DB41 T 873-2013 樱桃无病毒苗木繁育技术规范.pdf

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1、DB41 河南省地方标准 DB 41/T 8732013 樱桃无病毒苗木繁育技术规范 Technical specification for propagatiom of virus-free seeding of cherry 2013 - 12 - 25发布 2014 - 02 - 25实施 河南省质量技术监督局 发布DB41/T 8732013 I 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由中国农业科学院郑州果树研究所提出。 本标准由河南省林业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：中国农业科学院郑州果树研究所。 本标准主要起草人：赵改荣、李明、刘聪利、黄贞光

2、、李玉红。 DB41/T 8732013 1 樱桃无病毒苗木繁育技术规范 本标准规定了樱桃无病毒苗木繁育技术的术语和定义、无病毒原种圃和母本圃的建立、无病毒苗木繁育、病毒检测及监测、苗木出圃。 本标准适用于樱桃无病毒苗木的繁育。 1 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB 5040 柑橘苗木产地检疫规程 GB/T 12943 苹果无病毒母本树和苗木检疫规程 NY/T 328 苹果无病毒苗木繁育规程 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 2.1 樱桃

3、无病毒苗木 不携带李矮缩病毒( Prune dwarf virus, PDV)、李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ring spot virus, PNRSV)、樱桃小果病毒（Little cherry virus, LChV）、樱桃绿环斑驳病毒（Cherry green ring mottle virus , CGRMV）、樱桃病毒A (Cherry virus A, CVA)、樱桃坏死锈斑病毒 (Cherry necrotic rusty mottle virus, CNRMV)、苹果褪绿叶斑病毒 (Apple chlorotic leaf spot virus, ACLS

4、V)的樱桃苗木。 2.2 樱桃无病毒原种 经有资质的专业机构检测，确定不携带本标准规定病毒的原始植株。 2.3 樱桃无病毒母本圃 用于提供樱桃无病毒枝条、种子等繁殖材料的圃地。 3 无病毒原种圃的建立 3.1 脱毒材料母株要求 选取已经进入盛果期，经3年以上观察，品种纯正、生长健壮、外观无异常的植株作为待脱毒材料。 3.2 脱毒 DB41/T 8732013 2 茎尖培养脱毒法参见附录A，热处理脱毒法参见附录B。待脱毒材料可直接经过病毒检测，筛选无 病毒材料。 3.3 无病毒原种的确定 应经有资质的检测机构检测认证，确定不带上述7种病毒后，即可作为无病毒原种进行保存。 3.4 无病毒原种保存

5、原种保存圃与普通果园或苗圃应相距100 m以上、搭建300目纱网网室，封闭覆盖全圃，出入口设缓冲间。网室内土壤隔离覆盖。定植在花盆中，盆内土壤高温消毒，每个无病毒品种应保存3株以上，每株编号、挂牌标识，绘制定植图。加强肥水管理，保证树势健壮。 无病毒原种圃常用工具要专用，剪枝剪等修剪工具每株使用前用70%酒精溶液消毒。工作人员进入无病毒原种圃前更换工作服。 3.5 建立档案 建立樱桃无病毒原种保存圃档案。记载品种、砧木的中文名称、外文名称、品系、株系；引进单位、来源、时间，脱毒、病毒检测的单位、时间及每年的观察记录等。 4 无病毒母本圃建立 4.1 无病毒母本圃圃地选择 母本圃地应选择未曾栽植

6、过果树的地块。全圃封闭覆盖300目纱网，与普通果园或苗圃的距离应符合NY/T 328的规定。 4.2 无病毒母本圃设计规划 建圃前按品种采穗圃、砧木采种圃和无性系砧木圃进行区划。设计好排灌系统、道路、建筑物等，并进行土地平整、土壤改良和土壤消毒。 4.3 无病毒母本圃苗木来源 无病毒母本圃所采用的繁殖材料应全部直接来自樱桃无病毒原种保存圃。准确记载品种、砧木、原母株株系；脱毒、病毒检测的单位、时间等。 4.4 无病毒母本圃定植 无病毒品种采穗圃和砧木采种圃株行距为1 m2 m 2 m4 m；无性系砧木圃株行距为0.5 m 1 m2 m3 m。按品种成行栽植，同一品种栽植在一起，定植后绘制定植图

