DB11 T 373-2006 苏氏圆腹鱼芒.pdf

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1、 ICS 65.150 B 52 备案号： 19164-2006 北 京 市 地 方 标 准 DB DB11/T 373 2006 苏氏圆腹 鱼芒 pangasius sutchi 2006-07-25发布 2006-10-01实施 北京市质量技术监督局 发布 DB11/T 3732006 I 前 言 为保护该品种优良的经济性状及保存其种质资源，避免在推广中混杂，特制订本标准，作为该品种 的种质检测和种质选育依据。 本标准的附录 A为规范性附录。 本标准由北京市农业局提出并归口。 本标准由北京市水产技术推广站起草。 本标准主要起草人：杨华莲、潘志、张黎、柏文东、马立鸣、张孟才。 DB11/T

2、3732006 1 苏氏圆腹 鱼芒 1 范围 本标准规定了苏氏圆腹 鱼芒 （pangasius sutchi ）的主要生物学特性、主要 营养成分、细胞遗传学 特性、 生化遗传学 特性、 分子遗传学 特性，以及检测方法。 本标准 适用于苏氏圆腹 鱼芒 的种质 鉴定。 2 规范性引用文件 下列 文件 中的 条款通过 本标准的 引用而成 为本标准的 条款 。凡是注日期 的 引用 文件 ，其 随后所有 的修改单 （不包括勘误的内容 ） 或修订版均不适用于本标准， 然而， 鼓励根据本标准 达成协议的 各方研 究是否可使用这些 文 件 的最新版本。 凡是不注日期的 引用 文 件 ，其最新版本适用于本标准。

3、 GB/T 5009.3-2003 食品中水分 的测定 GB/T 5009.4-2003 食品中 灰分的测定 GB/T 5009.5-2003 食品中 蛋白质的测定 GB/T 5009.6-2003 食品中 脂肪的测定 GB 17718-1999 鳙 GB/T 18654.2 养殖鱼类 种质检验 第 2部分 抽样方法 GB/T 18654.12-2002 养殖 鱼 类 种质检验 3 名称与分类 3.1 学名 苏氏圆腹 鱼芒 （ pangasius sutchi）。 3.2 分类位置 属鲇形目 (siluriformes),鱼芒 科(pangasiidae), 鱼芒 属(pangasius) 。

4、 4 主要生物学特性 4.1 外部形态特征 4.1.1 外形 体长， 侧扁 ， 背部隆起， 具脂鳍。 头部扁平略呈圆锥状， 吻短 ，口 亚 下位 。 鳃膜与颊部不相连， 两 眼位 于近腹 面部 。 有须 2对，1 对下颌须，1 对 口角须 。臀鳍 基长 ，从肛门后直达近尾 鳍 ，脂鳍与臀 鳍后 缘相对 。背鳍、胸 鳍 硬棘坚硬 。尾鳍 叉 形 。体表无鳞 。 体色肉 白 色 ，外形似鲨 鱼。 具 前颌齿、下 颌齿、 腭骨齿 及上咽齿， 均 为 密布细小锐利齿。苏氏圆腹鱼芒 外 形图见图1 。 DB11/T 3732006 2 图 1 苏氏圆腹 鱼芒 外形图 4.1.2 可数性状 4.1.2.1

5、 背鳍 II，6-8 。 4.1.2.2 臀鳍 IV，25-28 。 4.1.2.3 鳃耙数 左侧第 一鳃弓鳃耙数 ： 20-23。 4.1.3 可量性状 苏氏圆腹 鱼芒 的不 同年龄组 可量 性状测量数值与比值如 下 表1 。 表 1 不同年龄组可量性状测量数值与比值 年龄 项目 1龄 （n 30 ） 2 龄（ n30 ） 3 龄（n 30） 4 龄 （n 30 ） 全长 （cm ） 42.10 7.40 48.5 6.32 68.205.62 86.18.12 体长 （cm ） 34.00 7.30 38.025.83 63.90 7.13 80.36.34 全长/ 体长 1.22 0.0

6、2 1.10 0.11 1.070.05 1.070.03 体长/ 体高 3.70 0.24 3.67 0.14 3.590.16 3.550.22 体长/ 头长 4.21 0.12 4.42 0.07 4.260.17 4.200.13 头长/ 吻长 2.76 0.42 6.00 0.37 4.260.33 3.450.27 头长/ 眼径 6.40 0.77 9.00 0.65 8.800.58 8.630.62 头长/ 眼间距 1.550.06 1.36 0.09 1.540.12 1.600.08 头长/ 尾柄 长 1.47 0.12 1.38 0.06 1.400.15 1.870.0

