GB T 17999.9-2008 SPF鸡.微生物学监测.第9部分 SPF鸡.试管凝集试验.pdf

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1、ICS 11220B 41 鳕目中华人民共和国国家标准GBT 1 799992008代替GBT 1799981999SPF鸡 微生物学监测第9部分：SPF鸡 试管凝集试验20081231发布SPF chicken-Microbiological surveillance-Part 9：Tube agglutination test for SPF chicken2009050 1实施丰瞀粥紫瓣警矬瞥霎发布中国国家标准化管理委员会“刖 罱GBT 1799992008GBT 17999SPF鸡微生物学监测分为10个部分：第1部分：SPF鸡微生物学监测总则；第2部分：SPF鸡红细胞凝集抑制试验；第3

2、部分：SPF鸡血清中和试验；第4部分：SPF鸡血清平板凝集试验；第5部分：SPF鸡琼脂扩散试验；第6部分：SPF鸡酶联免疫吸附试验；第7部分：SPF鸡胚敏感试验；第8部分：SPF鸡鸡白痢沙门氏菌检验；第9部分：SPF鸡试管凝集试验；第10部分：SPF鸡间接免疫荧光试验。本部分为GBT 17999的第9部分。本部分代替GBT 179998 1999(SPF鸡试管凝集试验。本部分与GBT 179998 1999相比主要变化如下：增加了附录A“试剂的配制”；修改了凝集试验结果的判定；删除了鸡伤寒沙门氏菌检测内容；在范围中进一步明确了本部分使用的情况。本部分的附录A为规范性附录。本部分由中华人民共和国

3、农业部提出。本部分由全国动物防疫标准化技术委员会(SACTC 181)归口。本部分起草单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、中国动物卫生与流行病学中心、济南斯帕法斯家禽有限公司。本部分主要起草人：曲连东、姜骞、韩凌霞、邵卫星、朱果、单忠芳、刘家森、司昌德、郭东春、于海波、盂庆文。本部分所代替标准的历次版本发布情况为：GBT 179998 1999。SPF鸡微生物学监测第9部分：SPF鸡试管凝集试验GBT 17999920081范围GBT 17999的本部分规定了试管凝集试验的技术要求。本部分适用于对SPF鸡进行鸡白痢沙门氏菌血清抗体检测。用血清平板凝集试验进行鸡白痢沙门氏菌的抗体检测，结果难以

4、判断时，可采用本部分进行复检。2原理细菌性抗原与相应的抗体结合后，在适量电解质参与下，经过一段时间出现肉眼可见的凝集现象结果判定以凝集价表示。3试剂和器材31试剂鸡自痢抗原(含菌109CFU)，标准阳性、阴性血清，被检血清，05石炭酸生理盐水(配制方法见附录A)。32器材试管(口径8 mm10 mm)。4操作程序41取5支试管，第1管加石炭酸生理盐水18 mL，其余各管加1 mL，第1管加被检血清02 mL，与石炭酸生理盐水混匀(1：10稀释)，取1 mL移至第2管，连续倍比稀释至第4管，从第4管吸出1 mL弃去，各管血清最后稀释度依次为1：20，1：40，1：80，1：160，1：320。4

5、2每管加入抗原液1 mL。43抗原对照：在试管中加抗原液1 mL，加05石炭酸生理盐水1 mL。44阳性血清对照：将阳性血清稀释至工作浓度(按说明使用)。在试管中加抗原液1 mL，加稀释的阳性血清1 mL。45阴性血清对照：同阳性血清稀释度使用。46试管振荡后，置37温箱中孵育，24 h后移人48冰箱过夜。47结果观察：抗原对照结果与阴性血清对照，均呈“一”，阳性血清对照呈不同程度凝集，表明试验成立。凝集结果判定见表1。凝集效价以呈现“+”凝集试管的血清最高稀释倍数作为该血清的凝集效价。表1凝集试验结果判定类别 试管所见 结果 判定1 出现大的凝集块，上层液体完全透明 +2 出现明显凝集块，上层液透明度达75 + 阳性3 出现可见的凝集颗粒，上层液透明度达50 +4 出现轻微可见的凝集颗粒，上层液透明度达25 士 可疑5 无凝集块，液体均匀混浊 阴性GBT 17999920085结果判定51阳性：凝集效价1：80。52阴性：凝集效价1：20。53可疑：凝集效价一1：40；判为可疑的需要复检，复检仍为可疑的样品判为阳性。A1 05石炭酸生理盐水石炭酸：5 g；氯化钠：85 g；蒸馏水：1 000 mL；混合溶化，6897 Pa、20 min消毒备用。附录A(规范性附录)试剂的配制GBT 1799992008