ISO 15189实验室认可性能验证方案.doc

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1、医学实验室 ISO 15189 认可性能验证实验方案 为了满足目前医学实验室认可的需求 保证实验室检测结果的准确性，特制定 本方案 。适用于 强生 VITROS 产品的试验项目的性能验证，包括 V250/V350/V950/FS5.1/V3600/V5600上所能开展的所有 定性 检测项目 。 本方案 从准确度、精密度、参考范围、线性范围以及 方法学比对 5 个 方面 对各个试验项目进行评价 。 一、 精密度 （ Precision）： 精密度是指在规定条件下所获得的检测结果的接近程度 ， 表示测定结果中随机误差大小程度的指标 。 精密度通常用不精密度表示。可以分别评价连续精密度（批内精密度）

2、、重复性不精密度（中间精密度，包括批间、日间精密度等）和再现性精密度。 本方案采用批内和 天间两 种方法对各个试验项目的精密度进行评价 。全部实验过程使用同批号试剂和质控品，并且保证检测当日质控在控 。 1、 批内精密度（ 连续精密度 ）： 方法： 在检测患者标本过程中， 连续运行高低水平 质控 品 各 20 次，记录检测结果。计算批内精密度的 CV值和 SD 值。 结果评价 （ 1）厂家评价标准： 计算精密度指数 =验证 SD/厂商 SD，精密度指数要求小于等于 1，或者实测 CV 小于等于厂家 要求 的 CV，两者符合其一即可 。具体见精密度评价表格。 （ 2）按照国际推荐标准：批内精密度

3、应在 CLIA88 允许误差的 1/4以内， 见 美国 CLIA 88 能力比对检验的分析质量要求 。 2、 天间精密度（中间精密度） ： 方法： 同样使用 两个 水平的 质控 品 ， 若 需 复溶冻干 质控品做 实验，要注意选择产品的稳定性和瓶间差。要严格控制每次复溶冻干品时 的操作手法 。 连续测试 20天 ，每天 检测 1次。在次过程中不能更换试剂批号及质控品批号，是否需要重新定标则取决于实验室。 测试完成后记录检测结果。 结果评价 （ 1） 厂家评价标准 : 计算天间 的 SD及 CV值，并计算 精密度指数 =验证 SD/厂商 SD。 精密度指数要求小于等于 1， 或者 实测 CV小于

4、等于厂家 要求 的 CV， 两者符合其一即可 。具体见精密度评价表格。 （ 2）按照国际推荐标准：批内精密度应在 CLIA88 允许误差的 1/3以内，见 美国 CLIA 88 能力比对检验的分析质量要求 。 二、 准确度 准确度 (accuracy)指 检测结果与被测量 物 真值之间的 接近 程度。是分析测量范围、分析灵敏度以及生物参考区间评价 的基础。 准确度 的 评价 方法很多，比如检测 定值参考物质，同参考方法进行比对，同有溯源性的检测系统进行方法学比对，卫生部临检中心质评的汇报结果均可以作为评价准确性的方法之一。 本方案采用测定定值标准物质的方法来评价 各个检测项目的 准确度。 定值

5、标准物质采用厂家 定值标准 品。 方法 ： （ 1） 试验期间 保证机器状态正常，保证试验当日室内质控在控。 （ 2） 按厂家要求准备 各个项目的 新批号 定标品 （要与定标时使用的定标品批号不同） 各一套，按照 标准 复溶。 （ 3） 记录该新批号定标品的定值。 （ 4） 在设备上检测各个定标品（多水平）的相关项目，每个水平重复 2 次，记录检测结果 ， 将检测结果录入准确度评价表格。 结果评价： （ 1） 厂家标准： 按照各定标品 各水平的 定值和不确定度（厂家提供），来确定准确度的 偏倚范围。计算实测均值的各项目各水平定标品的偏倚，与偏倚范围相比较，来判断偏倚是否可以接受。详见准确度评价

6、表， 实测的均值如果落在该限度内，则为其准确度 认为 可 被 接受。 （ 2） 按照国际推荐标准：准确度偏倚应该在 CLIA88 允许误差的 1/2以内，见 美国 CLIA 88能力比对检验的分析质量要求 。 三、 参考范围 验证 参考 NCCLSC28一 A2文件 ， 本方案仅对厂家提供的或者实验 室正在使用的各个项目的参考范围进行验证 。 方法： （ 1） 选择 20 个能够代表实验室的健康总体 的标本。 （ 2） 保证试验系统运行正常，依照标准操作程序检测标本。 （ 3） 运行该 20份 标本 ，记录结果， 将结果填入 参考区间验证 表格。 结果评价 如果 20 个参考个体中不超过 2