7、，做好标记，不得混杂。每株母本树都要赋予唯一的编号。编号由品种名称、原种圃母株株系编号和本株的编号共同组成。按照编号给每株母本树挂牌。 4.5 无病毒母本圃管理 4.5.1 加强母本圃肥水管理和病虫害防治，保证树势健壮，无早期落叶现象。 4.5.2 无病毒无性系砧木圃的树体，应每年短截更新，其方法与普通无性系砧木母株相同。不允许在母本圃嫁接。 4.5.3 无病毒母本圃常用工具要专用，剪枝剪等修剪工具每株使用前用70%酒精溶液消毒。 DB41/T 8732013 3 5 无病毒苗木繁育 5.1 苗圃建立 5.1.1 苗圃地选择 选择地势平坦，排灌方便，土壤肥沃，壤土、沙壤土质，土壤酸碱度适中，没

8、有栽植过果树及果树苗木的地方。苗圃与普通果园、苗圃的距离应符合GB 5040的规定，或全圃封闭覆盖100目防虫网、与普通果园及苗圃距离应符合GB/T 12943的规定。 5.1.2 苗圃规划和建设 苗圃应划分为若干小区。规划出实生苗播种区、无性系砧木繁殖区、成苗培养区等。按规划设计出各级道路、排灌系统，并统筹安排。平整土地，改良土壤，土壤消毒及增施有机肥。 5.2 实生砧木苗培育 砧木种子应采自无病毒母本圃。采种后标记其母株编号，并即刻沙藏，秋季或早春播种。播种前施用杀菌剂和杀虫剂，进行土壤消毒。播种时按照母株编号分别播种，并绘制各株系分布图，田间插牌标记，不得混杂。其他管理同普通苗圃。 5.

9、3 无性系砧木苗培育 5.3.1 材料来源 无性系砧木繁殖材料，应来自无病毒母本圃。繁殖材料应分别挂牌标记其母株编号，按照品种及母株编号分别繁殖。绘制各品种及株系分布图，田间插牌标记，不得混杂。 5.3.2 繁殖方法 5.3.2.1 压条、分株繁殖法 从无病毒母本圃植株上直接进行压条、分株繁殖的砧木自根苗，在苗圃栽植后再埋干压条繁殖无病毒砧木苗。 5.3.2.2 组织培养法 组织培养方法繁殖砧木苗木，继代次数不超过7代。 5.3.2.3 扦插繁殖法 用绿枝扦插、硬枝扦插等方法繁殖无病毒砧木。 5.4 嫁接 5.4.1 接穗采集 接穗应采自无病毒母本圃。采集接穗的枝条生长健壮、芽体饱满、无落叶、

10、无病害。采集的接穗应在阴凉处立即剪去叶片。按品种扎成捆，挂牌标记母株编号。接穗存放同普通樱桃接穗。 5.4.2 嫁接 应分品种及不同母株分别嫁接。采用带木质部芽接法嫁接，嫁接位置距地面10 cm20 cm处。嫁DB41/T 8732013 4 接后应按品种及母株编号分别记载。补接时，应与原来嫁接的接穗来源相同。 5.5 苗圃管理 加强土肥水管理与病虫害防治，保持苗木健壮生长、无早期落叶现象。 6 病毒检测及监测 6.1 病毒检测方法 6.1.1 木本指示植物检测法 李矮缩病毒、李属坏死环斑病毒、樱桃小果病毒、樱桃绿环斑驳病毒、樱桃坏死锈斑病毒、苹果褪绿叶斑病毒可以采用木本指示植物检测法进行检测

11、，操作步骤参见附录C。 6.1.2 酶联免疫吸附检测法 能获得抗血清的樱桃病毒可以采用A蛋白酶联免疫吸附法（PAS-ELISA）进行检测，操作步骤参见附录D。 6.1.3 反转录-聚合酶链式反应检测法 李矮缩病毒、李属坏死环斑病毒、樱桃小果病毒、樱桃绿环斑驳病毒、樱桃病毒A、樱桃坏死锈斑病毒、苹果褪绿叶斑病毒均可以采用反转录-聚合酶链式反应检测法(RT-PCR)方法进行检测，操作步骤参见附录E。 6.2 无病毒原种的监测 无病毒原种圃的每株树，经常进行田间目测（参见附录F），每年经国家有资质的病毒检测单位进行一次病毒检测，发现携带病毒植株，应连同容器立即清除。 6.3 无病毒母本圃的监测 在生

