GB 15981-1995 消毒与灭菌效果的评价方法与标准.pdf

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1、中华人民共和国国家标准消毒与灭菌效果的评价方法与标准Evaluating method and standard for the efficacy 。fdisinfection and ster咽ization第一篇压力蒸汽灭菌效果评价方法与标准1 主题内容与适用范围本方法规定了压力蒸汽灭菌技术标准及其评价灭菌效果的检测方法。本方法适用于对压力蒸汽灭菌设备灭菌效果的评价。2试lf!J本标准所用试剂，凡未说明规格者，均为分析纯（AR），水为蒸馆水。2. 1 蛋白睬。2. 2 葡萄糖。2. 3 澳甲盼紫酒精溶液取澳甲盼紫2.0日，溶于！OOmL95%乙醇中。GB 1 5 9 81 1 9 9 5

2、2. 4 澳甲盼紫蛋白陈水培养基配制g蛋白陈IO.饨，葡萄糖5.饨，溶于！OOOmL蒸馆水中，调pH值至7.0 7. 2.然后再加2%澳甲酣紫酒精溶液0.6mL，摇匀后，按5mL管，分装包口，置压力蒸汽灭菌器中，于115c灭菌40min后备用。3指示菌嗜热脂肪杆菌芽胞（ATCC7953或SS!K3J）菌片，含菌量为51055106cfu片，121C下，杀灭90%微生物所需时间D.，值为！.3 J. 9min，杀灭时间（KT值）为！9min，存活时间（ST值）为二三3. 9min, 4 化学指示剂需用卫生部批准的化学指示剂。5技术要求压力蒸汽灭菌器下排气式压力，MPa/cm0.070 0 105

3、 预真空式0. 210 国家技术监督局1995-12-15批准2.6 温度，c灭菌时间，min115 40 121 30 134 4 6 1996 07-01实施GB 1 5 9 8 1 -1 9 9 5 6检测方法6. 1 生物学指标（用作压力蒸汽灭菌设备灭茵效果的依据）。6. 1. 1 将嗜热脂肪杆菌芽胞菌片两个分别放入灭菌小纸袋内，置于标准试验包中心部位。6. 1. 2 灭菌柜室内，上、中层中央和排气口处各放置一个标准试验包（由3件平纹袖手术衣，4块小手术巾，2块中手术巾，1块大手术巾，30块lOcmlOcm,8层纱布敷料包裹成25cmX30cm30cm大小）。手提压力蒸汽灭菌器用通气贮

4、物盒（22cm13cm6cm）代替标准试验包，盒内盛满中试管，指示菌片放于中心部位两只灭菌试管内（试管口用灭菌牛皮纸包封），将盒平放于手提压力蒸汽灭茵器底部。6. 1. 3 经一个灭菌周期后，在无菌条件下，取出标准试验包或通气贮物盒中的指示菌片，投入澳甲盼紫葡萄糖蛋白陈水培养基中，56培养48h，观察培养基颜色变化。2化学指标在物品包外用化学指示胶带，可作为物品是否经过灭菌的处理标志。在物品包内中心部位用化学指示剂，可作为物品是否灭菌的参考标志。7结果判定及评价7. 1 同次检测中，标准试验包或通气贮物盒内，每个指示菌片接种的澳甲盼紫蛋白陈水培养基全部不变色，判定为灭菌合格。指示菌片之一接种的

5、澳甲盼紫蛋白陈水培养基由紫色变为黄色时，判定为灭菌不合格。7.2 化学指示剂的颜色变为与灭菌合格标准色相同时，或熔化时作为灭菌合格的参考标准。第二篇紫外线表团消毒效果评价方法与标准B主题内容与适用范围本方法规定了物体表面消毒用紫外线的波长、强度及评价其消毒效果的物理学指标和生物学检测方法。本方法适用于紫外线直接照射到的物体表面消毒效果评价。9指示菌9. 1 大肠杆菌（8099或ATCC25922）。9, 2 枯草杆菌黑色变种芽胞（ATCC9372）。10物理学指标1 o. 1 在电压220V时，普通30W直管型紫外线灯，在室温为2025的使用情况下，253.7nm紫外线辐射强度（垂直lm处）应

