GB T 21609-2008 化学品.急性眼刺激性 腐蚀性试验方法.pdf

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1、ICS 13300：11100A 80 园目中华人民共和国国家标准GBT 2 1 609-2008化学品 急性眼刺激性腐蚀性试验方法Chemicals-Test method of acute dermal irritationcorrosion2008-04-0 1发布 2008-090 1实施宰瞀鳃鬻瓣警雠瞥鐾发布中国国家标准化管理委员会仪1”刖 昌GBT 21609-2008本标准修改采用联合国经济合作与发展组织(OECD)化学品测试方法No405(急性眼刺激性腐蚀性试验(20024)(英文版)。本标准与OECD化学品测试方法No405相比，存在以下差异：对OECD化学品测试方法No40

2、5进行了编辑性修改；增加了前言部分；增加了附录部分。本标准的附录A为资料性附录。本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会(SACTC 251)提出并归口。本标准负责起草单位：天津市检验检疫科学技术研究院。本标准参加起草单位：天津市检验检疫科学技术研究院、江南大学、中化化工标准化所、天津出入境检验检疫局、中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所。本标准主要起草人：张园、王利兵、李学洋、赵琢、王晓兵、胥传来、李朝阳。本标准为首次制定。化学品 急性眼刺激性腐蚀性试验方法GBT 21609-20081范围本标准规定了动物对化学品眼刺激眼损伤试验的术语和定义、试验方法、试验结果。本标准适用于对化学品进

3、行急性眼刺激性腐蚀性作用的测定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB 149244实验动物兔配合饲料GB 14925实验动物环境及设施3术语和定义31眼睛刺激性eye irritation眼球表面接触受试物后产生的眼睛可逆性炎性变化。32眼睛腐蚀性eye corrosion眼球表面接触受试物后产生的眼睛不可逆性组织损伤。4试验方法41试验动物411动物的品系首

4、选健康成年的白色家兔。412性别和数量选用雄性和或雌性动物，至少使用4只，如某些可疑反应，则需增加试验动物的数量。413饲养条件饲养条件应符合GB 149244、GB 14925的要求。试验动物应单笼饲养。试验动物房的室温，家兔为20士3，相对湿度为3070。采用人工光源时，应保持光照12 h，黑暗12 h。选用常规的试验室饲料，饮水要充足、不受限制。414动物的准备试验动物应在饲养条件下检疫和适应环境至少5 d。试验开始前24 h内，借助于辅助光源对每一只试验动物的双眼进行肉眼检查，然后再进一步作荧光素检查。将1滴2荧光素钠生理盐水溶液滴人眼结合膜囊内，15 s后用温生理盐水轻轻淋冲眼睛，在

5、365 nm紫外线光源下检查，如果膜表面有荧光素滞留，表示该部位角膜上皮脱落或溃疡。凡有眼睛刺激症状、眼缺陷和角膜损伤的动物均不能用于试验。42受试物421如果受试物为液体，一般不稀释。可直接使用原液染毒。装于手压泵式容器中的液态受试物，应先将它挤压入另一容器中，然后按液体同样的方法染毒。不应用喷雾的方式染毒。1GBX 21609-2008422如果受试物为固体、颗粒或粉末，在染毒前应将其粉碎、研细。轻叩容器，测定经轻轻压缩后细粉的容积并称量，计算相当于01 mL容积的质量。42，3装于加压容器中的液体气溶胶态的受试物，可采用喷雾的方法染毒，也可收集喷出的液体，然后再按液体同样的方法染毒。42

6、4如果受试物为强酸或强碱，pH值2或pH值115，或已被证实对皮肤有腐蚀性或严重刺激性时，可以不再进行眼刺激性试验。如果根据体外试验的结果确能预知具有腐蚀性或严重刺激性的物质，也无需再进行眼刺激性试验。43染毒步骤431使动物的头左倾，让受试的右眼侧向斜上方，轻轻提起双睑，将受试物直接滴(涂或放)于角膜上。液态受试物的剂量为01 mL，固态受试物的剂量相当于01 mL的质量，但不超过100 mg a染毒后松开双睑，任其自然开或闭。染毒时应尽量避免瞬间遮盖角膜。染后24 h内不冲洗眼睛。若认为必要，可在24 h后进行冲洗。不作处理的左眼为自身对照。432装于加压容器中的液体气溶胶态的受试物，可采