12、长期，应每月对无病毒母本圃植株的表现症状进行全面的观察（参见附录F），发现异常立即检测。每2年对每株母本树进行一次病毒检测。发现带毒植株立即清除，并进行局部土壤消毒。 6.4 无病毒苗木监测 7.4.1 每年在生长季节对无病毒苗木进行两次全面观察，发现有病毒症状（参见附录F），立即拔除带毒植株及相邻植株。 7.4.2 每年苗木出圃前，应进行1次病毒检测，1抽检，随机取样。若检测出病毒，根据编号进行追溯，对其母本树进行检测。若母本树带毒，应将带毒母本树繁殖的所有苗木及相邻苗木销毁或按普通苗木处理；若母本树不带毒，将携带病毒苗木及相邻苗木销毁，或按普通苗木处理。 7 苗木出圃 7.1 苗木出圃时间

13、 宜在苗木停止生长、叶片开始脱落至翌年春季萌芽前出圃。土壤上冻时不要挖苗。 7.2 苗木检疫 DB41/T 8732013 5 挖苗前，应到县、区植物检疫站进行检疫，并办理检疫证书。 7.3 挖苗 在挖苗前一天把即将落叶的苗木叶片全部抹除（带叶栽植除外）。苗木主要根系要挖齐全，尽量减少根系和苗干受伤。苗木挖好后，应及时分级、扎捆、挂标签和假植。 DB41/T 8732013 6 A 附 录 A （资料性附录） 微茎尖培养法脱毒技术 A.1 早春，从预选的植株上随机切取刚萌动变绿尚未展叶的饱满芽，或35月剪取抽生的嫩茎尖，去叶后作为外植体。 A.2 用洗涤剂水浸3 min后，流水冲洗10 min

14、，转入超净工作台上，70%酒精浸泡6 s，2%次氯酸钠灭菌10 min20 min，无菌水冲洗3次。 A.3 解剖镜放置在超净台上，用棉球蘸消毒酒精擦拭手及台面，点燃酒精灯，将大小镊子灼烧消毒。将铺有无菌滤纸的无菌培养皿放置在解剖镜台上，用镊子取出A.1切取的材料，利用解剖针在解剖镜下剥除其外部叶原基，切取1.0 mm 以下茎尖分生组织(带12片叶原基)，用无菌滤纸吸干水。 A.4 将外植体接种于接种培养基（表A.1、表A.2）上，25 恒温培养，每天光照2000 lx3000 lx 14 h，黑暗10 h，诱导丛生芽。 表A.1 MS培养基配方 单位为毫克/升 类型 成分 浓度 大量元素 硝

15、酸钾 KNO31900 硝酸铵 NH4NO31650 磷酸二氢钾 KH2PO4170 硫酸镁 MgSO47H2O 370 氯化钙 CaCl22H2O 440 铁盐 乙二胺四乙酸二钠 Na2EDTA2H2O 37.3 硫酸亚铁 FeSO47H2O 27.8 微量元素 碘化钾 KI 0.83 硼酸 H3BO36.2 硫酸锰 MnSO44H2O 22.3 硫酸锌 ZnSO47H2O 8.6 钼酸钠 Na2MoO42H2O 0.25 硫酸铜 CuSO45H2O 0.025 氯化钴 CoCl26H2O 0.025 有机成分 肌醇 100 甘氨酸 2 盐酸硫胺素 VB1 0.1 盐酸吡哆醇 VB6 0.5

16、 烟酸 0.5 其他 蔗糖 30000 水解乳蛋白 200 琼脂 6000 注：pH值5.8。 DB41/T 8732013 7 表A.2 樱桃砧木（ZY-1）培养基 单位为毫克/升 种类 基本培养基 BA IBA NAA 接种培养基 MS 0.3 0.1 - 继代培养基 MS 0.4 0.4 - 生根培养基 1/2 MS(大量元素减半) - - 0.5 A.5 丛生芽生长到1 cm3 cm高时，重复A.3，切取0.3 mm 以下茎尖分生组织，接种在接种培养基上进行培养，诱导丛生芽。 A.6 将丛生芽或带12个芽的茎端转入继代培养基上培养，23周后，取苗高2 cm以上的新梢转移到生根培养基上，