6、注70vW/cm 10. 2 在电压220V时，高强度紫外线灯，在室温为2025C的使用情况下，253.7nm紫外线辐射强度（垂直lm处）应200rW/cm。10. 3 照射剂量按式。）计算：剂量vW s/cm2）强度vW/cm）时间（s) . ( 1 ) 11 检测方法11. 1 物理学检测方法11. 1. 1 灯管的紫外线强度vW/cm）用中心波长为253.7nm的紫外线强度ill定仪（标定有效期内），在灯管垂直位置lm处测定。257 GB 1 5 9 81 -1 9 9 5 11.1.2 在实际应用中消毒表面的照射强度应以灯管与消毒对象的实际距离测定。11.1. 3 表面消毒接受的照射剂

7、量，应达杀灭目标微生物所需。对大肠杆菌，照射剂量应达到lj20 000 W s/cm2，对枯草杆菌黑色变种芽胞应达到100OOOW s/cm2 0 11. 2 生物学检测方法11. 2. 1 采用载体定量消毒试验。载体制备按本标准附录C进行。11. 2. 2 开启紫外线灯5min后，将8个染菌玻片平放于灭菌器皿中，水平放于适当距离照射，于4个不同间隔时间各取出2个染菌玻片，分别投入2个盛有5mL洗脱液（1.%吐温80.1%蛋自腺生理盐水）试管中，振打80次。11.2.3经适当稀释后，取0.5mL洗脱液，作平板倾注，每个染菌玻片接种两个，放37培养48h作活菌it数。11. 2. 4 阳性对照，

8、除不作照射处理外，取2个染菌玻片分别投入且个盛有5mL洗脱液中振打80次，余按4.2.3进行。11. 2. 5 计算杀灭率12判定标准杀灭率（%阳性对j照回收菌数一试验组回收菌数x100 .”( 2 ) 阳性对照回收菌数12. 1 对指示菌杀灭率注99.9%判为消毒合格。12.2 达物理学检测标准时，作为消毒合格的参考标准。第三篇液体消毒剂消毒效果评价方法与标准13 主题内容与适用范围本方法具体规定了消毒剂消毒效果生物学检测方法及其评价标准。本方法适用于消毒剂对各种物体的消毒效果评价。14 理化指标将消毒剂胃20土2C水浴中，测定在使用浓度下杀灭指示微生物达到消毒或灭菌所需的最短时间(min）

9、。15 指示微生物15. 1 细菌15. 1. 1 细菌繁殖体：金黄色葡萄球菌（ATCC6538）、大肠杆菌（8099或ATCC25922）。15. 1. 2 细菌芽胞s枯草杆菌黑色变种芽胞（ATCC9732）。15.2 真菌白色念珠菌（ATCC10231）。15. 3 乙型肝炎表面抗原z纯化抗原（1.Omg/mL）。16检测方法16. 1 中和试验（见附录Al。16. 2 消毒剂定性消毒试验（见附录Bl。16. 3 消毒剂定量消毒试验（见附录。16. 4 消毒剂杀菌能量试验（见附录D）。16. 5 乙型肝炎表面抗原CHBsAg）抗原性破坏试验（见附录El。258 GB 15 9 81-199

10、 5 17消毒效果评价标准17. 1 对细菌和真菌的杀灭率二三99.9 % .对HBsAg，将检测l方法灵敏度10倍或51O j吉（载体试验）的HBsAg抗原性破坏，可判为消毒合格。17.2 对枯草杆菌黑色变种芽胞全部杀灭，可判为灭菌合格。17. 3 在实际应用中消毒效果评价以有机物保护试验的最低浓度和最短时间为该消毒剂达到实用消毒所需的浓度和时间。9 Al 内容提要GB 1 5 9 81-1 9 9 5 附录A中和剂中和效果试验（补充件为了准确评价消毒剂对微生物的杀灭作用，消毒试验中要求选择适当中和剂。所选中和剂不仅能及时中止消毒剂的杀微生物作用，且中和剂本身及其与消毒剂的反应产物（下称中和

