CNS 14924-2005 Essential oils - Analysis by high performance liquid chromatography - General method《精油－高效能液相层析法通则》.pdf

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1、 1 印行年月 94 年 10 月 本標準非經本局同意不得翻印 中華民國國家標準 CNS 總號 類號 ICS 71.100.60 K6111414924經濟部標準檢驗局印行 公布日期 修訂公布日期 94 年 5 月 13 日 年月日 (共 4 頁 )精油高效能液相層析法通則 Essential oils Analysis by high performance liquid chromatography General method 1. 適用範圍：本標準規定以高效能液相層析法測定精油中所含的特殊化合物的含量及/或特性成分分佈，以分析精油。 2. 方法概要：液相層析法是一種基於吸附、分配、離子

2、交換及 /或排阻現象 (exclusive)的分離方法。利用適當填充的層析管柱在適宜的條件下，分析少量的精油或香料工業原料，以量測波峰的面積或高度測定其成分並加以定量。 3. 試藥及材料 3.1 參比物質：為待測定化合物的相對應的物質，應於最接近使用日期內純化。參比物質之說明可參閱相關國際標準。 3.2 內標準或外標準：內 標準或外標準於相關國際標準之規定其溶析 (elute)情形應盡量與待測的化合物相近，且其波峰與此偵測系統可測出精油中任何化合物的波峰不應有重疊。 3.3 移動相：移動相的組成在操作中可保持一定同成分的溶析 (isocratic elution) 或根據特定的程式而改變梯度溶

3、析 (gradient elution)。其規定可參閱相關國際標準。 3.4 溶析溶劑：溶劑的性質和品質是根據待分析的樣品、管柱及偵檢器的性質而選定。溶液不應含有小於 0.5m 的固體顆粒。 3.5 氣體：如果泵送系統需要使用氣體，此氣體應為惰性氣體，如氦、氮或氬。 4. 儀器裝置 4.1 分離系統 4.1.1 層析儀。 4.1.2 泵送系統或其他系統，要有恆定或程式化的流速。 4.1.3 溶劑供應系統。 4.1.4 溶劑脫氣系統。 4.1.5 合適的偵測系統，要能夠測定出待測試樣中化合物的量。 4.2 記錄器及（可選配）積分儀，其性能必須配合與儀器的其他部分相容。 4.3 管柱：由惰性材料所

4、製（如玻璃、不銹鋼），其機械強度可以耐所用的壓力。管柱的溫度應為穩定的或經程式化。 備考：固定相的性質及粒子大小之規定可參閱相關國際標準。 5. 測試樣品的製備：參閱 CNS 6573香精油試樣製備法，如要求注入試樣需經過特別製備，其規定則依相關國際標準。 2 CNS 14924, K 61114 6. 操作條件 6.1 溫度：如果溫度與常溫不同，依相關國際標準之規定。 6.2 溶析溶劑之流速：調整流速，使得待測成分可以分離。 7. 管柱之效能 7.1 化學惰性測試：要確保產物可以鑑定出來，而不會被破壞。 7.2 管柱效率：從相關國際標準規定的內標準波峰以測定有效板數 N，使用的溶劑亦需依相關

5、國際標準之規定。在恆溫及單組成的條件下， N 的計算式為： 25.054.5=bdNr(1) 式中， dr：在基線上的注入點與波峰頂端的距離， mm b05：半波寬， mm 圖：解析因素的計算 7.3 解析：計算兩相鄰波峰 I 及 的解析因素 R 的如式 (2)（參數參閱附圖）： () ()() ( )IIbIbIdIIdRrr5.05.02+=(2) 式中， dr(I)：為波峰 I 的滯留距離 dr(II)：為波峰 的滯留距離 b0.5(I)：在波峰 I 的半波寬， mm b0.5(II)：在波峰 的半波寬， mm 8. 測定方法 8.1 一般條件：依相關國際標準中層析儀之規定。以單一或梯度