17、弱光处理5 d后，转入光下诱导生根。 A.7 将试管苗移栽于温室，成活后检测。 DB41/T 8732013 8 A B 附 录 B （资料性附录） 热处理法脱毒技术 B.1 樱桃品种盆栽苗脱毒 将盆栽苗放入人工气候室，光照强度10000 lx以上，32 起始温度下预培养3 d后，黑暗温度恒定32 ，白昼温度每天增加1 ，达到37 时，保持在白昼37 16 h/d 、黑暗32 8 h/d、湿度60%80%条件下，变温热处理18 d。剪取新梢顶部0.5 cm1.0 cm，嫁接到无病毒砧木上，成活后检测。 B.2 樱桃砧木试管苗脱毒 选择继代培养45代增殖能力强的无性系，热处理方法参见B.1变温处

18、理18 d后，剥取0.4 mm大小茎尖进行组织培养和继代扩繁，并进行检测。 DB41/T 8732013 9 B C 附 录 C （资料性附录） 木本指示植物温室检测法 C.1 早春取无病毒砧木苗，栽植于直径15 cm、高25 cm的花盆中，花盆中的基质经过高温消毒，置于温室内，温室温度白天20 28 ，夜间9 15 。 C.2 9月份或翌年春季砧木发芽期，从待检株上剪取接穗，并对待检株进行编号和记录，写好标牌，绑缚在待检接穗上。 C.3 从指示植物母本树上剪取接穗。 C.4 采用二重芽接法，先把待检接穗的芽片嫁接在砧木基部，每株嫁接1个芽。同时削取指示植物的芽片嫁接在待检芽的上方，两芽相距1

19、.0 cm2.0 cm。每个待检样品重复嫁接4盆5盆，挂好标牌。嫁接后，温室温度控制在18 26 ，同时注意防治害虫和控制萌蘖生长。 C.5 春季苗木发芽前，在指示植物接芽的上方约1.0 cm1.5 cm处剪砧。及时除萌，保证待检芽和指示植物芽萌发，并用摘心的方法控制待检芽的生长。 C.6 从5月中下旬开始至9月末，定期观察指示植物的症状表现，做好观察记录，根据指示植物的症状参照表C.1，鉴定带毒状况。 表C.1 六种樱桃病毒在木本指示植物上的主要症状 病毒种类 指示植物 主要症状 李矮缩病毒 白普贤、GF305、爱尔伯特（Elberta）、shirofugen、kwanzan 树势衰弱，簇叶

20、、叶黄化、花叶、褪绿坏死环斑、叶细长、畸形 李属坏死环斑病毒 白普贤、GF305、shirofugen、kwanzan 坏死叶斑，脱落形成穿孔，流胶，接芽坏死 樱桃小果病毒 拉姆伯特（Lambert)、塞姆（Sam）、凯弥柯斯（cannidex） 叶片边缘微卷，发病叶片在夏末和秋季变为红色或青铜色，果实着色不完全，斑点，个小，畸形 樱桃绿环斑驳病毒 白普贤、shirofugen、kwanzan 叶片黄化、次脉周围暗色斑驳 樱桃坏死锈斑病毒 塞姆（Sam） 褐色坏死叶斑，锈状褪绿叶斑 苹果褪绿叶斑病毒 GF305、爱尔伯特（Elberta） 叶片出现褪绿斑点，叶小，植株矮化，长势弱 DB41/T

21、 8732013 10 C D 附 录 D （资料性附录） 酶联免疫吸附法（ELISA） D.1 溶液配制（均用蒸馏水） D.1.1 包被缓冲液（pH9.6 100 mL） Na2CO30.159g NaHCO3 0.294g D.1.2 提取缓冲液（0.05 mol/L pH 8.2 Tris- HCl缓冲液 100 mL） 0.2 mol/L Tris 25mL 0.1 mol/L HCl 22.5mL 蒸馏水 补足100mL D.1.3 洗涤缓冲液（PBST pH7.4 1000 mL） NaCl NaH2PO412H2O K2HPO4KCl NaN3 Tween-20 D.1.4 抗原

22、提取缓冲液 PBST+2%聚乙烯吡咯烷酮+0.2%卵蛋白(或牛血清蛋白BSA) D.1.5 底物缓冲液（pH5.0 100 mL） 柠檬酸 1.019 g NaH2PO412H2O 8.689 g D.1.6 酶底物 10 mL底物缓冲液+4mg邻苯二胺 D.1.7 终止液（2 mol/L H2SO4100 mL） 36%浓硫酸 11.2 mL D.2 A蛋白酶联免疫吸附法（PAS-ELISA） D.2.1 包被A蛋白：用包被缓冲液稀释A蛋白纯品，检测工作浓度为1 g/mL5 g/mL，酶联反应板每孔100 L，37 保温2 h，倒掉孔中液体后，用PBST洗板34次，每次静置3 min5 mi