11、产物）尚需对微生物无抑制或杀灭作用，对培养基无不良影响。A2 培养基和试11JA2. 1 营养琼脂培养基成分：蛋白炼牛肉膏氯化纳琼脂10.00g 3.00g 5.00g 15.00g 蒸馆水1000. OOmL ffpj法：除琼脂外，其他成分溶解于蒸馆水中，调pH至7.27.4，加入琼脂后加热溶解，过滤分装，经121 C、压力蒸汽作用30min，灭菌后备用。A2. 2 0. 03mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.2 7. 6，下称PBS）。成分磷酸氢二纳2.84g 磷酸二氢饵1.36日蒸饱水1000. OOml, 制法z将磷酸氢二纳与磷酸二氢饵溶解于蒸馆水中，pH为7.2 7. 4，分装经121

12、、30min压力蒸汽灭菌后备用。A3 器材A3. 1 锥形烧瓶。A3. 2 平皿（直径9cm）。A3. 3 量筒。A3. 4 精密pH试纸。A3. 5 无菌试管。A3. 6 无菌刻度吸管（1.0,5. 0,10. OmL）。A3. 7 恒温培养箱。A3. 8 冰箱。A3. 9 菌落汁数器。A3. 10酒精灯。A4 中和剂（注明生产厂家，批号）A5操作方法A5. 1 用PBS将指示菌制成5105510cfu/mL悬液。260 GB 1 5 9 8 1 - 1 9 9 5 A5. 2 将消毒剂用灭菌蒸f留水配制成3种不同浓度，在不加中和剂的情况下，四tl知该消毒剂lOmin抑杀指示菌99.9%以上

13、的最低有效浓度。A5. 3 取消毒剂lOmin抑杀指示菌的最低有效浓度与待选择中和剂进行试验，选出中和剂种类并依据等气量巾和原则，调整中和剂浓度，选出试验浓度的消毒剂使用中和剂的浓度。A5. 4 中和剂选择试验时，先将消毒剂1.OmL与中和剂溶液9.Om！，混合，制成中和产物溶液，再按表Al分组进行。表Al中和剂选择试验0. Sm！，菌液加于2取0.5rnL i1f.匀液加入z作用！Ornin后，取原液或稀释液组号（加入后总量为5mL)0. 5时，接种平饭（2个样本h消毒ifI/./., 100 A7 判定标准Al. 1 3、4、5组菌数相似，其误差率运10%。A7. 2 6组无菌生长。A?.

14、 3 2组菌数明显少于3、4、5组。Al. 4 1组不长菌或明显少于2组。( Al ) 符合上述标准的中和剂表明可消除消毒剂对指示菌的作用，中和剂及其与消毒剂的中和产物对指示菌无毒害判定为该消毒剂的中和剂。A8 消毒试验用中和剂浓度的选择按AS.4步骤进行，按A7.17.4的标准判定。261 B1 内容提要GB 15981 1995 附录B消毒剂定性消毒试验（补充件）定性消毒试验是测定受消毒因子作用后的样本有无细菌生长的试验方法。用于对消毒因子灭菌效果的鉴定和消毒剂杀灭细菌效果的初步评价。B2培弊基与试111时，1普通肉汤培养基82. 1. 1 成分蛋白豚10.00g 氟化制5. OOg 肉浸

15、液1000. OOmL 82. 1.2 1到法z取蛋白陈、氯化纳2日入肉浸液内，微温溶解，调节pH至弱碱性，煮沸、滤清，调节pH使灭菌后为7.2 7. 4，压力蒸汽灭菌备用。82. 2试剂B2. 2. 1 稀释液z含1%蛋白烁的O.03mol/L PBS (pH 7. 2 7.4)o B2. 2. 2 灭菌蒸偏水。B2. 2. 3 中和剂z按本标准附录A选择。因器材B3. 1 灭菌刻度吸管（1.0,5. 0,10. OmL）。B3. 2 灭菌试管。B3. 3 灭菌三角烧瓶。83. 4 酒精灯。时，5恒温水陆箱。B3. 6恒温培养箱。84 试验方法B4. 1 将菌液进行活菌计数，并用稀释液配制成

16、含菌量为sx1055lOcfu/mL的菌悬液。B4. 2 将灭菌试管10支排列于试管架上，标记管号。B4. 3 每个试管加灭菌蒸馈水2.5mL，放20士zc水浴中。B4. 4 于第1管内加适当浓度消毒液2.5mL，混匀后取2.SmL移入第2管，再次混匀，从第2管中取2. 5mL移入第3管，以此类推至第9管，混匀后弃去2.5mL，第10管中不加消毒液作对照。84.5 加菌悬液2.5mL予各管中，混匀并记录各管加菌时间，使菌药混合液中含菌量均为105106cfu/mL0 84. 6 各管分别于加菌后4个不同i司隔时间，取出o.5mL，加入4.5mL中和剂内，中和lOmin后，取出0. 5ml，加入