7、例的检测值在验证 的参考限之外，厂商或提供参考区间的实验室报告的 95%参考区间可以接受。如果 3例以上超出界限，再选择 20 个参考个体进行验证，若少于或等于 2 个观测值超过原始参考值，则可接受，若还有 3个超出参考限，需要重新检查各种条件，决定是否建立自己的参考区间。 四、 线性范围 分析测量范围即定量检测项目的线性范围，是整个检测系统（包括仪器、试剂、校准品、质控品、操作程序、检验人员等）对应于系列分析浓度的仪器最终输出的信号间是否呈恒定比例的性能，是一个很重要的仪器性能分析指标。 本实验通过测定不同配比比例的高低值新鲜患者标本 ，以验证实测值和理论值的线性关系，来评估每个检测项目的线

8、性范围。 方法 ： （ 1） 实验室人员必须十分熟悉仪器的操作、质量控制和定标方法，以及正确的收集样本。 试验期间保证仪器 状态 良好 下，质控 在控 。 （ 2） 全部实验数据尽可能在较短的时间内收集，如可能，单个分析试验最好在一天内做完。 （ 3） 用于验证线性范围的标本类型应与临床测试所用的标本类型 相同或 相类似，所有标本应不含厂家所标定的干扰因素（如溶血、黄疸、脂血等）。如果上述条件不可避免，则应在最后的报告中注明在评价实验中所用的标本处理方法或基质类型。注意：收集的 高浓度 标本应尽可能的 接近线性范围高限。 （ 4） 按照线性评价表格要求配比标本。将 H 和 L 样品按 : 5L

9、 、4L+IH 、 3L+2H 、 2L十 3H 、 lL十 4H 、 5H 关系各自配制棍合，形成系列评价样品。 （ 5） 难以收集到低限样品，可收集高值样品，用 相应稀释液 作系列不同程度 稀释 ，形成系列评价样品。 （ 6） 在 线性评价表格 记录检测结果。 结果评价： 将数据填入 线性评价 表格， 以 X表示各样品的预期值，以 Y表示各样品的实测值， 得出散点图 。 若所有实验点呈明显直线趋势，用直线回归对数据进行统计，得直线回归 Y=bX+a，若 r20.95， 斜率 b 在 1.00 0.03 范围内 ，可直接判断测定方法在实验所涉及的浓度范围内成线性。 五、用患者标本进行方法比对

10、及偏倚评估 实验室准备用一个新的检测系统或测定方法 (或新的试剂盒、新仪器进行病人标本测定前，应与原有的检测系统或者公认的参考方法 -起检测一批病人标本，从测定结果间的差异了解新检测系统或方法引人后的偏倚。如果偏倚不大，或者偏倚量在允许误差范围内，说明两检测系统或方法对病人标本测定结果基本相符，新检测系统或方法替代原有检测系统或方法不会对临床引人明显偏倚 ， 这样的实验 称为 方法学比较实验 。 在方法学比较中，常将新方法称为实验方法 ， 与之比较的方法称为比较方法。 试验方法： （ 1） 各种仪器处于良好的工作状态，严格按 SOP操作。 （ 2） 检验人员有足够的时间熟悉检测系统的各个环节，

11、熟悉评价方案。 （ 3） 在整个实验中，保持实验方法和比较方法都处于完整的质量控制之下，始终对实验结果有校准措施。 （ 4） 实验时间至少做 5天，时间长一些更好，可以客观反映实际情况。 （ 5） 至少 做 40份病人标本，多一点更好。 （ 6） 尽可能使 50%的实验标本分析物的含量不在参考区间内，各个标本分析物含量越宽越好。 （ 7） 不要使用对任一方法有干扰的标本。 （ 8） 每份标本应有足够的量，以便使实验方法和比较方法都能做双份测定。例如，第 l次 序号为 1 、 234 、 56 、 7 、 8 ，第 2次 序号为 8 、 7 、 6 、 5 ， 4 、 3 、 2.1 。两方法都