7、用喷雾的方法染毒，轻轻扒开双睑，从眼睛的正前方10 cm处向眼睛一次喷雾1s，应注意别损伤眼睛。喷雾染毒的剂量可通过模拟的方法估测：在塑料膜的中央建议与受试动物眼裂一样大小的窗孔，塑料膜后紧贴一层滤纸，用同样的方法向窗孔喷雾，接受喷雾前后滤纸的质量差即约相当于喷人眼睛的染毒量。对于挥发性受试物的染毒剂量，可采用喷雾前后压力容器的失重来估测。433局部麻醉。如果受试物可引起剧烈的疼痛，染毒前可给以眼部局部麻醉。为保证局麻对受试物的作用没有明显影响，应谨慎选择局麻药的种类、浓度和剂量。同时，对照眼同样也应给以局麻。434如果本试验结果显示有中度或中度以上眼刺激性，应考虑另选6只动物进行冲洗眼睛的效

8、果试验。分别各选3只动物，于眼染毒后4 s及30 s用足量、流速较快但又不会引起眼部损伤的生理盐水水流冲洗30s，对照眼也应用同样方法冲洗。435如果预知受试物对眼睛可能会产生严重的刺激或腐蚀作用，可以考虑先用一只动物进行试验。若试验结果表明受试物的确对眼睛有严重的刺激或腐蚀作用，则无需再用更多的动物进行试验。5试验结果51临床观察511于染毒后1 h、24 h、48 h、72 h和第4天、第7天对眼睛进行检查。如果染毒后72 h仍未观察到染毒眼有刺激征象，可以结束试验。512可借助放大镜、双目放大镜、手持裂隙灯、或组织显微镜或其他使用的器材对眼睛进行观察。在染毒后第24 h观察和记录结束后，

9、对所有动物的眼睛应用荧光素作进一步检查，如角膜表面有荧光素滞留，则该眼睛在以后的每一观察时点都应做荧光素检查，直到阴性为止。513每次检查时均应按附录A表A1眼睛损伤评分标准对每一动物的角膜、虹膜、结合膜损伤分别进行评分，并计算它们的加权积分。除此以外，对观察到的任何损伤和其他毒作用都应详尽描述和记录(见附录A表A3表A6)。514对观察期限不作硬性规定，但应满足评价所观察到的眼睛反应是否可恢复，一般不超过21 d。52数据与报告521结果处理对每一个试验动物，按规定的观察时点将角膜、虹膜、结合膜损伤的加权积分相加，获得每只动物眼睛损伤的加权总积分，其理论最高分为110分。再进一步计算每一观察

10、时点受试动物总数的眼损伤加权总积分值。522结果评价根据染毒前4 d最高加权总积分均值、刺激反应持续时间及其分值，按附录A表A1表A2眼2GBT 21609-2008睛刺激性分级及其评价标准判定受试物对眼刺激或腐蚀作用的有无及强度。除此之外，有时还应结合观察到的眼睛其他损伤、病理组织学改变、可恢复性等对受试物的眼睛刺激性或腐蚀性进行综合评价。523试验结果的解释将动物眼睛刺激性、腐蚀性试验的结果外推到人仅具有限的可靠性。受试动物的品、系、受试前眼睛的状态、实验条件、实验动物的饲养环境等因素，都可影响结果的准确性和可信度。受试动物的数量毕竟有限。白色家兔的眼睛在大多数情况下对有刺激性或腐蚀性的物

11、质较人类敏感。若用其他品、系动物进行试验也得到类似结果，则会增加从动物外推到人的可能性。在解释试验结果时应注意排除因继发感染引起的刺激作用。53结果报告试验报告应包括以下内容：受试物及介质的名称、化学结构式、理化性状、pH值、配制方法、浓度和用量；试验动物的品、系、性别、年龄、来源(注明动物合格证号和动物级别)、数量、试验开始和结束时的体重；试验动物的饲养环境，包括饲料来源、动物房的温度、相对湿度、单笼饲养或群饲、实验动物房的合格证号；试验条件，包括试验前眼睛的预检、染毒方法、染毒剂量等，如进行了眼局部麻醉，则应给出局麻药的名称、浓度、用法和用量；如进行了冲洗，则应给出冲洗用水及其容量、流速和

12、冲洗时间；描述检查眼睛的方法；试验结果，按不冲洗、染毒后4 s冲洗和30 s冲洗分别描述，内容应包括各观察时点每只动物的角膜、虹膜、结合膜损伤的评分、加权积分、眼损伤的加权总积分、受试动物总数的加权总积分均值、对眼刺激性强度的分级、对眼睛的其他损伤、眼睛反应或损伤的可恢复性、眼部以外的其他毒作用；结果的评价。GBT 21609-2008A1 眼部损伤的评分标准(见表A1)附录A(资料性附录)眼部损伤评价标准表A1部位及损伤情况 评分角膜(O) 角膜浑浊不透明程度(以最致密的部位为准)无溃疡或浑浊 0散在或弥漫性浑浊(与正常的光泽轻度暗晦不同)虹膜的细微结构清晰可辨 1半透明的浑浊区容易分辨，虹

