GB T 22983-2008 牛奶和奶粉中六种聚醚类抗生素残留量的测定.液相色谱-串联质谱法.pdf

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1、ICS 67050X 04 a亘中华人民共和国国家标准GBT 22983-2008牛奶和奶粉中六种聚醚类抗生素残留量的测定液相色谱一串联质谱法Determination of six polyether antibiotics residuesin milk and milk powder-LC-MS-MS method200812-31发布 2009050 1实施宰瞀髁鬻瓣警雠瞥星发布中国国家标准化管理委员会徼1”刖 昌GBT 22983-2008本标准附录A、附录B为资料性附录。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、

2、中华人民共和国青海出入境检验检疫局。本标准主要起草人：薄海波、曹彦忠、雒丽丽、贾光群、星玉秀、李连通、庞国芳。牛奶和奶粉中六种聚醚类抗生素残留量的测定液相色谱一串联质谱法GBT 22983-20081范围本标准规定了牛奶和奶粉中六种聚醚类抗生素残留量的液相色谱一串联质谱测定方法。本标准适用于液态奶(包括原料奶、纯牛奶、脱脂牛奶)和奶粉(包括纯奶粉、脱脂奶粉和婴幼儿配方奶粉)中拉沙洛菌素(1asalocid)、莫能菌素(monensin)、尼日利亚菌素(nigericin)、盐霉素(salinomycin)、甲基盐霉素(narasin)、马杜霉素铵(madubamycin ammonium)残留

3、量的测定。本标准的方法检出限：牛奶中拉沙洛菌素、莫能菌素、尼日利亚菌素、盐霉素、甲基盐霉素、马杜霉素铵检出限均为02gL；奶粉中拉沙洛菌素、莫能菌素、尼日利亚菌素、盐霉素、甲基盐霉素、马杜霉素铵检出限均为16 pgkg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 63791 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第1部分：总则与定义(GBT 63791 200

4、4，IS0 57251：1994，IDT)GBT 63792测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GBT 637922004，ISO 57252：1994，IDT)GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法(GBT 6682-2008，ISO 3696：1987，MOD)3原理试样中聚醚类抗生素，用乙腈提取，固相萃取柱净化，高效液相色谱一串联质谱仪测定，外标法定量。4试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯。41水：GBT 6682，一级。42乙腈：色谱纯。43甲醇：色谱纯。44正己烷：色谱纯。45乙腈饱和的正己烷：取少量乙腈(42)

5、加入正己烷(44)中，充分混匀。静止分层后，取上层正己烷。46甲酸：优级纯。47乙酸铵：优级纯。48无水硫酸钠：用前在650灼烧4 h，置于干燥器中冷却后备用。49水系流动相：I mL甲酸与0385 g乙酸铵溶于1 000 mL水，混匀。当天配制。410 甲醇溶液(1+1)：100 mL甲醇与100 mL水混合均匀。GBT 22983-2008411拉沙洛菌素(CAS 25999206)、奠能菌素(CAS 22373780)、尼日利亚菌素(CAS 28643803)、盐霉素(CAS 55721318)、甲基盐霉素(cAs 55134139)、马杜霉素铵(CAS 84878615)标准品：纯度大

6、于等于95。412标准储备溶液：准确称取适量的每种标准物质(411)，分别用甲醇(43)配制成浓度为1 mgmL标准储备溶液。储备液贮存在一18冰柜中。413标准工作溶液：吸取100mL标准储备溶液(412)，移人100mL棕色容量瓶，用甲醇定容，该溶液浓度为10 pgmL，贮存在04冰箱中。414 Oasis HLB固相萃取小柱或相当者：3 mL，60 mg。使用前依次用3 mL甲醇和5 mL水活化小柱，保持柱体湿润。415滤膜：02 pm。5仪器和设备51液相色谱一串联质谱联用仪：配有电喷雾离子源(ESI源)。52分析天平：感量01 mg和001 g。53旋涡混匀器。54振荡器。55离心机

