GB T 21324-2007 食用动物肌肉和肝脏中苯并咪唑类药物残留量检测方法.pdf
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1、ICS 67120X 04 鳕雪中华人民共和国国家标准GBT 2 1 3242007食用动物肌肉和肝脏中苯并咪唑类药物残留量检测方法Method for the determination of benzimidazoles residuesin edible animal muscle and liver2007-10一29发布 200804-01实施丰瞀嬲鬻瓣警辫瞥星发布中国国家标准化管理委员会仪1”刖 置GBT 2 1 3242007本标准的附录A、附录B、附录c、附录D均为资料眭附录。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国广东出入境检验
2、检疫局、中国检验检疫科学研究院。本标准主要起草人:林峰、林海丹、吴映璇、张美金、谢守新、彭涛、李晓娟、邵琳智、邱月明。食用动物肌肉和肝脏中苯并咪唑类药物残留量检测方法GBT 2 1 32420071 范围本标准规定了食用动物肌肉和肝脏中苯并咪唑类药物和代谢物残留量的液相色谱一串联质谱检测方法和液相色谱检测方法。本标准适用于液相色谱法和液相色谱一串联质谱法测定鸡肉、牛肉、猪肉、鸡肝、牛肝、猪肝中奥芬达唑、芬苯达唑及它们的代谢物奥芬达唑砜,阿苯达唑及其代谢物阿苯达唑一2一氨基砜、阿苯达唑亚砜和阿苯达唑砜,甲苯咪唑及其代谢物氨基甲苯咪唑和羟基甲苯咪唑,氟苯眯唑及其代谢物2一氨基氟苯咪唑,噻苯咪唑及其
3、代谢物5一羟基噻苯咪唑,噻苯咪唑酯残留量。适用于液相色谱一串联质谱法测定鸡肉、牛肉、猪肉、鸡肝、牛肝、猪肝中丙氧苯眯唑残留量。适用于液相色谱法测定鸡肉,牛肉、猪肉、鸡肝、牛肝中丙氧苯咪唑残留量。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注FJ期的引用文件,其最薪版本适用于本标准。GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法(GBT 6682 1992,neq tSO 3696:J_987)3方法提要试样在碱性条
4、件下以乙酸乙酯提取、离心、浓缩后残渣以乙腈一01 molL盐酸溶解,正己烷脱脂,经固相萃取柱净化,液相色谱一串联质谱仪或高效液相色谱仪测定,外标峰面积法定量。4试剂和材料除另有说明外,所用试剂均为分析纯,水为GBT 6682规定的一级水。41乙酸乙酯。42正己烷。4。3甲醇:液相色谱级。44乙腈:液相色谱级。45无水硫酸钠:经650。C灼烧4 h,置于干燥器内备用。46 BHT(2,6-二叔丁基对甲酚)。47盐酸。48氢氧化钾。49 25氨水。410甲酸:优级纯。411乙酸胺。412 lBHT溶液:称取10 g BHT,乙酸乙酯溶解并稀释至t00 mL,临用前配制。413 01 molL盐酸:
5、量取浓盐酸83 mL,加水稀释至1 000mL。414 0005 molL甲酸:准确吸取188“L甲酸,加水稀释至1 000 mL。】GBT 2 1 324-2007415 50氢氧化钾溶液:50 g氢氧化钾溶解于100 mL水中,冷却至室温后待用。416 i0氨乙腈溶液:量取10 mL 25氨水,乙腈稀释至100 mL,临用前配制。417 0025 molL乙酸铵:193 g乙酸铵溶解于1 000 mL水中。418标准品:奥芬达唑(oxfendazole,CAS号5371650-0)、芬苯达唑(fenbendazole,CAS号43210679)、奥芬达唑砜(oxfendazole sulf
6、one,CAS号54029208)、阿苯达唑(albendazole,CAS号54965218)、阿苯达唑一2一氨基砜(albendazole一2-aminosulfone,CAS号80983342)、阿苯达唑亚砜(albendazole sulfoxide,CAS号54029128)、阿苯达唑砜(albendazole sulfone,CAS号75184713)、甲苯咪唑(mebendazole,CAS号14798000)、氨基甲苯咪唑(mebendazole-amine,CAS号52329 609)、羟基甲苯咪唑(5一hydroxymebendazole,CAS号60254957)、氟苯咪
7、唑(ftubendazole,CAS号13678000)、2氨基氟苯咪唑(2-aminoflubendazole)、噻苯眯唑(thiabendazole,CAS号148798)、噻苯咪唑酯(cambendazole,CAS号26097803)、丙氧苯咪唑(oxibendazole,CAS号20559551)标准品,含量均在98以上,5羟基噻苯咪唑(thiabendazole一5-hydroxy,CAS号1 7450500)标准溶液浓度为10 mgL。419标准储备液准确称取奥芬达唑、芬苯达唑、奥芬达唑砜、阿苯达唑、阿苯达唑一2一氨基砜、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜、甲苯咪唑、氨基甲苯咪唑、羟基甲苯