7、9 尾柄 长/ 尾柄高 1.880.28 1.97 0.14 1.640.21 1.280.18 4.2 内部构造特征 4.2.1 鳔 一室， 鳔壁较厚，呈锥状 ,近与腹腔等 长 。 4.2.2 胃 较短小，“ V”形 。 4.2.3 肠 长度与 体长 相近， 接近1:1 。 4.2.4 脊椎骨总数 36-38。 4.2.5 腹膜 银白色。 DB11/T 3732006 3 苏氏圆腹 鱼芒 内部 结构图见图 2。 图2 苏氏圆腹 鱼芒 内部结构图 4.3 生长与繁殖 4.3.1 生长 不同年龄组的苏氏圆腹 鱼芒 体长 、体 重测量数值见表 2。 表 2 不同年龄组鱼的体长、体重测量数值 4.3

8、.2 繁殖 4.3.3 性成熟年龄 人工饲 养条件下 ， 雌 性 4年，雄 性 3年。 4.3.4 性成熟个体性 腺每 年成熟和产卵次数 成熟1 次，产 卵 1次。 4.3.5 繁殖季节 自然条件下每 年6 月-9月，人 工 控制 条件下全年可繁 殖。 4.3.6 怀卵量 每尾雌 亲鱼 怀卵 量约（30-70 ） 万粒 。不同年龄组个 体 的怀卵 量见表3 。 表 3 不同年龄组个体 怀卵量 年龄 （ 龄 ） 3 4 5 体重 （g ） 2650.00 422.00 4732.00 392.00 5683.00 639.00 绝对 怀卵 量 （ 粒） (18.33 2.56) 10 4 (46

9、.23 8.66) 10 4(78.34 13.2) 10 4相对 怀卵 量（ 粒/g ） 75.0013.00 108.0025.00 134.0016.00 4.4 生态特征 4.4.1 食性 杂食性。 年龄 （ 龄 ） 1龄 2龄 3龄 4龄 全长 （cm ） 42.10 7.40 48.5 3.32 68.205.62 86.10 8.12 体长 （cm ） 34.007.30 38.02 5.83 63.90 7.13 80.30 6.34 体重 （g） 696.00 392.00 1786.00 267.00 2650.00 422.00 4732.00 392.00 DB11/T

10、 3732006 4 4.4.2 温度 生存水 温为15 35， 生活水 温 为 20 30， 最适生长水 温为24 28, 繁 殖 水温 为24 30。 5 肌肉营养 成分 5.1 主要 营养 成分 苏氏圆腹 鱼芒 肌肉 蛋白质、 粗脂肪、灰分、水分等 营养 含量指 标见表 4。 表4 肌肉（后肢基 部）主要营养 成分 检测项 目 营养 指标（ %） 粗 蛋白 17.17 粗 脂肪 0.41 灰分 1.10 水分 82.4 5.2 氨基酸含 量 表5 肌肉（后肢基 部）主要营养 成分 检测项 目 氨 基酸含 量 （ %） 天门 冬氨酸 1.66 苏氨酸 0.79 丝氨酸 0.71 谷氨酸 2

11、.68 甘氨酸 0.75 丙氨酸 1.00 胱氨酸 0.21 缬氨酸 0.74 蛋氨酸 0.55 异亮氨酸 0.74 亮氨酸 1.43 酪氨酸 0.62 苯丙氨酸 0.72 赖氨酸 1.52 组氨酸 0.40 精氨酸 0.98 氨基 酸 （ 以 鲜基 计） 总量 16.05% 脯氨酸 0.55 6 细胞遗传 学特性 6.1 体 细胞染色体 2倍数 2n=58 6.2 核型公式 24m+12sm+12st+10t NF=94 6.3 染色 体组 型 苏氏圆腹 鱼芒 的染 色体中 期分裂 相图见图3 ， 染 色体组型 图见图 4。 DB11/T 3732006 5 图 3 染色 体 中期 分裂相

12、图 4 染色体组型 7 生化遗传 学特性 肝脏的 乳酸脱氢酶（ LDH） 同工 酶有 5条 谱带 ，见图5 。 肝脏 的酯酶（EST ）同工酶 有3 个基 因座 位， 有3 条谱带 ， 见图 6。 图 5 肝脏乳酸脱氢酶（ LDH）同工酶 图 谱 图 6 肝脏 的 酯酶（ EST）同工酶电泳 图 谱 8 分子遗传 学特性 用15个 RAPD（ 随 机扩增多态 性DNA 技术， 又称任意引物PCR ）引物 对 其 基因组 DNA进行 分析 ， 确认 引 物S 19的 分析 结 果能够反应 其基因组的 多态 性特 征。引物S19 序列 ： tgcccgtcgt。 苏氏圆腹 鱼芒 基因组 DNA R

13、APD图谱见图 7。 O Est-3 Est-2 Est-1 DB11/T 3732006 6 图 7 基因 组 DNA RAPD图谱 B：苏氏圆腹 鱼芒 （13 个样 品） C：空白样 品 M：分子 量标准 9 检测方 法 9.1 生物学性状测 定 参照GB 17718-1999 鳙的 生物学测定 方法 。 9.2 肌肉营养 成分测定 9.2.1 样品制 备 取活体后 肢 基 部肌肉， 于105 烘干， 粉碎 。 肌肉各成分测定 按照GB/T 5009.3 、 GB/T 5009.4、 GB/T 5009.5、GB/T 5009.6 规定的 方法进行。 9.2.2 氨基酸 使用氨 基酸自动分