7、：最大转速不低于5 000 rrain。56移液器：1 mL。57自动浓缩仪或相当者。58浓缩瓶：50 mL。59固相萃取装置。510氮气吹干仪。6试样制备与保存61试样的制备从全部样品中取出有代表性样品约l kg，充分混匀，均分成两份，分别装入洁净容器内。密封后作为试样，标明标记。在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。62试样的保存将试样于4保存。7测定方法71提取711牛奶样品称取100 g混匀的试样于50 mL聚丙烯离心管中，加无水硫酸钠(48)约10 g和乙腈(42)220 mL，涡旋混匀1 rain，振荡10 min，以3 000 rrain离心3 ra

8、in。合并上清液，加10 mL乙腈饱和的正己烷(45)，涡旋1 rain，弃去正己烷，减压浓缩至近干。用4 mL甲醇溶液(410)溶解残渣，待净化。712奶粉样品称取125 g奶粉于烧杯中，加适量3550水将其溶解，待冷却至室温后，用水定容至100 mL，充分混匀。量取100 g样品溶液于50 mL聚丙烯离心管中，按711步骤提取。72净化将71所得的样品溶液加载到固相萃取柱中，并用2 mL甲醇溶液(410)淋洗浓缩瓶，并人固相萃取柱，依次用5 mL水和3 mL甲醇溶液(410)淋洗柱体，4 mL甲醇(43)洗脱。用氮气吹干仪将洗脱液吹干，用10 mL甲醇溶解，过02 pm滤膜，供液相色谱一串

9、联质谱测定。2GBT 22983-200873基质标准工作溶液的制备称取6份阴性样品各100 g，置于50 mL具塞的聚丙烯管中，分别加入不同体积的六种聚醚类抗生素的标准工作溶液(413)，按61和62步骤操作。制备成浓度为10 ngmL、50 ngmL、100 ngmL、200 ngmL、500 ngmL、i000 ngmL的基质标准工作溶液。74测定条件741液相色谱参考条件液相色谱参考条件如下：a)色谱柱：BEH C18，17 pm，50 mm21 ram(内径)或相当者；b)柱温：40；c)进样量：50 pL；d) 流动相：流动相A：甲醇(43)，流动相B：水系流动相(49)。洗脱程序

10、及流速见表l。表1 流动相梯度程序及流速时间rain 流速(pLrain) A 130 00 250 900 100200 250 700 3002 01 250 90 1002 50 250 90 100742串联质谱参考条件串联质谱参考条件如下：a)离子源：电喷雾离子源；b)扫描方式：正离子扫描；c)检测方式：多反应监测；d) 毛细管电压：28 kV；e)离子源温度：1lo；f)去溶剂气温度：380；g)去溶剂气(氮气)流量：600 Lhh)锥孔气(氮气)流量：50 Lh；i)碰撞气流量：o1 Lh；j)锥孔电压、碰撞能量和驻留时间等质谱参数及母离子和子离子详见表2。表2六种聚醚类抗生素的

11、质谱参数和保留时间保留时间 母离子子离子 子离子碰撞能量 驻留时间 锥孔电压化合物名称 (定量) (定性)(mz) v V(mz) (m2)3771 28拉沙洛菌素 148 6135 3771 50 725953 386756 51莫能菌素 123 693S 6756 50 654793 40尼日利亚 6576 301_76 7427 6576 50 42菌素 4614 25GnT 22983-2008表2(续)保留时间 母离子子离子 子离子碰撞能量 驻留时间 锥孔电压化合物名称 (定量) (定性)(mz) V V(mz) (rez)4313 50盐霉素 155 7736 4313 50 65

12、5315 484313 45甲基盐霉素 185 7876 4313 50 705315 488774 30马杜霉素铵 138 9396 8774 50 388963 3075测定751定性测定样品溶液按照液相色谱一串接质谱分析条件进行测定时，如果检出的质量色谱峰保留时间与基质标准溶液中对应物质的保留时间一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，子离子的相对丰度与浓度接近的、相同条件下所得到的基质标准溶液谱图相比，误差不超过表3规定的范围，则可以判断样品中存在对应的被测物质。表3 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度K K50 20gkg)；c从标准工作曲线上得到的被测组分溶液浓度，单