8、眯唑、氟苯咪唑、2一氨基氟苯咪唑、噻苯咪唑、噻苯咪唑酯、丙氧苯眯唑标准品各100 mg,分别用甲醇溶解并定容至100 mL,配成标准储备溶液,浓度为100-gmL。420混合标准工作溶液根据需要,用乙腈一水(2十8,体积比)将标准储备液(419)及5一羟基噻苯眯唑标准溶液配成供液相色谱测定用的浓度为0、25o、50o、100、200、250 t-gL的混合标准工作溶液,供液相色谱一串联质谱测定用的浓度为o、200、500、100、20o、400 ttgL的混合标准工作溶液。混合标准工作溶液使用前配制。421固相萃取柱:MCX固相萃取柱或相当者,150 mg,6 mL。使用前依次用5 mL甲醇活
9、化、5 mL01 molL盐酸平衡。422滤膜:020 pm,045 pm,有机相。5仪器51液相色谱一串联质谱仪:配有电喷雾离子源。52液相色谱仪:配有紫外检测器或二极管阵列检测器,53均质器。54涡旋振荡器。55离心机:转速大于或等于4 000 rrain。56减压旋转蒸发仪。57超声波水浴。58分析天平:感量01 mg,001 g。6制样方法制样操作过程中应防止样品受到污染或残留物含量发生变化。从所取全部样品中取出有代表性样品可食部分约500 g,用组织捣碎机充分捣碎均匀,装入洁净容器中,密封,并标明标记,于一18。C以下冷冻存放。7分析步骤71提取称取5 g样品(准确至001 g),于
10、50mL离心管中,加入20mL乙酸乙酯、015mL 50氢氧化钾(415)溶液和1 mL 1BHT溶液(412)置超声波水浴中振荡5 rain,加入1 g无水硫酸钠,均质器上2GIlT 2 13242007以14 000 rmin速度匀质提取30 s,4 000 rmin离心5 min,清液转移至100 mL梨形瓶中;另取一离心管,加入20 mL乙酸乙酯、015 mL 50氢氧化钾溶液和1 mL 1BHT溶液洗涤均质器刀头;用玻棒捣碎离心管中的沉淀,加入上述洗涤均质器刀头的碱性乙酸乙酯溶液,在涡旋振荡器上振荡2 min,置超声波水浴中振荡5 min,4 000 rrain离心5 min,清液合
11、并至100 mL梨形瓶中,38减压旋转蒸发至干。72净化上述残渣立即用15 mL乙腈溶解,涡旋混匀,超声5 min,加入15 mL 01 molL盐酸,涡旋混匀,转移到15 mL离心管,加5 mL正己烷洗涤梨形瓶,合并转移到离心管中,涡旋混匀,4 000 rmin离心5 min,弃上层正己烷层,加入3 mL正己烷重复操作一次。脱脂后的样液加入3 mL 01 molL盐酸,涡旋混匀,注人已处理的MCX固相萃取柱(421),依次用5mL 01molL盐酸、5mL甲醇淋洗,15 mLl0氨乙腈溶液(41 6)洗脱,洗脱液38C减压旋转蒸发至干,残渣加入05 mL乙腈,置超声波水浴中振荡5 min,加
12、入15 mI,0025 molL乙酸铵(417),涡旋混匀,过045 gm滤膜,供液相色谱测定。当采用液相色谱一串联质谱法测定时,吸取100 pL液相色谱测定用样液,加入900 pL乙腈一水(2+8,体积比)混匀后过02 btrn滤膜,供液相色谱一串联质谱测定。8测定8,1液相色谱一串联质谱法811液相色谱条件8111色谱拄:C。$柱,50 mmN 21 mm(内径),18”m,或性能相当者。8112流动相:乙腈十0005 molL甲酸,梯度洗脱;乙腈:1580(4 min内线性增加),80V00保持05 rain,8015(001 rain内线性递减),15保持35 min。8113流速:0
13、35 mLmin。81,14柱温:60。8115进样量:5“L。8,12质谱条件81,21离子化模式:电喷雾电离正离子模式(ESI+);质谱扫描方式:多反应监测(MRM);分辨率:单位分辨率;其他参考质谱条件见附录A。8122雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气或其他合适气体,使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求。8,123喷雾电压、去集簇电压、碰撞能等电压值应优化至最佳灵敏度。8124各种苯并咪唑类药物和代谢物的定性离子对、定量离子对及相关质谱参数参见附录A。813液相色谱一串联质谱测定8131定性测定每种被测物质选择1个母离子。2个以上子离子,在相同实验条件下,样品中
14、待测物的保留时间与标准溶液相比在土25的允许偏差之内;待测物的定性离子对的重构离子色谱峰的信噪比大于或等于3(SN3),定量离子对的重构离子色谱峰的信噪比大于或等于10(SN10);定性离子对的相对丰度与浓度相当的标准溶液相比,相对丰度偏差不超过表1的规定,则可判断样品中存在相应的目标化合物。表1 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度 50 2050 lo20 10允许的最大偏差 土20 土2j 土30 5038132定量测定用苯并咪唑混合标准工作溶液(420)分别进样,以峰面积为纵坐标,工作溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线,用标准工作曲线对样品进行定量,样品溶液中苯并眯唑类药物和