17、4.5mL营养肉汤管内。84. 7 将接种细菌的肉汤管放37C培养48h，观察初步结果，无菌生长管继续培养至第7夭。84.8试验重复5次。262 GB 1 5 9 8 1 1 9 9 5 B5结果判定B5. 1 若肉汤管混浊，贝lj表示有菌生长记为阳性，以（十）表示。B5. 2 若培养至第7天，肉汤管澄清则表示无菌生长，记为阴性，以（一表示。时，3对难以判定的肉汤管取O.lmL接种于营养琼脂平板，用灭菌L棒涂匀，放37培养48h，观察商落形态；并做涂片染色镜检，判断是否有指示菌生长。有指示菌生长记为阳性。B5. 4 5次试验，均无指示菌生长表示达到灭菌。Cl 内容提要附录C消毒剂定量消毒试验补

18、充件定挝消毒试验是测定受i肖毒因子作用后，样本残存微生物数量的试验方法，以杀灭率表示结果。用于对消毒剂杀灭效果的评价。C2培养基与试lPJc2. 1 普通营养琼脂培养基：按本标准AZ.I iliJ备。c2. 2 试剂c2. 2. 1 稀释液含1%蛋白胀的0.03 mol/L PBS (pH 7. 27.4）。c2. 2. 2 灭菌蒸倒水。c2. 2. 3 中和剂按本标准附录A选择。C2. 2. 4 0. 03mol/L PBS (pH 7. 27.4）。c2. 2. 5 洗脱液含中和剂、1%蛋白且在、0.I%吐温80的PBS。C3 器材C3. 1 火菌刻度吸管（！.0,5. O,!O. OmL

19、）。C3. 2 灭菌试管。C3. 3 灭菌三角烧瓶nC3. 4 灭菌平皿（直径为9cm)o C3. 5 恒温水浴箱。C3. 6恒温培养箱。C3. 7 酒精灯。C3. 8 菌落计数器。C3. 9 微量进样器。C3. 10 载体2根据需要及试验目的选用经脱脂处理0.5cm X . Ocm大小的布片、纸片、玻片、橡胶片、塑料片、不锈钢片或铝片。C4 试验方法C4. 1 定量悬液试验C4. 1. 1 将菌液进行活菌汁数，并用稀释液稀释成含菌量为5JO5IOcfu/mL的菌悬液。C4. 1.2 将消毒剂用灭菌蒸馆水稀释成3个不同浓度，各吸取4.5mL分别加入三个试管内，放20士263 GB 1 5 9

20、81 -1 9 9 5 2C水浴中。C4. 1.3 待试管内液体温度与水浴温度平衡后，在三个试管中分别加入口，5mL菌悬液（含菌量为5IO5 IO cfu/mL），混匀并开始记时C4. 1. 4 分别于4个不同间隔时间，各取0.5mL菌液混合液移入4.5mL中和剂中混匀。C4. 1.5 中和lOmin，作适当稀释后进行活菌计数。C4. 1.6 阳性对照以洗脱液代替消毒液，同时按C4.!. 2C4.!.5进行。C4. 1. 7按不同稀释度推算出每个样本存活菌数（cfu/mL），按式（Cl）计算杀灭率z对照组存活菌数试验组存活菌数杀灭率（%） 100 ( CI ) C4. 1. 8 试验重复5次。

21、C4. 2 载体定量试验对照组存活菌数C4. 2. 1 将灭菌载体平放于灭菌平皿内每个载体滴注定量茵液载体回收菌量达5105106cfu片），涂匀，放37培养箱待干。应用市售染菌载体时，回收菌量亦应达5IO5IOcfu片。C4. 2. 2 用灭菌蒸馆水将消毒剂稀释成3个不同浓度，各吸取5mL分别加入三个试管内，放20士2C水浴中。C4.2.3 待试管内液体温度与水浴温度平衡后，加入染菌载体，作用至规定时间，将染菌载体移入含中和剂的5mL洗脱液试管内，中和！Omin，振打80次，适当稀释，接种两个平板。放37培养2448h，进行活菌计数。时，2.4 阳性对照，以洗脱液代替消毒液按C4.2. 2