13、膜结构轻度模糊 2乳白色浑浊区，虹膜细微结构看不清，瞳孔大小勉强可辨 3角膜不透明，通过浑浊的角膜看不到虹膜 4(A) 受损的角膜面积(出现任何程度浑浊的总面积)无溃疡或浑浊 00，14 1141Z，34。一1 4角膜损伤加权积分=OXAX 5，理论最高值=80虹膜(I)虹膜损伤正常 O皱褶明显加深(折痕超过正常)、充血、肿胀、角膜周围中度充血，出现其中一项或全部，或其中任何两项的联合，虹膜仍有对光反应(反应迟钝) 1对光反应消失、出血、肉眼可见的明显破坏(出现其中一项或全部) 2虹膜损伤加权积分一I5，理论最高值一lO结合膜(R)结合膜充血(指睑结合膜和球结合膜，不包括角膜和虹膜)血管正常

14、O有些血管血液灌注充盈明显超过正常，呈鲜红色 1弥散性充血，呈深红色，个别血管模糊难以辨认 2弥散性充血，呈紫红色 3(S)结膜水肿(包括跟睑和瞬膜)无水肿 O轻度水肿(包括瞬膜，轻度水肿) 1明显水肿包括部分睑外翻 2水肿，跟睑近半闭合 3水肿，跟睑半闭合到全闭合 4(D) 结合膜分泌物无分泌物 0超过正常的少量分泌物(不包括正常动物内眦部位可见的少量分泌物) l分泌物增多，伴有眼睑和睫毛潮湿 2分泌物增多，伴有眼睑、睫毛和眼周围相当大面积潮湿 3结合膜损伤加权积分一(R+s+D)2，理论最高值一20眼损伤加权总积分一角膜、虹膜和结合膜加权积分之和，理论最高分一lO4A2 眼刺激性分级及其评

15、价标准(见表A2)表A2GBT 2 1609-2008染毒前4 d 刺激反应持续时间及其分值最高加权总 加权总积 动物个体的 跟刺激性及其分级积分均值 时间 分均值 加权总积分000249 第24小时 一0 无刺激性 10 实际无刺激性 22501499 第48小时 一0 轻微刺激性 3O 轻度刺激性 415002499 第72小时 一0 轻度刺激性 40 中度刺激性 520 (1)半数以上动物10 中度刺激性 5(2)半数以上动物10，但无一动物3025004999 第7天20 半数以上动物10，且有任一 重度刺激性 6动物3020 重度刺激性 640 (1)半数以上动物30 重度刺激性 5

16、(2)半数以上动物30，但无一动物6050007999 第7天40 半数以上动物30，且有任一 很重度刺激性 6动物6040 很重度刺激性 780 (1)半数以上动物60 很重度刺激性 7(2)半数以上动物60，但无一动物10080OO9999 第7天80 半数以上动物60，且有任一 极重度刺激性 8动物10080 极重度刺激性 880 半数以上动物60 很重度刺激性 71000011000 第7天 80 半数以上动物60 极重度刺激性 880 极重度刺激性 8A3角膜新生血管形成(见表A3)表A3检查所见 符号 定 义新生血管形成很轻微 VAS_1 血管形成的角膜组织总面积10，25，50角

17、膜表面5GBT 21609-2008A4眼睛继发性损伤所见(见表A4)表A4检查所见 符号 定 义角膜上皮 SCE 角膜表面角膜上皮组织剥脱角膜膨胀 CB 整个角膜表面向外嘭出角膜正常的光泽轻度暗晦 SDL 角膜正常的闪亮表面变得轻度暗晦角膜表面区域性凸出 RAC 角膜表面某区域相对于角膜的其他部位凸起，该区域通常伴有新生血管形成，呈现灰白色或黄色角膜水肿 CE 角膜肿胀眼内残留受试物 TAE 跟内或结合膜囊内或内眦部位有残留的受试物裂隙灯观察验证 oCS 进行裂隙灯检查，验证初步所见角膜矿化 CM 观察到角膜组织内有白色或灰白色小的结晶物A5角膜的荧光素检查(见表A5)表A5检查所见 符 号荧光素滞留伴有机械擦伤 MI荧光素滞留伴有点状刻蚀 ST荧光素滞留伴有角膜鳞片状脱屑 UES荧光素滞留伴有角膜浑浊区 FAO荧光素滞留，无其他任何所见 FNF未观察到有荧光素滞留 (一)A6染毒后的临床表现(见表A6)表A6检查所见 符 号染毒后动物尖叫 VoC染毒后动物拼命乱抓受试眼睛 PAW染毒后动物出现异常活跃 HYP染毒后动物出现头极度侧倾 HT染毒后动物出现受试眼斜视 SQ注：任何其他所见都应记入原始记录和最终报告中。