6、溶析的操作法測定某種特定的組成。以使其分離達到相關國際標準之要求。操作條件穩定後，注入適當量待測樣品以得到層析圖“ A”。 8.2 內標準法：使用同樣的條件得到精油以及內標準（參閱第 3.2 節）的層析圖。檢查層析圖中待測成分是否與精油中所有組成分離出來，且內標準不應干擾精油中的任何成分。 8.2.1 回應因子之測定：係於定量測 定時檢測組成相對於內標準的回應因子，稱取適當量的內標準（參閱第 3.2 節）及參比物質（參閱第 3.1 節），以獲得dr(I) dr(II) b0.5(II) b0.5(I) 3 CNS 14924, K 61114 大致相等的對應波峰。稀釋用 溶劑可參閱相關國際標準

7、之規定。於整個系統穩定後，注入適當量待測混合物，然後依第 8.1 節的條件進行分析以得到層析圖“ B”。 回應因子 K 由下列公式計算： REERAmAmK = (3) 式中， AR：參比物質波峰面積 AE：內標準波峰面積 mR：參比物質的質量， mg mE：內標準質量， mg 8.2.2 測定：如果相關的國際標準規 定須使用內標準法，就需製備混合物，稱取適當量的精油至 0.1 mg，以及內標準。選擇內標準的量，使得待測化合物與內標準的波峰面積大致相等 。於整個系統穩定後，注入適量的待測混合物，參閱第 8.1 節的條件進行分析而得到層析圖“ C”。 8.3 添加法：如果某一測定中不能使用內標準

8、法，可使用添加法。注入適當量的精油，在所得層析圖 “D”中 X 為待測的化合物之波峰， Y 為靠近 X 化合物之波峰。製備混合物時，稱取 m 克精油樣品及 mR克的參比物質（參閱第 3.1 節），相對應於化合物 X 均秤取至 0.1 mg，注入適量的待測混合物，以得到層析圖“ E”。 8.4 外標準法：如果不能使用第 8.2 節及第 8.3 節的方法，則使用外標準法。本法只應用在每次可注入一定體積待測物（例如環管式的注入閥門）之注入系統。製備不同濃度之參比物質溶液，濃度由低至高濃度逐漸增加。依序注入這些不同濃度的溶液，每次注入量相同。畫出波 峰面積與不同參比物質濃度的對應圖。再注入相同量的精油

9、，其中“ Z”為待測的化合物，量測“ Z”波峰的面積，從所得的“ Z”的面積，由對應圖中讀出“ Z”的濃度。 9. 報告 9.1 內標準法：計算待測化合物的含量 cx，是以質量百分比表示，使用下式： 100=mAKmAcEEXx(4) 式中， AX：待測化合物波峰面積 AE：內標準波峰面積 m：精油質量， mg mE：內標準質量， mg K：待測化合物相對於內標準的反應因子 9.2 添加法：計算待測化合物的含量 cx，以質量百分比表示，使用下式： 100=rrrmmcRx(rr) (5) 式中， mR：參比物質（參閱第 3.1 節）質量， g m：精油質量， g 4 CNS 14924, K

10、61114 YXAAr = (6) AX：相對應於層析圖 “D”中的化合物 X 的波峰面積 AY：相對應於層析圖 “D”中靠近 X 之化合物 Y 波峰面積 YXAAr= (7) XA ：相對應於層析圖 “E”中的化合物 X 的波峰面積 YA ：相對應於層析圖 “E”中的化合物靠近 X 之 Y 化合物的波峰面積 8.3 結果及再現性：獲得待測物中化合物的反應因子 K 及含量 cx，待測樣品須做幾次（至少三次）得到平均值。這些不同的值與其平均值的差異應在一定百分比之內。差異百分比及測定次數參閱相關國際標準之規定。 10. 報告 試驗報告應該包括下列項目： (a) 儀器系統 (b) 本標準參考文獻 (c) 管柱特性（材料、大小、填充物、固定相） (d) 偵檢器特性（選擇性）和操作條件 (e) 移動相特性（流速及性質） (f) 試驗樣品鑑定（總稀釋倍數及比例） (g) 所得結果 引用標準： CNS 6573 香精油試樣製備法