GB 14923-2001 实验动物 哺乳类实验动物的遗传质量控制.pdf

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1、GB 14923 2001 前言本标准由1994年发布的国家标准GB14923-1994实验动物哺乳类动物的遗传质量控制修订而成。修订巾，主要是依据国际小鼠遗传标准命名委员会1996年发布的近交系小鼠命名规则，对原标准中遗传分类及命名原则部分内容进行了增减：删去了原标准中关于近交系支系部分的内容，增加了重组同类系的内容，与国际上最新版本的权威文件一致。另外，考虑到转基因动物的培育及使用在实验动物及相关领域日益广泛，目前还没有个国际上的权威机构制定发布相关标准及文件，美国国家研究委员会组织权威专家成t了转基因动物标准命名委员会，并于1992年制定发布了转基因动物标准命名的文件，在美国和各发达国家

2、普遍接受和执行这一文件中的主要原则。本次修订中等效采用美国1992年发布的转基因动物标准命名规则，增加了有关转基因动物分类及命名的内容。本标准与GB/T14927. l 2001实验动物近交系小鼠、大鼠生化标记检测法），GB/T14927. 2 2001实验动物近交系小鼠、大鼠皮肤移植法共同组成实验动物遗传质量控制标准系列，前者为质量标准，后者属具体检测方法。本标准附录A、附录B都是标准的附录。本标准自实施日起代替GB14923 1994。本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口。本标准起草单位：中国实验动物学会。本标准主要起草人：邢瑞昌、刘农、李善如、徐平、自琴华。本标准于1994年1月酋

3、次发布。13 中华人民共和国国家标准实验动物GB 14923 2001 哺乳类实验动物的遗传质量控制代替c;B4923!9!l1 1 范围L：巾。rahry animal Genetic quality control of mammalian laboratory animals 斗飞机、准炖Ii!J哺乳类实验动物的遗传分类及命名原则、繁殖交配方法和近交系动物的遗传质量标叶1乍f,J；、ji活lrJJ哺乳类实验功物的遗传分类、命名、繁殖及近交系小鼠、大鼠的遗传纯度检测。2 实验动物的遗传分类及命名十I,t!i JJll IU特点的小时，实验动物分为近交系、封闭群和杂交群。2. 1 iii交系

4、in bred叫rain? . 1 1 定义i交系。fi-.斗、少连续20代的全同胞兄妹交配培育而成，品系内所有个体都可追溯到起源于第20代必lJ.代败的对共同祖先。t注ii-k21l代以l亲代与子代交配与全阿胞兄妹交配有等同效果。ill交系的近交系数（inbreedingcoefficient）应大于99%。2 1. 2 命名1日交系般以大写英文字母命名，1)；、可以用大写英文字母加阿拉伯数字命名，符号应尽量简短。如气J；二、I.I系等。2. 1. 3 近交代数泛支系的近交代数ltl大汀英文宁母F表示。例如当一个近交系的近交代数为87代时，写成F87).2-1-4 IE系川l附train2.

5、1.4.1 业系的Il!Ji; ii交系的业系分化是指个近交系内各个分支的动物之间，已经发现或十分可能存在遗传差异。通山卡）种怕况会发刊亚系分化。川h兄妹交问cit数达4（代以前形成的分支（即分支发生于20到F40之间hh ) 个计宜与Jt（也分支分开繁殖超过100代，L. l,Z 1w. 个分支；与其他分支存在遗传差异。产生这种差异的原因可能是残留杂合、突变或遗传; j i朵（旷11飞II1ft1数t予以l可分。例如l：山BAI.13/c与C57BL两个近交系杂交育成的一组重组近交系，分别命名为CXl3!,CXB2对常用近交系小鼠的缩写名称规定如下：近交系C57Bl,/6 BAl.B/c D

6、BA/2 C3H CBA 川军纽扣类系的命名缩写名称B6 c D2 C3 CB 出两个亲ft近交系的缩写名称中！同细小写英文字母c命名，用其中做回交的亲代近交系（称受体近交系）在前供体近交系在后。由相同双亲育成的一组重组同类系阿拉伯数字予以区分。如CcS！，表示由以BA!Jl/c(C）为亲代受体近交系，以STS(S）品系为供体近交系，经2代回交育成的编号为1的重组同类系。2. 1. 6 问源突变近交系coisogenic inbred strain 2.1.6.1 定义司源突变近交系：两个近交系，除了在个指明位点等位基因不同外，其他遗传基因全部相同，简称同仿、突变系。f ;J源突变系般皆由近交