22、C4. 2. 3进行cs结果判定cs. 1 5次试验的杀灭率均二三99.9%判为消毒合格。C5. 2 对枯草杆菌黑色变种芽胞5次试验均全部杀灭判为消毒合格。D1 内容提要附录D有机物保护试验（补充件）有机物保护试验是测定消毒剂对有机物保护条件下的微生物的杀灭作用，以杀灭率表示之，其结果与该消毒剂定量消毒试验相比较，用于评价有机物对消毒剂的杀菌能力的影响。D2培养基与试ll!JD2. 1 普通营养琼脂培养基，按本标准A2.I制备。D2. 2试jfij D2. 2. 1 稀释液z同C2.2. I。D2. 2. 2 灭菌蒸馆水。D2. 2. 3 中和剂s按本标准附录A进行选择。D2. 2. 4 0.

23、 03mol/L磷酸缓冲液（pH7.27.4）（简称PBS）。D2. 2. 5 洗脱液z含1%蛋白脐、，o.1%吐温80的生理盐水。D2. 2. 6 小牛血清加入菌悬液中，使其最终浓度为10%。2 fi l D3 器材同本标准C3D4 试验方法GB 15981 1995 D4. 1 实验前预先将菌液进行活菌汁数，用稀释液稀释加入小牛血惰，使其最终含血清量为10%，含菌数为5x )0 5 1 Ocfu/mL，以此作为试验菌悬液。D4. 2 以F步骤同本标准，C4.1.2 C4. 1.8。D5结果判定D5. 1 5次试验的杀灭率均大于99.9%所需最低浓度和最短时间，判为该消毒剂在有机物存在下，可

24、以达到消毒的有效浓度和时间。5.2 此有效浓度和时间与定量消毒试验达到消毒的有效浓度和时间相同或相近，判为有机物对消毒ifrj杀菌作用无明显影响。达到消毒最低有效浓度增加一倍以上或最短作用时间延长一倍以上者可视为有明显影响。El 内容提要附录E乙型肝炎表面抗原破坏试验补充件）乙型肝炎表面抗原（HBsAg）破坏试验是以HBsAg的抗原活性为间接标志，评价消毒因子对乙型肝炎病毒（HBV）灭活能力的试验方法适用于评价化学消毒剂、紫外线对HBV的消毒效果。E2试Jl!JE2. 1 小吁Jill清（56C ,30rnin灭活儿E2. 2 0. Olmol/L磷酸盐缓冲液（PBS,pH7.27.4）。E2

25、. 3纯化HBsAg(l.Omg/mL) E2. 4 周相放射免疫分析法试剂，要求特异性100%，精密性V运15%，灵敏度1.Ong/mL，线性r0 95。E2. 5 酶联免疫吸附法试剂，要求特异性100%，精密性r15%，灵敏度3.2ng/mL，线性，o.95 E3 器材E3. 1 吸址器z包括试管、吸管（0.1,1.0,5.0和10.Oml.4种）和微量进样器（100. OL）。E3. 2 载体（直径1.5cm大小的不锈钢片。E3. 3 r免疫计数仪。E3. 4 酶联免疫测定仪。E3. 5 低温冰箱（30C70 c）。时HBsAg悬液的配制E4. 1 取0.Olmo!/!, PB弓（pH7

26、. 2 7.4) 9.4ml，加入小牛血清0.6mL，配成含6%小牛血清的悬液。再21i二GB 1 5 9 81-1 9 9 5 取该PBS9. OmL，加入浓度为1.Omg/mL的纯化HBsAg悬液1.OmL，使成含5.4%小牛血清，HBsAg浓度为lOOg/mL的试验用HBsAg悬液。E4.2 将试验用HBsAg悬液1.OmL盛装入容量为1.5时，的玻璃安瓶中，封口，放3oc一70冰箱保存备用。保存期为三个月。E5 HBsAg的检测方法E5. 1 固相放射免疫分析法（SPRlA）。E5. 2酶联免疫吸附法（ELISA）。E6 中和剂选择在测定消毒剂对HBsAg的破坏效果时，应先选出适宜的中

