DIN 10759-2016 Analysis of honey - Determination of saccharase activity - Siegenthaler method《蜂蜜的分析研究 蔗糖酶活性的测定 西根哈勒法》.pdf
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1、Dezember 2016DEUTSCHE NORM Preisgruppe 7DIN Deutsches Institut fr Normung e. V. Jede Art der Vervielfltigung, auch auszugsweise, nur mit Genehmigung des DIN Deutsches Institut fr Normung e. V., Berlin, gestattet.ICS 67.180.10!%_p“2586077www.din.deDIN 10759Untersuchung von Honig Bestimmung der Saccha
2、rase-Aktivitt Verfahren nach SiegenthalerAnalysis of honey Determination of saccharase activity Siegenthaler methodAnalyse du miel Dtermination de lactivit Mthode selon SiegenthalerAlleinverkauf der Normen durch Beuth Verlag GmbH, 10772 BerlinErsatz frDIN 10759-1:1998-08www.beuth.deGesamtumfang 9 Se
3、itenDDIN-Normenausschuss Lebensmittel und landwirtschaftliche Produkte (NAL)DIN 10759:2016-12 2 Inhalt Seite Vorwort 3 1 Anwendungsbereich . 4 2 Normative Verweisungen . 4 3 Begriffe 4 4 Kurzbeschreibung des Verfahrens 4 5 Chemikalien . 4 5.1 Allgemeines . 4 5.2 Phosphat-Pufferlsung 4 5.3 Substratls
4、ung 5 5.4 Sistierlsung 5 6 Gerte und Hilfsmittel . 5 7 Probenahme 6 8 Durchfhrung 6 8.1 Probenvorbereitung . 6 8.1.1 Flssiger oder kandierter Honig ohne Verunreinigungen . 6 8.1.2 Flssiger oder kandierter Honig mit Verunreinigungen 6 8.1.3 Wabenhonig . 6 8.2 Herstellung der Probenlsung 6 8.3 Bestimm
5、ung . 6 9 Auswertung 7 9.1 Berechnung 7 9.2 Przision des Verfahrens 7 10 Untersuchungsbericht . 8 Literaturhinweise . 9 DIN 10759:2016-12 3 Vorwort Diese Norm wurde vom Arbeitsausschuss NA 057-05-08 AA Honiguntersuchung“ im DIN-Normenausschuss Lebensmittel und landwirtschaftliche Produkte (NAL), era
6、rbeitet. Es wird auf die Mglichkeit hingewiesen, dass einige Texte dieses Dokuments Patentrechte berhren knnen. DIN ist nicht dafr verantwortlich, einige oder alle diesbezglichen Patentrechte zu identifizieren. Die Werte fr die Wiederholgrenze und die Vergleichgrenze sind aus Ringversuchen gewonnen
7、worden. Sie gelten mit einer Wahrscheinlichkeit von 95 %. Das bedeutet, dass im Durchschnitt bei 20 Untersuchungen einmal eine berschreitung der angegebenen Werte erwartet werden kann. nderungen Gegenber DIN 10759-1:1998-08 wurden folgende nderungen vorgenommen: a) der Bezug auf die zurckgezogene No
8、rm DIN 10759-2 wurde entfernt; b) der Abschnitt 2, Normative Verweisungen, wurde angepasst; c) der Abschnitt 7, Probenahme, wurde mit Verweisung auf ein geeignetes Probenahmeverfahren nach DIN 10742 angepasst. Frhere Ausgaben DIN 10759-1: 1998-08 DIN 10759:2016-12 4 1 Anwendungsbereich Diese Norm le
9、gt ein Verfahren zur Bestimmung der Saccharase-Aktivitt (-Glucosidase) in Honig fest. 2 Normative Verweisungen Die folgenden Dokumente, die in diesem Dokument teilweise oder als Ganzes zitiert werden, sind fr die Anwendung dieses Dokuments erforderlich. Bei datierten Verweisungen gilt nur die in Bez
