DB11 T 677-2009 动物防疫抽样规范.pdf
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1、 ICS 65.020.30 B 41 备案号:26850-2010 北 京 市 地 方 标 准 DB DB11/T 677 2009 动物防疫抽样规范 Sampling specifications for animal epidemic prevention 2009-12-12发布 2010-04-01实施 北京市质量技术监督局发布 DB11/T 6772009 I 目 次 前言 II 1 范围1 2 术语和定义 1 3 一般要求 1 4 抽样前准备 1 5 抽样动物种类 1 6 抽样范围 2 7 抽样数量 2 8 抽样2 8.1 血液 2 8.2 一般脏器 .3 8.3 脑组织 .3
2、8.4 食道 /咽部刮取物(O-P 液) 3 8.5 呼吸道分泌物 .4 8.6 眼睛 4 8.7 皮肤及粘膜 .4 8.8 脊髓液 .4 8.9 乳汁 4 8.10 胃内容物 .5 8.11 肠内容物 .5 8.12 粪便 5 8.13 胎儿 5 8.14 动物尸体 .5 8.15 精液 5 8.16 生殖道分泌物 .5 8.17 环境病原微生物6 9 抽样的记录 6 10 样本的保存运输 .6 附录 A(规范性附录)抽样常用溶液的配制 . 7 附录 B(规范性附录)抽样记录表格 10 DB11/T 6772009 II 前 言 本标准附录 A、附录 B是规范性附录。 本标准由北京 市农业局
3、提出。 本标准由北京 市农业 标准化技 术委员会养 殖 业 分会归口 。 本标准由北京 市农业局 组织实施 。 本标准起草单位:北京 市兽医实验诊断所 。 本标准主要 起草人:靳兴军、 梁明珍、 李志军、 张跃 、沈光年、 吴惠明、 郭峰、胡楠 、 赵春颖 。 DB11/T 6772009 1 动物防疫抽样规范 1 范围 本标准规定 了动物防疫 抽样的一般要求 , 抽样前准备 , 抽样动物种类, 抽样范围 , 抽样数量 , 抽样 , 抽样的记录及样本的保存运输。 本标准适用 于动物疫 病实验室 血清学监测 、分子 生物 学监测、病原 学监测等 抽样工作 。 2 术语和定义 下列术语和定义适用
4、于本标准。 2.1 无菌操作 aseptic operation 用 于防止微生物进入 动物体组织 或其它无菌范围的 操作技术称为无菌操作 。 2.2 动物防疫抽样 Sampling for animal epidemic prevention 为了预防和 控制动物 疫病,按照 一定的规 则采集 动物体液、脏器 等样本的 行为。 2.3 份 portion 动物个体中 1个组织的 1个 样本的数量 单位。 3 一般要求 3.1 根据国家和北京市动物防疫的抽样计划,设定常规监测 、 疫 点 、 疫 区 、 受威胁区疫病监测抽样种 类、数量、范围。 3.2 抽样人员应 是兽医技 术人员, 能够正确
5、掌握抽样 方法 ,熟练使用 采样器具 。 3.3 根据不同的疫病或检验目的,采其相应的组织脏器、内容物、分泌物、排泄物或其他材料。在无 法估计病因时 , 要 选取 有代表性的样品 ,进行多点 、全面的采集 。 3.4 凡发现动物 有急性死亡 , 在排除炭疽病 情况下, 方可剖检采样。 3.5 防止污染环境 ,防止疫 病 传播 ,做好环境 消毒和病 害尸体的处理 。 3.6 采集一份样本 , 使 用一 套 器 械与 容器, 使用过的用 具应先消毒后 清洗。 3.7 一次性消毒 用品不得超期使用。 4 抽样前准备 4.1 准备口罩、 帽子、防 护眼镜、 防护服、 手套、胶靴 等人员防护用 品。 4