7、系发牛基因突变而形成。2.1.6.2 命名山发生突变的近交系名称后加突变基因符号（用英文斜体印刷体）组成，二者之间以连接号分开，如J,Illl1/fla I！。当突变基因必须以杂合子形式保持时，用“十”号代表野生型基因，如，A/Fa十Ic 2.1.7 l;JiJ.I(导人近交系同类近交系）congenic inbred strain 15 GB 14923 2001 2.1.7.1定义同源导人近交系：通过杂交互交（crossintercross）或回交（backcross）等方式将一个基因导入到近交系中，由此形成的一个新的近交系与原来的近交系只是在一个很小的染色体片段上的基因不同，称为同源导人

8、近交系（同类近交系），简称同源导人系（同类系）。2.1.7.2 命名同源导人系名称由以下三部分组成za ）接受导人基因的近交系名称；bl提供导人基因的近交系的缩写名称，并与a项之间用英文句号分开；c）导人基因的符号（用英文斜体），与b项之间以连字符分开。例如，！）0.129-l!-12h表示该同源导人近交系的遗传背景为C57Bl,/1Csn(BIO），导人BIO的基因为H一12/J，基因提供者为129/ J近交系。2. 1. 8 转基因动物transgenic animals 2.1.s.1 定义转基因动物通过实验手段将新的遗传物质导入到动物胚细胞中，并能稳定遗传，由此获得的动物称为转基因动物

9、。2.1.s.2 转基因动物命名：转基因的命名遵循以下原则z符号：一个转基因符号由以下三部分组成，均以罗马字体表示TgX (YYYYYYJtt tt tt tt tt Zzz, 其中各部分符号表示含意为TgX方式（mode)(YYYYYY）二插入片段标示（insertdesignation) 拌实验室指定序号（laboratoryassigned number）及Zzz实验室注册代号（laboratorycode) 以t各部分具体含意及表示如下：a ）方式转基因符号通常冠以Tg字头，代表转基因（transgene）。随后的一个字母Xl表示DNA插入的方式：H代表同源重组，R代表经过逆转录病毒载

10、体感染的插人，N代表非同源插人。bl插入片段标示插入片段标示是由研究者确定的表明插入基因显著特征的符号。通常由放在圆括号内的字符组成：可以是字母（大写或小写），也可由字母与数字组合而成，不用斜体字，上、下标、空格及标点等符号。研究者在确定插入标示时，应注意以下几点：标示应简短，一般不超过六个字符。如果插人序列源于已经命名的基因，应尽量在插入标示中使用基因的标准命名或缩写，但基因符号中的连字符应省去。确定插人片段指示时，推荐使用一些标准的命名缩写，目前包括：An 匿名序列Ge 基因组lm 插入突变Ne 非编码序列Rp 报告基因Sn 合成序列1 Ii GB 14923 2001 Et 增强f捕获装

11、宵i启动子捕获装置插人片断中小司、只表示插人的序Jlij，并不表明其插入的位置或表型。川实验室指定序号及实验室注册代号实验雪在指定序号是由实验室对已成功的转基因系给予的特定编号，最多不超过5位数字。而且，插入片断标凉的字符与实验室指定序号的数字位数之和不能超过110 实验京注册代号是对从事转基因动物研究生产的实验室给予的特定符号。拳例：t:57llL/6J lgN氏、Dsc;e)23J wg 源于美国杰克逊研究所（J）的C57Bl,/6品系小鼠被转入人的CD8基因组（Ge）；转基因在Jonw, c;ordon (Jwg）实验室完成获取于一系列显微注射后得到的序号为23的小鼠。fgN(GPDHl

12、n1) 1 llir 以人的甘油磷酸脱氢酶基因cc;pfJH）插入CC57BL/6JX SJI,/J) Fl代雌鼠的受精卵中，并引起插入突变CIm），这是EdwardH. llirkenmeier (Bir）实验室命名的第一只转基因小鼠。根据转基因动物命名的原则，如果转基因动物的遗传背景是由不同的近交系或远交群之间混合而成时，则该转基因符号应不使用动物品系或种群的名称。转基因符号的缩写转基因符号可以缩写，即去掉插入片断标示部分，例如TgN(GPDHlm)lBir可缩写为rgNI Bir。一般在文章中第次出现时使用全称，以后再出现时可使用缩写名称。2.2 封闭群（远交群）closed colon