10、ug genommene Ausgabe. Bei undatierten Verweisungen gilt die letzte Ausgabe des in Bezug genommenen Dokuments (einschlielich aller nderungen). DIN 10742, Untersuchung von Honig Leitfaden zur Probenahme 3 Begriffe Fr die Anwendung dieses Dokuments gilt der folgende Begriff. 3.1 Saccharase-Aktivitt (na
11、ch dem Siegenthaler-Verfahren) der nach dem Verfahren nach Siegenthaler ermittelte Abbau des Substrates p-Nitrophenyl-D-glucopyranosid (p-NPG) zum Produkt p-Nitrophenol Anmerkung 1 zum Begriff: Die Berechnung der Saccharase-Aktivitt ergibt den Aktivittswert U in Einheiten je kg Honig. 1 U ist die En
12、zymaktivitt, die eine Substratmenge von 1 mol je min unter festgelegten, fr das jeweilige Enzym optimalen Bedingungen (pH-Wert, Temperatur) umsetzt. 4 Kurzbeschreibung des Verfahrens Bei dem photometrischen Messverfahren werden definierte Volumina an Probenlsung und Substratlsung grndlich vermischt.
13、 Nach einer Inkubationszeit von 20 min bei (40,0 0,2) C wird die Reaktion mittels einer Sistierlsung gestoppt. Die Honiglsung wird erst nach der Zugabe der Sistierlsung in die Blindprobe pipettiert. Die Extinktion wird gegen die Blindprobe gemessen, und daraus wird die Saccharase-Aktivitt in Einheit
14、en je kg Honig errechnet. 5 Chemikalien 5.1 Allgemeines Es sind analysenreine Chemikalien zu verwenden. Das verwendete Wasser muss destilliert oder mindestens von entsprechender Reinheit sein. Unter Lsung ist eine wssrige Lsung zu verstehen. 5.2 Phosphat-Pufferlsung c (KH2PO4) = 0,086 mol/l1), c (Na
15、2HPO4 2 H2O) = 0,014 mol/l1), 1)Stoffmengenkonzentration DIN 10759:2016-12 5 c (KH2PO4+ Na2HPO4 2 H2O) = 0,1 mol/l1), pH = 6,0 Es werden 11,66 g Kaliumdihydrogenphosphat (KH2PO4) und 2,56 g Dinatriumhydrogenphosphat-Dihydrat (Na2HPO4 2 H2O) in etwa 900 ml Wasser gelst und mit Wasser auf 1 000 ml auf
16、gefllt. 5.3 Substratlsung c (p-NPG) = 0,02 mol/l1), pH = 6,0 In einem 1 000-ml-Messkolben werden 6,025 2 g p-Nitrophenyl-D-glucopyranosid (p-NPG) in Phosphat-Pufferlsung (siehe 5.2) gelst. Da p-NPG schwer wasserlslich ist, kann der zum Lsen verwendete Puffer auf etwa 60 C erwrmt werden. Die Lsung is
17、t danach sofort wieder abzukhlen. Nach dem Abkhlen auf Raumtemperatur wird die Lsung mit der angegebenen Phosphat-Pufferlsung auf 1 000 ml aufgefllt. Die Lsung ist sofort verwendbar. Sie ist bei Lagerung in einer Lichtschutzflasche bei etwa 4 C im Khlschrank nicht lnger als 1 Woche haltbar. 5.4 Sist
18、ierlsung c (Tris-(hydroxymethyl)-aminomethan) = 3 mol/l1), pH = 9,5 In einem 1 000-ml-Messkolben werden 363,42 g Tris-(hydroxymethyl)-aminomethan in Wasser gelst. Mit Salzsure, c (HCl) = 3 mol/l1), wird die Lsung auf pH = 9,5 eingestellt und auf 1 000 ml aufgefllt. 6 Gerte und Hilfsmittel bliche Lab
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