13、位为纳克每毫升(ngmL)；v样品溶液定容体积，单位为毫升(mL)；m一一样品溶液所代表试样的体积或质量，液态奶样品：单位为升(mL)，奶粉样品：单位为克(g)。计算结果应扣除空白值。GBT 2298320089精密度91般规定本标准的精密度数据是按照GBT 63791和GBT 63792规定确定的，其重复性和再现性的值是以95的可信度来计算。92重复性在重复性试验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r，试样中六种聚醚类抗生素添加浓度范围及重复性方程见表4。表4 六种聚醚类抗生素添加浓度及重复性限和再现性限方程单位为微克每千克化合物名称 样品基质 添加浓度范围 重复性限r 再

14、现性限R牛奶 o24拉沙洛菌索 lg1 0】4 8lgo 523 o lgRo958 4 lgmO585 8奶粉 1632牛奶 024莫能菌素 tg r一1190 3lg0 596 1 lgR=1340 8190 590 2奶粉 1632牛奶 024尼日利亚菌素 190 950 7 lgm一0520 1 lg R一0890 5lgm 0572 8奶粉 1632牛奶 024盐霉察 lg r=0967 9lg0 525 8 lgR=0968 3lg0 952 7奶粉 1_632牛奶 024甲基盐霉索 191 089 9lg0 578 2 lgR=1025 4 lg m_u0 614 0奶粉 163

15、2牛奶 024马杜霉素铵 lg r一1086 0Igm一0647 4 19尺=1052 3 Ig优一0676 5奶粉 1632注：研为两次测定结果的算术平均值。如果两次测定值的差值超过重复性限r，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。93再现性在再现性试验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R，试样中六种聚醚类抗生素添加浓度范围及再现性方程见表4。5GBT 22983-2008附录A(资料性附录)标准物质的多反应监测(MRM)色谱图六种聚醚类抗生素标准物质的多反应监测(MRM)色谱图，见图A1图A6。123 693 567556I 00 2 00 ，min1 23 69

16、35479 32 J图A1 莫能菌素标准物质反应监测(MRM)色谱图1 38 939 6877 361 00 2 00 tm】n图A2马杜霉素铵标准品物质的多1 00 200 tminrain I。LL 1f。613 5759535。LL图A3拉沙洛菌素标准物质的多反应监测(MRM)色谱图tmin100 1 55773 6431 1L100 2 00 trainGBT 22983-20081 oo 2oo fmin图A4盐霉素标准物质的多反应监测(MRM)色谱图图A51oo 2 oo E|rain尼日利亚菌素标准物质的多反应监测(MRM)色谱图185 7876431 47J100 2 00 t

17、minJ1 00 2 00 train图A6 甲基盐霉素标准物质的多反应监测(MRM)色谱图753_51十6r37_7，5T墙iiiiji1厂lJ一0叫GBT 22983-2008附录B(资料性附录)回收率六种聚醚类抗生素在牛奶中添加浓度及其平均回收率的试验数据，见表B1；六种聚醚类抗生素在奶粉中添加浓度及其平均回收率的试验数据，见表B2。表B1 六种聚醚类抗生素在牛奶中添加浓度及其平均回收率的试验数据化合物名称 添加浓度(Fgkg) 平均回收率1 9762 92 3拉沙洛菌素5 95810 87 605 94 02 91 7莫能菌素5 92410 89905 8832 944尼日利亚菌素5

18、97O10 955l 8782 923盐霉素5 85810 97505 8662 917甲基盐霉素5 924lO 8981 8892 948马杜霉素铵5 97010 985GBT 22983-2008表B2六种聚醚类抗生素在奶粉中添加浓度及其平均回收率的试验数据化合物名称 添加浓度(pgkg) 平均回收率2 8764 923拉沙洛菌素10 85820 95 S1 86o2 9l 7莫能菌素5 92410 89 9l 8832 944尼日利亚菌素5 97o10 8752 87 64 92 3盐霉素10 85820 9551 85o2 917甲基盐霉素5 92410 8992 88 34 944马杜霉素铵10 97 o20 8759