23、n。 D.2.2 加第一抗体：用PBST稀释抗体至工作浓度，每孔加100 L，保温和冲洗方法同D.2.1。 8.0 g 2.9 g 0.2 g 0.2 g 0.2 g 0.5 mL DB41/T 8732013 11 D.2.3 加抗原样品，取樱桃嫩叶或一年生休眠枝条内皮层，每克样品加入5 mL抗原提取液，研磨后8000 r/min离心10 min，取上清液，每孔加100 L，每样品2孔，每个微孔板需同时设阳性、阴性和空白对照。4 冰箱过夜，冲洗方法同D.2.1。第一次冲洗液不得溢出。 D.2.4 加第二抗体：用PBST稀释抗体至工作浓度，每孔加100 L，保温和冲洗方法同D.2.1。 D.2

24、.5 加酶标A蛋白：市售辣根过氧化物酶标A蛋白用PBST稀释至工作浓度，每孔加100 L，保温和冲洗方法同D.2.1。 D.2.6 加底物：每孔加100 L，黑暗中室温放置15 min30 min显色。 D.2.7 终止反应：每孔加25 L 2 mol/L H2SO4终止反应。 D.2.8 目测比色后，用酶标光度计测定读数，波长492 nm，OD值大于2倍阴性对照值（即P/N2）可判为阳性。 DB41/T 8732013 12 D E 附 录 E （资料性附录） 反转录-聚合酶链式反应（RT -PCR）检测法 E.1 十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)溶液配制 2% CTAB（W/V），4% P

25、VP（W/V），100 mmolL-1Tris-HCl（pH8.0），25 mmolL-1EDTA（pH8.0），5 molL-1NaCl，混合灭菌121 15 min，灭菌后加入体积分数2%的2-巯基乙醇。 E.2 CTAB法提取总RNA E.2.1 取100 mg200 mg樱桃新鲜嫩叶，研钵中加液氮研磨成粉末状，迅速转入1.5 mL Eppendorf管中，加入600 L的提取缓冲液，混匀，4 ，12000 r/min，离心15 min。 E.2.2 小心吸取上清液，加入等体积的酚：氯仿：异戊醇(25：24：l)溶液，混匀，4 ，12000 r/min，离心15 min。 E.2.3 小

26、心吸取上清液，加入等体积的氯仿：异戊醇(24：l)溶液，混匀，4 ，12000 r/min，离心10 min，重复l次2次，以蛋白层不出现为止。 E.2.4 取水相，加入2.5倍体积的无水乙醇和0.1倍体积的3 mol/L NaAc(pH5.3)，混匀，-20 放置3 h，4 ，12000 r/min，离心15 min。弃去上清液，用70%无水乙醇洗涤，沉淀2次。 E.2.5 室温下干燥5 min后，溶于30L50 L TE或DEPC处理纯水中，-20 或-70 下保存备用。 E.3 反转录合成cDNA E.3.1 DNAaseI消化 为了去除RNA样品中可能存在的基因组污染，向离心管中加入0

27、.5 L1 L RRI（RNA酶抑制剂）、1 L DNAaseI、2 L 10DNAaseI Buffer和16 L RNA，用枪头混匀后37 温浴30 min，75 5 min，离心2 min后置于冰上冷却。1.5%琼脂糖胶检测RNA质量，分光光度计检测RNA浓度。 E.3.2 反转录 取上述RNA 0.1 g5 g、0.2 g/L随机六聚体引物（或特异性引物）1 L，加适量DEPC-dd H2O 至12 L，70 温浴5 min后置于冰上冷却，依次加入20 U/L RNA酶抑制剂1 L、10 mmol/L dNTP 2 L、5反转录缓冲液4 L，25 温浴5 min，加入200 U/L反转

28、录酶1 L，42 温浴1 h，70 10 min，终止反应，离心，-20 保存，即为cDNA模板，稀释8倍后用于PCR扩增。 E.4 PCR扩增 0.2 mL PCR管中依次加入下列成分：cDNA模板2 L，病毒特异性引物及内参基因RPII正反向引物（10 M，引物序列参见表E.1）各1 L，dNTPs（2.5 M）2 L，10PCR buffer 2 L，MgCl2（2.5 mmolL-1）1.6 L，Taq酶（5U L-1）0.2 L，加dd H2O补足20 L体系。按照以下程序进行扩增：94 5 min；94 50 s，60 （可根据引物退火温度作适当调整）50 s，72 1 min，3