12、按此实验。 （ 9） 应在 2个小时内两种方法对同批标本分别开始实验，最好使用当天采集的标本 。 （ 10） 实验结束后， 记录数据。 保留原始 数据。 结果评价： （ 1） 不采用已明确有人为误差的结果。 （ 2） 将所有无明显误差的实验结果记录下来。但是，若两 种方法 结果的各自差值大于任一方法的批内不精密度，应查对标本，并重新实验。若找不出原因，应保留数据备考 。 （ 3） 整个实验一定要有内部质量控制，失控时结果 必须 重做。 （ 4） 对实验数据的初步 筛查： 设比较方法测定结果为 X 值，实验方法测定结果为 Y 值。 在方法学比对表格上录入检测数据， 若有 40个标本，则有 80个

13、 X 和 Y 的结果。 检查每一方法内现份 测定值有无 离群表现，先计算每一标本每一方法成对结果的差值和差值的均值。以 4 倍的各方法差值的均值为判断限，各方法内标本的成对差值都应在限值内，说明 双 份测定结果符合要求。 若原数据仅 40 例病人标本的结果，剔除的数据应另做实验补 上。若有 1 例以上需剔除，应检查原因是标本原因，其他数据仍可使用。无法找出原因，则保留使用所有数据 。 若最大差异超过临床允许误差，应从仪器、试剂、方法上寻找原因，停止继续实验。 （ 5）在方法学比对表格上， 以 X均值 、 Y 均值 和 (Y-X)、 X作图，通过 这两种图了解线性关系 ，即 有无明显离群点，是否

14、呈恒定变异等情况 。 如果实验结果具良好线性关系，继续处理 数据。 （ 6） X 、 Y 关系实验点有无离群表现 先看 图在无明显离群点。若无 ，可作以后的统计 ； 若有，应对 X 、 Y 配对值作离群值计算。将每一个标本两个方法的前后两个测定值一一 对应 ，求出第 1 个 X 与第 1 个 Y 的差值和第 2 个 X 与第 2 个 Y 的差值，并计算出所有标本总的平均差值，以 4 倍的平均差值为判断限值。所有差值都不应超出限值 。 若有，为离群点，仅一点离群点，剔除。有一点以上离群点，需查原因 ， 判断是否保留数据。若原因不清，不能随意剔除，全部保留作统计分析，或者用一批新标本重做评价。凡有

15、剔除的，应另用标本补做。 （ 7） 标本内分析物含量分布是否适当的检验 。 相关系数 r 常用来表示两个变量间互相关系密切的程度。在直 线回 归统计时，除所有实验点和回归线间的离散度会 影响 r 值的大小外，实验点对应的分析物含量分布宽度也会明显影响 r 值的大小。若实验点过于密集，尽管离散度不大，但 r 值偏小。因此 ， 可用 r 检验 X 取 值范围是否 适当 。 一般要求 r 大于 或等于 0.975 (或 r2大于或等于 0. 95) ，认为 X 范围是适合的。若 r 小于 0.975时 ，应再多做实验，扩大数据范围 。 （ 8） 线性回归统计 可用直线回归分析 来 估计斜率和截距。

16、数据以回归式 Y=bX十 a,表示这些数据的直线趋 .这是以 X 方法为准， Y 方法与之配合的关系式。式中 b 为斜率 ,a为截距 。 两方法理想状态的回归式应为 Y=X， 即 b =1 ， a=0。 根据临床使用要求，可在各个临床 医学 决定水平 浓度 Xc 处 ，了解 Y 方法引人后相对于 X方法 的系统误差 (SE) , SE = | (b -1)Xc + a |。 （ 9） 以 美国 CLIA 88能力比对检验的分析质量要求 允许 误差 的 1/2为判断依据，由方法学比较评估的系统误差 (SE)不大于允许误差，认为 系统误差 在 可接受水平 内。 备注： 1、各个实验室应该根据自己的

17、实际情况，建立性能验证的方法和标准。该方法适用于科室内所有生化设备的验证。 2、上述试验方案 可用于强生 Vitros 系列产品， 仅供实验室参考。 参考文献： 1、 临床检验质量管理技术 ， 冯仁丰 ， 上海科学技术文献出版社 2、 临床检验方法学评价 ， 杨有业 张秀明 ， 人民卫生出版社 3、 NCCLS， Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples; Approved GuidelineSecond Edition 4、 NCCLS， Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures: A Statistical Approach; Approved Guideline 5、 NCCLS， Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Methods; Approved GuidelineSecond Edition