Polier, L.: T

32、he Reliability of Activated Partial Thromboplastin Time Methods and the Relationship to Lipid Composition and Ultrastructure; Thromb. Haemostas. 55 (1966). 25D-258 2 IFCC and ICSH Approved Recommendation (1987) on the Theory of Reference Values; Part 5. Statistical Treatment of Collected Reference V

33、alues. Determination of Reference Limits; J. Clin. Chem. Clin. Bio-chem. 25 (1967) 645-656 Dokument-Typ: Norm Dokument-Untertyp: Dokumentstufe: Dokumentsprache: D Date:2015 September DIN 58908 Hmostaseologie Bestimmung der aktivierten partiellen Thromboplastinzeit (APTT) Referenzmethode Haemostaseol

34、ogy Determination of activated partial thromboplastin time (APTT) Reference measurement procedure Hmostase Dtermination du temps de cphaline + activateur (TCA) Mode opratoire de mesure de rfrence ICS 11.100 Ersatz fr Ausgabe 2000-03 Supersedes March 2000 edition In case of doubt, the German-language

35、 version should be consulted as the authoritative text. DIN 58908:2015-09 2 Inhalt Seite Foreword 3 1 Scope 4 2 Normative references 4 3 Terms and definitions .5 4 Designation 5 5 Collection and processing of blood.5 6 Procedure .6 6.1 Reaction mixture 6 6.2 Performing the determination 6 7 Evaluati

36、on .7 7.1 APTT reference interval .7 7.2 Report of results 7 Bibliography 8 DIN 58908:2015-09 3 Foreword This Standard has been prepared by the Technical Committee NA 063-03-05 AA “Hmostaseologie” of the DIN-Normenausschuss Medizin (DIN Standards Committee Medicine) in cooperation with the German So

37、ciety for Thrombosis and Hemostasis. Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent rights. DIN shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Amendments The following amendments have been made to DIN 58908:

38、2000-03: a) the scope has been updated; b) the terminology and mathematical equation were updated; c) the standard has been editorially revised. Previous editions DIN 58008: 1989-10, 1994-06, 2000-03 DIN 58908:2015-09 4 1 Scope This Standard is applicable to the determination of the activated partia

39、l thromboplastin time (APTT) in plasma obtained from citrated venous blood. The activated partial thromboplastin time is used: a) as a global test for the endogenous coagulation cascade (factors VIII, IX, XI, XII, prekallikrein, HMW-kininogen); as well as for fibrinogen and the factors II, V und X;

40、b) for monitoring the influence of pharmacotherapy, e.g. that of unfractionated heparin or argatroban therapy, on blood coagulation; c) as a proof of acquired inhibitors of the factors of the endogenous coagulation system, especially factor VIII inhibitors as a result of haemophilia treatment and so

41、-called lupus anticoagulants. The APTT may not be used for the surveillance of the pharmacotherapeutic influence of blood coagulation by some direct thrombin inhibitors or factor Xa-inhibitors (e.g., dabigatran, rivaroxaban, apixaban, edoxaban). When determining the activated partial thromboplastin

42、time by the procedure described in this standard, the results are only comparable if qualitatively similar partial thromboplastins and activating agents are used. NOTE “Qualitatively similar” means similar sensitivity to coagulation and anticoagulant factors. 2 Normative references The following ref

43、erenced documents, in whole or in part, are indispensable for the application of this document. For dated references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies. DIN 58905-1, Haemostaseology Blood collectio

44、n Part 1: Preparation of plasma from citrated venous blood for coagulation testing DIN 58911-1, Haemostaseology Calibration of measurement procedure Part 1: Clotting time measure-ment procedures DIN 58970-2, Laboratory centrifuges Centrifuge tubes for relative centrifugal acceleration up to 4000 DIN

45、 EN ISO 8655-2, Piston-operated volumetric apparatus Part 2: Piston pipettes DIN 58908:2015-09 5 3 Terms and definitions For the purposes of this document, the following terms and definitions apply: 3.1 activated partial thromboplastin time APTT in vitro clotting time of plasma from citrated venous

46、blood after adding partial thromboplastin (as source of phospholipids), calcium ions and an activating agent Note 1 to entry: The activated partial thromboplastin time is given in seconds. 3.2 partial thromboplastin mixture of phospholipids of different origin, e.g. synthetic or biological extracts

47、(from animal brain, soy beans), which mimic the platelet surface in the partial thromboplastin time and reduce the clotting time of human and animal plasma in the presence of a defined concentration of calcium ions 3.3 activating agent inorganic (e.g. silicates, kaolin) or organic substance (e.g. el

48、lagic acid, polyphenols) which provides a contact surface for the accelerated activation of the endogenous coagulation system in plasma 3.4 reference plasma normal pooled plasma having the same coagulability at different locations when using the same reagents, methods and techniques; the reference p

49、lasma is stored at a central location either deep-frozen at -70 C or lyophilized SOURCE: DIN 58939-1:2000, 3.1 4 Designation Designation of the determination of the activated partial thromboplastin time (APTT) according to this Standard: Determination DIN 58908 2015 APTT 5 Collection and processing of blood The collection and processing of blood shall be carried out as described i