29、5个循环；72 10 min；4 保存60 min。 E.5 结果判定 DB41/T 8732013 13 检测时以阳性植株为阳性对照，无病毒组培苗及dd H2O为阴性对照，以内参基因RPII检验实验操作的准确性。采用1.5%琼脂糖电泳分析PCR产物，观察到与阳性对照相同的目的条带的样品为阳性，带毒性；与阴性对照dd H2O一样，未观察到目的条带的样品为阴性，无病毒；与阴性对照无病毒组培苗一样，观察到内参基因RPII条带，但未观察到目的条带的样品为阴性，无病毒。 表E.1 七种病毒及内参基因RT-PCR检测特异性引物序列 病毒种类 引物 引物序列 片段长度 PNRSV PNRSV-F ACGC

30、GCAAAAGTGTCGAAATCTAAA 449 bp PNRSV-R TGGTCCCACTCAGAGCTCAACAAAG PDV PDV-F TAGTGCAGGTTAACCAAAAGGAT 172 bp PDV-R ATGGATGGGATGGATAAAATAGT LChV2 LChV2-F TCCGAATAGTCAGTTCAAAG 337 bp LChV2-R AATAGCCCTCATAAATCTCC CGRMV CGRMV-F CCTCATTCACATAGCTTAGGTTT 958 bp CGRMV-R ACTTTAGCTTCGCCCCGTG CNRSV CNRSV-F TCCCACCT

31、CAAGTCCTAGCAG 584 bp CNRSV-R TGAACTTGGCCAGTTCTGCC ACLSV ACLSV-F TTCATGGAAAGACAGGGGCAA 309 bp ACLSV-R AAGTCTACAGGCTATTTATTATAAGTCTAA CVA CVA-F AGCCAGAAGGTATCATGCCAG 556 bp CVA-R ATGACATGCCTGCTGGGAG 内参基因RPII RPII-F TGAAGCATACACCTATGATGATGAAG 195 bp RPII-R CTTTGACAGCACCAGTAGATTCC DB41/T 8732013 14 E F

32、附 录 F （资料性附录） 病毒病树体表现症状 F.1 李矮缩病毒（Prune dwarf virus, PDV）常见的危害症状 可引起樱桃枝干从上向下干枯，出现簇叶、叶黄化、花叶、叶细长、畸形等，病叶也会产生褪绿坏死环斑，有时与PNRSV的症状相似。 F.2 李属坏死环斑病毒（Prunus necrotic ring spot virus, PNRSV）常见的危害症状 叶片上出现黄绿色至绿色环斑、褪绿斑、坏死斑，环斑内部组织坏死脱落形成穿孔，孔洞边缘退绿并微微突起。有时产生碎叶、带状叶、粗花叶、耳突等。 F.3 樱桃小果病毒（Little cherry virus, LChV）常见的危害症状

33、 典型症状有叶片边缘轻微卷曲，发病叶片在夏末和秋季变为红色或青铜色，侵染果实会使果实不能完全成熟，着色不完全，产生斑点，果实小，畸形，收获时期果实只有正常果实的1/2至1/3大小。受影响的果实呈现暗红色，三角状，口味下降，果实成熟过晚等症状。 F.4 樱桃绿环斑驳病毒（Cherry green ring mottle virus , CGRMV）常见的危害症状 感染酸樱桃导致叶片黄化、次脉周围暗色斑驳等症状，在甜樱桃及其他李属作物上为潜隐性病毒，侵染后通常无症状。 F 5 樱桃病毒A (Cherry virus A, C VA )常见的危害症状 是典型的潜隐性病毒，不能直接从植物器官的为害症状进行识别，与其他病毒混合侵染后会加重危害，严重影响产量，叶片畸形、细长等。 F 6 樱桃坏死锈斑病毒 ( Cherry necrotic rusty mottle virus, CNRMV) 常见的危害症状 叶片出现褐色坏死斑、锈状褪绿斑。 F 7 苹果褪绿叶斑病毒 ( Apple chlorotic leaf spot virus, ACLSV) 常见的危害症状 为潜隐性病毒，被侵染的植株开始无明显症状，2年3年后出现叶片褪绿、砧穗嫁接不亲和、枝条稀疏、生长衰退等症状。夏季环斑处坏死并形成穿孔，叶片支离破碎，直至脱落。某些品种果实缝合线处有裂口，可溶性固形物含量降低，果实品质下降。