6、.2 准备灭菌处理 的 解剖刀 、 镊 子等 抽样用器 具 。 4.3 准备消毒液及样本的记录、保存、运输物 品 。 5 抽样动物种类 5.1 家禽。 5.2 家畜(马属 动物、猪 、牛、羊)。 5.3 宠物(犬、 猫)。 5.4 野生动物。 DB11/T 6772009 2 6 抽样范围 6.1 养殖区域包括 规 模 化种 畜禽场 、商品畜禽 场 、 养殖 小区 、 养 殖 户等 。 6.2 流通区域包括从事动物及动物产品交易活动的批发市 场、零售市场、宠物交易市场及动物隔离场 点等。 6.3 其它区域包括 畜禽屠宰场、公园 、动物 园、野禽 栖息地 等 。 7 抽样数量 7.1 常规监测抽
7、样数量 常规监测抽样数量应 符合表 1的规定。 表 1 常规监测抽样数量 存栏 数 种类 5000 10005000 500 1000 100 500 100 家 禽 30份/ 场 20 份/ 场 10 份/ 场 10 份/ 场 10 份/ 场 家畜 30 份/ 场 30 份/ 场 30 份/ 场 20 份/ 场 10 份/ 场 宠物( 犬 、猫 ) 25份/ 地区 、20 份/场 野生动物 25 份/ 地区 、10 份/动物 园、 10份 /野 禽栖息地 7.2 疫点监测抽样数量 疫点监测抽样数量应 符合表2的规定。 表 2 疫点监测抽样数量 存栏 数 种类 10000 10000 家 禽
8、100份 /场 50 份/ 场 家畜 马属 动物 100%;猪 、牛 、羊 200份/ 场 宠物( 犬、 猫) 20份/ 场 野生动物 20 份/ 地区 7.3 疫区监测抽样数量 疫区监测抽样数量应 符合表3的规定。 表 3 疫区监测抽样数量 种类 家禽 家畜 宠物( 犬、 猫) 野 生动物 数量 300 份 猪、 牛 、 羊 200 份; 马属 动物100% 50份 30 份 7.4 受威胁区监测抽样数量 受威胁区监测 抽样数量 应 符合 表4的规定。 表 4 受威胁区监测抽样数量 种类 家禽 家畜 宠物( 犬、 猫) 野 生动物 数量 300 份 猪、 牛、 羊200份 ; 马属 动物10
9、0% 50份 30 份 8 抽样 8.1 血液 8.1.1 抽样部位 翅静脉、颈静脉、尾静脉、心 脏、耳尖 或耳壳外侧静脉 。 8.1.2 抽样方法 DB11/T 6772009 3 8.1.2.1 抽血部位的皮肤先剃毛 、 清 洁, 再 用 75%的 酒 精消毒 。 8.1.2.2 用灭菌真空 采血器、 注射器或 针头穿刺 抽取。 8.1.3 处理方法 8.1.3.1 全血 将全血注入 装有抗凝剂 的 试管 中,轻轻摇 动 , 充分 混合 。 可选用 以下三种 方法: 1) 10mL全血加 入 0.1mL0.2mL 的 1%肝素 溶液。 2) 1份全血加 入 2份阿氏 液 , 阿氏 液配制
10、方法见附录 A.1。 3)4 份全血加 入 1份 3.8%枸橼酸钠 。 8.1.3.2 血清 方法一:全 血凝固后 ,在室温 下静置至自然析出 。 方法二:全 血凝固后 ,1500r/min2500r/min, 离心 10 min,吸取 上 清 液。 8.1.3.3 血浆 容器内先加抗凝剂, 血液与抗凝剂充分 混合,然 后静置 , 待细胞 下沉后, 吸取上清 液。 8.2 一般脏器 8.2.1 抽样部位 8.2.1.1 心脏。 8.2.1.2 肝脏。 8.2.1.3 脾脏。 8.2.1.4 肺脏。 8.2.1.5 肾脏。 8.2.1.6 胰脏。 8.2.1.7 淋巴结。 8.2.2 抽样方法
11、采集死亡动物的内脏样本, 最迟 不超过死亡后 6h,按无菌操作方法 采集相 关脏器的部分组织 或整个 脏器。 8.2.3 处理方法 8.2.3.1 用于细菌分 离的组织 ,单独放 在无菌容器内。 8.2.3.2 用 于 病 毒 分 离 的组织, 放在装有 病毒保存 缓冲液的容器内, 病 毒 保存缓冲 液的配制 见附录 A.2。 8.2.3.3 用于病理学 检查的组织 , 放 入装 有 10倍 于样本体 积的 10%中性福尔 马 林溶液的容器内。 8.3 脑组织 8.3.1 抽样部位 8.3.1.1 大脑。 8.3.1.2 小脑。 8.3.1.3 脑干。 8.3.1.4 延脑。 8.3.2 抽样