13、y or outbred stock 2.2. 1 定义封闭群以非近亲交配方式进行繁殖生产的一个实验动物种群，在不从其外部引人新个体的条件F，至少连续繁殖4代以上封闭群亦称远交群。2.2.2 命名封闭群由24个大写英文字母命名，种群名称前标明保持者的英文缩写名称，第一个字母须大写，后面的字母小！￥.般不超过4个字母。保持者与种群名称之间用冒号分开。例如l,N,NIH表示由美国国立卫生研究院（N）保持的NIH封闭群小鼠。Lac, L;C A表示由英国实验动物中心（Lac）保持的I.ACA封闭群小鼠。某些命名较早，又f为人知的封闭群动物，名称与上述规则不一致时，仍可沿用其原来的名称。如Wistar

14、大鼠封闭群，日本的ddy封闭群小鼠等。把保持窑的缩写名称放在种群名称的前面，而二者之间用冒号分开，是封闭群动物与近交系命名中展显著的区别。除此之外，近交系命名中的规则及符号也适用于封闭群动物的命名。2, 3 杂交群hybrids 2, 3, 1 定义杂交群：由不同品系或种群之间杂交产生的后代。2. 3.2 命名杂交群1市按以下方式命名：此雌性亲代名称在前，雄性亲代名称居后，二者之间以大写英文字母”X”相连表示杂交。将以t部分用括号括起，再在其后标明杂交的代数（如Fl、FZ等。l.j品系戎种群的名称可使用通用的缩写名称。例如：（57日L/6X DBA/2 )Fl B6D2Fl (NMRI X l

15、./1.C: )F2 3 实验动物的繁殖方法11! f近交系与封闭群动物具有不同的遗传特点，因此应分别选择相应的繁殖方法。17 GB 14923 2001 3. 1 近交系动物的繁殖方法选拌近交系动物繁殖方法的原则是保持近交系动物的同基因性及其基因纯合性。3.1.1 51种作为繁硝用！泉种的近交系动物必须遗传背景明确，来源清楚，有较完整的资料（包括品系名称、近交代数、遗传基因特点及主要生物学特征等）。号种动物应来自近交系的基础群（foundationstock ）。3. 1. 2 近交系动物的繁殖可分为基础群（foundationstock）、血缘扩大群（pedigreeexpansion s

16、tock）和l户群（productionstock）。当近交系动物生产供应数量不是很大时，一般不设血缘扩大群仪设基础群和lLF群。3.1.2.1 1击础群设基础群的目的，一是保持近交系自身的传代繁衍，二是为扩大繁殖提供种动物。川基础群严格以全同胞兄妹交配方式进行繁殖。bl基础群f1if_设动物个体记录卡（包括品系名称、近交代数、动物编号、出生日期、双亲编号、离乳H朗、交配日期、生育记录等）和繁殖系谱。c）基础群（包括血缘扩大群）动物不超过57代都应能追溯到一对共同祖先。3.1.2.2 血缘扩大群血缘扩大群的种动物来自基础群。al血缘扩大群以全同胞兄妹交配方式进行繁殖OM血缘扩大群动物应设个体繁

17、殖记录卡。）血缘扩大群动物不超过57代都应能追溯到其在基础群的一对共同祖先。3.1.2.3 生产群设生产群的目的是生产供应实验用近交系动物生产群种动物来自基础群或血缘扩大群。川生产群动物一般以随机交配方式进行繁殖；bl牛产群动物应设繁殖记录卡；cl生产群动物随机交配繁殖代数一般不应超过4代。3. 2 封闭群动物的繁殖方法选择封闭群动物繁殖方法的原则是尽量保持封闭群的动物的基因异质性及多态性，避免近交系数随繁值代数增加而过快上升。3. 2. 1 引种作为繁殖用原种的封闭群动物必须遗传背景明确，来源清楚，有较完整的资料（包括种群名称、来源、遗传基因特点及主要生物学特性等）。为保持封闭群动物的遗传异