14、析仪进行 测定。 9.3 细胞遗传 学特性分析 根据GB/T 18654.12 的相关规定进行 。 9.4 生 化遗传 学特性分析 9.4.1 样品制 备 样品加 3%辅酶I 液匀浆 ，低温 离心 ， 至上清液澄清。整个制 备过 程 均在低温下 操作。 9.4.2 电泳分 析 使用水 平淀 粉 凝胶电泳仪 。 淀粉胶浓度为 10%， 酯酶 （EST ） 电泳缓冲液为 三羟甲基氨基 甲烷 （ Tris） -硼酸- 乙二胺四乙 酸 四钠盐； 乳酸脱氢酶 （LDH ） 电泳缓冲液 为 甲 基氨 基甲烷 （ Tris） -柠檬酸， pH值7.0 。 将10% 浓 度水解淀粉煮好 后倒入制 胶模 内 ，

15、待凝固后，切一 横裂 缝 ， 用 滤纸片吸取 样品的上清液插入 裂 缝中。 电泳电压为 250V，电泳 8 h -10h，电泳恒 温 4 ， 电泳后 横切成0.2cm 左 右的薄片，浸入 染 色液中 保温染 色。同工酶染色 液配方见附录 A。 9.4.3 结果判定 将测定 结果 对 照图5 、6 谱带确定该种 同工 酶 的编码座 位数 和多态座位 的基因数。 9.5 分 子遗传 学特性分析 9.5.1 基因组 DNA的提取纯化 取肌肉 剪碎 用 组织列解液（ 0.5mol EDTA，PH值 8.0； 200 g/mL ProteinnseK ；0.5% Snrcosyl ） 于55 消化过夜，

16、 次 日用酚、 氯仿、 异戊醇 （ 24： 24： 1） 抽提 三 次， RnaseA消 化 去除 RNA后再 抽提 一 次 ， 然后用 2150mmol/L Tris. HCl(pH 8.0)、 10mmol EDTA（ pH 8.0）， 透 析至OD 2700.05 ，检测DNA 浓 度 ， 置4 保存 备 用 。 DB11/T 3732006 7 9.5.2 RAPD 引物及扩增条 件 用PE-9600 型 PCR扩增仪 ， RAPD扩增 引物OPP 及OPM 组 计15个 。 RAPD反应： 10mmol/L Tris.HCl （pH 8.3 ）， 50 mmol/L KCl，2.0

17、mmol/L MgCl 2， 0.001%明胶； Dapt.dGTP、Dctp， dTTP各 为0.1 mmol/L: 引物 15 g， 基因 组DNA20 g ，1 单 位Tag 聚合酶 。 于 93.5 变性 1 min， 36退火1 min ， 72延伸2min ， 计 45个循 环， 循环结束后延伸 5min，扩增产物用 1.5%琼脂糖凝胶电泳 检测。 9.5.3 琼脂糖凝胶电泳 凝胶浓 度为1.5%的 琼 脂糖 ， 胶中含0.5g/mL 溴 化乙锭。 电泳缓冲液 为 TBE， 电泳在 室温 下 进行， 电压 为15V/cm ，电泳时 间 为 16h。电泳毕在紫外灯 下 观察拍照 。

18、10 检测规 则 10.1 检测分类 检测分 为鉴 定检测和质 量一 致 性检测。 10.2 检测 项目 鉴定检测 项 目包括 外部形 态特 征 、 可量性状、 可数 性状。质 量一致 性检测项目包括细胞遗传学特性、 生化遗传学 特性、分子遗传学特性。 10.3 取样 样品龟 的抽样按GB/T18654.2 规定 执 行 。 10.3.1 组 批 以同龄 期的苏氏圆腹 鱼芒 为 同一 批 。 10.4 判定 规定 各项检 验指 标在标准范 围 内则判定为苏氏圆腹 鱼芒 良种。 DB11/T 3732006 8 附 录 A (规范性 附录) 同 工酶染色液的 配方 酯酶染 色液配方 ， 见表A.1 表 A.1 酯酶染色液配方 - 乙 酸萘 酯 （mg） 坚牢蓝 B盐 （mg ） 三羟甲 基 氨 基 甲烷- 柠檬 酸缓冲液 （1mol ，PH7.0 ）(mL) 蒸馏 水(mL) 40 100 10 10 乳酸脱氢酶染 色液配方, 见表 A.2 表 A.2 乳酸脱氢酶染色液配方 乳酸 钠(mL) 辅酶I(mg) 氮蓝 四唑(mg) 吩嗪 甲硫 酸(mg) 三羟甲 基 氨基 甲烷- 柠檬 酸缓 冲液 （1mol ， PH8.6） (mL) 蒸馏 水 (mL) 0.5 6 2 1 10 10