12、方法 按无菌操作 方法采集 部分脑组织 或 全 脑。 8.3.3 处理方法 方法一: 全脑用浸 过消毒液的 纱布包 裹后 , 浸入含 30%甘油盐水溶液 中 , 30%甘油盐水 溶液配制 见 附 录 A.3。 方法二:将 组织样本-20-70 冷冻 。 方法三:将 组织样本 放入装有 10倍于样本体积 的 10%中性福尔马 林溶液的容器内。 8.4 食道/咽部刮取物(O-P 液) DB11/T 6772009 4 8.4.1 抽样部位 8.4.1.1 食道。 8.4.1.2 咽部。 8.4.2 抽样方法 8.4.2.1 被检动物在 抽样前禁 食(可饮少 量 水 ) 12h,探杯 用 0.2%柠
13、檬酸 浸泡 5min,再 用接近动物体 温的清水冲 洗探杯后使 用 , 每采 完 一 份样本,探杯 要进行消毒并 充分清洗 。 8.4.2.2 动物站立保定 , 将 探杯随吞咽动 作 送 入食道上部 10cm15cm 处,轻轻 来回移动 23 次,然 后将探杯拉 出,采集 8mL10mL O-P 液。 8.4.3 处理方法 倒入含有等 量 Earle细胞培养 液的灭菌 广口瓶中, Earle细胞培养 液配制 见附录 A.4。 8.5 呼吸道分泌物 8.5.1 抽样部位 8.5.1.1 鼻腔。 8.5.1.2 咽喉。 8.5.1.3 气管。 8.5.2 抽样方法 用拭子采集 粘膜分泌物 , 放
14、入装 有 2mL保存液的 试管 。 8.5.3 处理方法 方法一:将 拭子浸入 pH 7.2 7.4的灭 菌肉汤保存液 中,灭菌肉汤 配制见 附录 A.5。 方法二:将 拭子浸入 0.04mol/L磷 酸 盐缓冲液中, 磷酸 盐缓冲液配制见附录 A.6。 方法三: 接种组织培养 用的拭 子浸入 0.5%乳 蛋白水 解物的汉克氏 ( Hanks) 营养液中, 乳 蛋白水 解 物的汉克氏 液配制见 附录 A.7。 8.6 眼睛 8.6.1 抽样部位 8.6.1.1 眼结膜表面 。 8.6.1.2 眼病变组织。 8.6.2 抽样方法 8.6.2.1 眼结膜表面 用拭子轻轻 擦拭后 ,放入灭 菌的 3
15、0%甘油盐水缓冲保存液中。 8.6.2.2 取病变组织 碎屑,置 载玻片上 ,制成玻璃触片。 8.7 皮肤及粘膜 抽样方法: 1) 用于一般检 测的样本 ,用灭菌 剪子和镊 子直接采 自病 变部位。加 适量抗菌 素于 30%甘油盐水缓 冲液中,加 盖密封。 2) 用于检测核 酸的样本 ,不得使 用酒精、 碘酒等消毒 剂消毒。 8.8 脊髓液 抽样方法: 1) 抽样使用特 制的专用 消毒穿刺针 。 2) 颈椎穿刺点 为环枢孔 , 垂直缓 慢 刺 入蛛网膜下 腔, 立 即拔出针芯 , 脑脊髓液 自 动流 出, 取 适量 液体,盛入 消毒容器内。 3) 腰椎穿刺部 位为腰荐孔 , 垂直缓慢刺 入蛛网
16、膜 下腔, 立即拔出针 芯, 脑脊髓液自 动流出, 盛入 消毒容器内。 腰椎穿刺 一 次 抽取量 15mL 30mL。 8.9 乳汁 8.9.1 抽样部位 乳房。 DB11/T 6772009 5 8.9.2 抽样方法 用消毒药水 洗净取乳 者的手和动物乳房 , 弃去最 初所 挤的 3mL 4mL乳汁,采集 10mL乳汁于灭菌 试管中。 8.9.3 处理方法 进行血清学 检验的乳汁 不应冻结 、 加 热或 强烈震 动。 8.10 胃内容物 8.10.1 抽样部位 动物胃内。 8.10.2 抽样方法 8.10.2.1 将多孔胃管 送入单胃胃内,其 外 露端接 在吸引器的 负压 瓶 上 , 加 负
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