18、质性及基因多态性，寻种动物数量要足够多，小型啃齿类封闭群动物JI种数叫般不能少于25对。3. 2. 2 繁殖为保持封闭群动物的遗传基因的稳定，封闭群应足够大，并尽量避免近亲交配。根据封闭群的大小，选用循环交配法等方法进行繁殖。具体方法如附录A（标准的附录）。4 近交系动物的遗传质量监测4. 1 近交系动物的遗传质量标准近交系动物必须符合以下要求4. 1. 1 具有明确的品系背景资料，包括品系名称、近交代数、遗传组成、主要生物学特性等，并能充分点即j新培育的或引种的近交系动物符合近交系定义的规定。4. 1. 2 用于近交系保种及生产的繁殖系谱及记录卡应清楚完整，繁殖方法科学合理。4. 1. 3

19、经遗传检测（生化标记基因检测法，皮肤移植法，免疫标记基因检测法等）质量合格。I 8 GB 14923- 2001 4. 2 近交系小鼠、大鼠遗传检测方法反实施4. 2. 1 i二化书J、ic0基因检视biochcrnical markers 半方法是近交系4力物遗传纯度常规检测中的常规方法。4.2.1.1 抽样1、tJi!;础tt丰凡在于代留在种鼠的双亲动物都应进行检测。-t L户l干，践表l要求从每个近交系中随机抽取成年动物，雌雄各半。表1生产群中雌性种鼠数量抽样数目100只以F6只I 00 I 以I二当6%4.2.1.2 !_ft标记基因的选择及常用近交系动物的生化遗传概貌近交系小鼠选择位

20、于10个染色体上的13个生化位点，近交系大鼠选择9个生化位点作为遗传检测的生化标i已。以上生化标记基因的名称及常用近交系动物的生化标记遗传概貌见附录BC标准的附, ） 4-2-1-3 结果判断，见表Zo表2检测结果判断处理j际1#.边传慨貌，全致未发现遗传变异，遗传质量合格!1 t-（！点的机记基肉与标准遗传增加检测位点数目和增加检测方法情貌小致可疑后重梭，确实只再一个岳、记基因改变可命名为同源突变革间？或两个以位点的标记基因与标准遗传慨貌不致不合格淘汰，重新引种4.2.2 皮肤移植法skin grafting i吐个品系随机抽取至少4只相同性别的成年动物，进行同系异体皮肤移植。移植全部成功者

21、为台恪发生11于本原因引起的移植物的排斥判为不合格。4. 3 徐以上两种方法外，还可选用其他方法对近交系动物进行遗传质量检测，如毛色基因测试（coatcolor gene testing）、免疫标记基因检测（immunogeneticmarkers）、下颁骨测量法（口1andiblemeasure n1tn川、染色体标记检测（cytogenetictechniques）、DNA多态性检测法（DNAmarkers）等。4-4 检测时间问隔i丘交系动物牛产群每年至少进行一次遗传质量检测。19 GB 14923 2001 附录A（标准的附录）实验动物封闭群的繁殖方法A1 基本要求保持封闭群条件、无选

22、择、以非近亲交配方式进行繁殖，每代近交系数上升不超过百分之, A2 方法的选择封闭群的种群大小、选种方法及交配方法是影响封闭群的繁殖过程中近交系数上升的主要因素，；节根据种群的大小，选择适宜的繁殖交配方法。A2. 1 当封闭群巾每代交配的雄种动物数目为1025只时，一般采用最佳避免近交法，也可采用循环交配法。A2. 2 1与封闭群中每代交配的雄种动物数目为26100只时，一般采用循环交配法，也口I采用最佳避免近交讼。A2. 3 当封闭群中每代交配的雄种动物数目多于100只时，般采用随选交配法也可采用循环交配法。A3 交配方法A3. 1 最佳避免近交法maximum avoidance of i

23、nbreeding system A3. 1. 1 留种每只雄种动物和每只雌种动物，分别从子代各留一只雄性动物和雌性动物，作为繁殖下代的种动物。A3. 1. 2 交配功物交配时尽量使亲缘关系较近的动物不配对繁殖，编排方法尽量简单易行。 ）对某些动物品种，如小鼠，大鼠等，生殖周期较短，易于集中安排交配，可按下述方法编排配对进行繁销：假设一个封闭群有16对种动物，分别标以笼号l、2、3、16，设，z为繁殖代数（为自1开始的自然数）0 n代所生动物与n十1代交配编排见表Al,表Al最佳避免近交法的交配编排n f I代笼号帷种来自n代笼号雄种来自n代笼号I I 2 2 3 4 3 5 6 . . 8