15、代谢物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下,各种苯并咪唑类药物和代谢物的参考保留时间见附录A,标准溶液的液相色谱一串联质谱定量离子重构离子质量色谱图参见附录B。82液相色谱法821液相色谱条件8211色谱柱:C。8柱,250 mm46 ram(内径),5Lm,或性能相当者。8212流动相:乙腈+O025mo|L乙酸铵,梯度洗脱;乙腈:2055(30rain内线性增加),55保持2 rain,5520(o1 min内线性递减),20保持8 min。8213流速:10 mLmin。8214检测波长:292 nm。8215柱温:35。8216进样量:40 pL。822液相色谱测定82
16、21定性测定在相同实验条件下,样品中待测物的保留时间与标准溶液相比在土25的允许偏差之内。8222定量测定用苯并咪唑混合标准工作溶液(420)分别进样,以峰面积为纵坐标,工作溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线,用标准工作曲线对样品进行定量,样品溶液中苯并眯唑类药物和代谢物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下,各种苯并咪唑类药物和代谢物的参考保留时间见附录A,标准溶液的液相色谱图参见附录C。9空白试验除不加试样外,均按上述测定步骤进行。10结果计算与表述结果按式(1)计算,计算结果需扣除空白值。xc筹揣uu(1) m 1 U式中:x试样中待测药物残留量,单位为微克每千克(-gkg)
17、;c从标准工作曲线得到的待测药物溶液浓度,单位为纳克每毫升(ngmL);v样品溶液最终定容体积,单位为毫升(mL);m样品溶液所代表最终试样的质量,单位为克(g)。11测定低限与回收率111测定低限本标准液相色谱法和液相色谱一串联质谱法的测定低限(LOQ):奥芬达唑、芬苯达唑、奥芬达唑砜、阿苯达唑、阿苯达唑一2一氨基砜、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜、甲苯咪唑、氨基甲苯咪唑、羟基甲苯咪唑、氟苯咪唑、2一氨基氟苯眯唑、噻苯咪唑、5一羟基噻苯咪唑、噻苯咪唑酯、丙氧苯眯唑均为0OlO mgkg。112回收率参见表D1表D6。附录A(资料性附录)16种苯并咪唑类药物和代谢物的色谱保留时间、质谱参数GBT 2
18、1324-2007表A1 16种苯并咪唑类药物和代谢物的色谱保留时间、质谱参数色谱保留时间()min定性 定量离子对 去簇电压 碰撞能组分名称 液相色谱离子对(mz) (mz) V V 液相色谱法串联质谱法316159 55奥芬达唑 316159 38 25 134316191 35300159 50芬苯达唑 300268 37 39 293300268 35332159 60奥芬达唑砜 332159 31 29 180332300 35266191 50阿苯达唑 266234 32 35 254266234 30240133 45阿苯达唑一2一氨基砜 240133 35 08 7724019
19、8 3528219l 55阿苯达唑亚砜 282208 31 15 88282208 40298224 40阿苯达唑砜 298159 55 22 125298159 3029605 50甲苯眯唑 296264 40 32 205296264 35238】05 37氨基甲苯咪唑 238105 70 17 146238133 51298160 50羟基甲苯咪唑 298266 56 21 155298266 31202131 50噻苯咪唑 202175 58 11 116202175 40218147 405羟基噻苯眯唑 218191 47 08 60218191 30314123 55氟苯咪唑 31
20、4123 43 33 22331 4283 4025695 582一氨基氟苯咪唑 25695 65 21 165256123 39GBT 2 1 324-2007表A1(续)色谱保留时间(f)min定性 定量离子对 去簇电压 碰撞能7组分名称液相色谱离子对(rez) (rez) V V液相色谱法串联质谱法303217 45噻苯咪唑酯 30321 7 40 2 5 170303261 30250176 40丙氧苯眯唑 250218 44 2 7 20125028 306GBT 21324-2007附录B(资料性附录)16种苯并咪唑类药物和代谢物标准溶液的液相色谱一串联质谱定量离子重构离子质量色谱
21、图247 3 46 o 85焉U:霉止透上罐L6 ooo4 ooo2 ooo2 4 6A一奥芬达唑;B奥芬达唑砜;c阿苯达唑;D阿苯达唑一2一氨基砜E 阿苯达唑亚砜;F 阿苯达唑砜;G一噻苯咪唑酯;H噻苯咪唑;J 00e4000 0000000000 00000 00I5一羟基噻苯咪唑J氟苯咪唑;K甲苯咪唑;I,丙氧苯眯唑;M 芬苯达唑;N 羟基甲苯咪唑;O 氨基甲苯咪唑;P 2氨基氟苯咪唑图B1 16种苯并咪唑类药物和代谢物标准溶液的液相色谱一串联质谱定量离子重构离子质量色谱图7GBT 2 1 324-20078附录C(资料性附录)16种苯并咪唑类药物和代谢物标准溶液的液相色谱图,mlnA
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