24、15 16 9 2 10 4 3 16 16 I 5 20 GB 14923 2001 bl某些4!J物品种如狗、猫、家兔等，生殖周期较长，难于按上述方式编排交配。只要保持种群规模不低于10只雄种，20只雌种的水平，留种时每只雌、雄种各留只子代雌、雄动物作种，交配时尽量避免近来交配，则口I以把繁殖中每代近交系数的上升控制在较低的程度。A3. 2循环交配法rotational mating systen1 A3. 2. 1 应用范围循环交配法r泛适用于中等规模以上的实验动物封闭群。其优点一是可以避免近亲交自己，二是可以保证种动物对整个封闭群有比较广泛的代表性。A3. 2. 2 实施办法a）将封闭

25、群划分成若干个组，每组包含有多个繁殖单位（一雄雌单位，一雄二雌单位，一雄多雌单位等）。b）安排各组之间以系统方法进行交配。举例说明如下例I封闭群每代有48笼繁殖用种动物（一雄种一雌种，或一雄种多雌种）。先将其分成8个组，每组在6笼。各组内随机选留定数量的种动物，然后在各组之间按表2中的排列方法进行交配。表AZ循环交配法组阁交配编排新组编号雄种动物原组编号1 2 3 3 5 4 7 5 2 6 4 7 6 一干一一一一8 8 A3. 3 随选交自己法chance mating system A3. 3. 1 应用范围帷种动物原组编号2 4 6 8 1 3 5 7 、吁封闭群的动物数量非常多（繁殖

26、种动物在100个繁殖单位以上），不易用循环交配法进行繁殖时，iJ rll随远交配法。A3. 3. 2 实施办法从整个种群中随机选取种动物，然后任选雌雄种动物交配繁殖。附录B（标准的附录常用近交系小鼠、大鼠的生化标记基因B1 常用近交系小鼠的生化标记基因见去ll1 21 GB 14923 2001 表Bl常用近交系小鼠的生化标记基因牛化标记主要近交系小鼠的标记基因生化优点染色体中文名称A AKR C3H/He C57BL/6 CBA/N Aktd 1 碱性磷酸酶1h b h a CurZ 3 碳酸西干酶2b a b a a 晶一(rZ 17 过氧化氢酶2a b b a Es1 8 醋酶1b b

27、b a b t;_,3 11 酣酶3 c a t二E.dO 14 醋酶10a b b a b b户dl 4 葡萄糖6磷酸脱氧酶1b b b a b （，户il7 葡萄糖磷酸异构酶1a a b h b 一Hhh 7 血红蛋白R链d d d /did 1 异拧橡酸脱氢酶Ia b a a h Mod! 9 苹果酸酶l a b a b I 5 磷酸葡萄糖变位酶la a b a b r, I 9 转铁蛋白b b b h a 生化标记主要近交l小鼠的标记基因生化位点染色体中文名称BALB/c DBA/1 DBA/2 TAJ f A2 615 A是11 碱性磷酸酶lb a a b b a 一嘲t、“r23

28、碳酸酣酶2b a b b a a (2 17 过氧化氢酶2a b b a b 直sl8 酶酶1b b b a b b El l l 酶酶3a c a c c 1;, l 0 14 酶酶10a b b b a a （，户d14 葡萄糖6磷酸脱氧酶1b a b b b （，户il 7 葡萄糖磷酸异构酶la a a a b /-/ hlr 7 血红蛋白白链d d d d t九ldh1 异拧糠酸脱氢酶la b b a a a 几fd19 苹果酸酶1a a a a b b r,1 口磷酸葡萄糖变位酶1a b a b 丁，f9 转铁蛋白b b b b b 22 GB 14923 2001 B2 常用近交系大鼠的生化标记基因见衷ll2表82常用近交系大鼠的生化衍记基因生化标记主要近交系大鼠的标记基因生七位点中文名称AC! F344 LEW/M LOU/C SHR WKY 1是户1碱性磷酸酶1b a a a a b l.d 过氧化氢酶a a a a b b l.d 酶酶lb a a a a a 一一E.3 醋酶3a a d a b 、1自由酶4b b b b a b ;_,G 醋酶6b a a b a a E.8 自旨酶8b b b b b a E.9 醋酶9a a c a a E.dll 酣酶I 0 a a b a a b 23