27、和剂及其使用浓度，再进行破坏试验。所用中和剂：a.应能有效而及时中止消毒剂的残余作用；b.中和剂及其与消毒剂的中和产物对HBsAg的抗原活性没有影响，亦不影响检测方法对HBsAg检出的灵敏度。E6. 1 将消毒剂用无菌蒸馆水配成不同浓度，取1.ZmL消毒液与0.3mLHBsAg悬液混匀，置20士zc水浴条件下，作用！Omin，测定该消毒剂！Omin抑制或破坏HBsAg抗原性的最低有效浓度。E6. 2 取消毒剂！Omin抑制或破坏HBsAg抗原性的最低有效浓度与待选中和剂进行试验试验可按下列组别进行za.消毒液。.9mL+HBsAg悬液0.!mL; b.消毒液o.4mL + HBsAg悬液0.!

28、ml，作用!Omin后含20%小牛血清的中和剂。.5mL;c.先取含20%小牛血清的中和弗rj!mL与消毒液lmL，混匀，作用1030min，制成中和产物溶液，再行试验。中和产物溶液0.9mL+HBsAg悬液。！mL;d.含10%小牛血清的PBSO.9mL+HBsAg悬液O.!mL阳含10%小牛血清的中和剂。.9mJ, + HBsAg悬液。.!mL:f.中和产物溶液0.9mL+PBSO. lmL.经检测只有在c,d、e组HBsAg活性的测定值相近（相差10%以fl并都明显多于b组，a组HBsAg活性不能检出或检出活性明显少于b组，f组阴性对照正常，方可证明所选中和剂及其使用剂量是适宜的。E6.

29、 3进行消毒试验时，依据消毒剂与中和剂等当量中和原则，适当调整中和剂的用量再次按E6.2步骤测定中和效果后，方可进行抗原性破坏试验。El破坏试验方法El. 1 悬液法悬液法指将HBsAg在悬液中与消毒剂相互作用并进行抗原性破坏效果观察的试验方法。El. 1. 1 HBsAg悬液的浓度为检测试剂灵敏度的10倍。如检测试剂的灵敏度为lng/mL,HBsAg的浓度应为IOg/mL。El. 1. 2 取含5%小牛血清的PBSZ.7mL加到含0.3mL浓度为IOOg/mL的HBsAg悬液中，混匀。El. 1. 3 取小牛血清ZOmL加到含80mL灭菌的中和剂溶液中，混匀。El. 1. 4 破坏试验z将预

30、定消毒液浓度！.25倍的消毒液与HBsAg悬液按4: I比例混合，混合液容量不少于！.5mL。然后置20士2水浴条件下，作用达规定时间，即刻取0.3mL混合液与等体积含20%小牛血清的中和剂Iii匀，作用1030min，取样测定残留HBsAg的活性，每样本平行测定2份，每份。.!mL，取其平均值，判定破坏效果。每种消毒剂观察3个浓度，每一浓度观察4个作用时间。试验重复5次。El. 1. 5 阳性对照2取含20%小牛血清的中和剂！mL，加到含！mL试验用消毒液的试管中混匀，作用1030min，制成中和产物溶液。取该中和产物溶液0.9mL加入试验浓度的HBsAg悬液O.!mL取样检测，每样本检测3

31、份，每份O.!mL，取其平均值为阳性对照值。E7. 1.6 阴性对照g取含20%小牛血清的中和剂！mL加到含！mL试验用消毒液的试管中，混匀，作用: o- 3min，取样检测，每一样本检测3份，每份O.lmL取其平均值为阴性对照值。266 GB 159 81-199 5 应注意阴性对照不能用试剂盒的阴性对照样本。E7. 2 载体法载体法指将在载体表面的HBsAg与消毒因子相互作用，并进行抗原性破坏效果观察的试验方法。E7. 2. 1 HBAg载体的制备E?.2. 1. 1 载体为直径1.5cm大小的不锈钢片，经洗涤剂煮沸洗涤脱脂、压力蒸汽灭菌备用。E7. 2.1. 2 HBsAg；悬液的浓度为

32、检测方法灵敏度的510倍。如灵敏度为lng/mL,HBsAg的浓度应为SOg/ml，。E7. 2. 1. 3 HBsAg的污染方法为滴染法。滴染时，将灭菌载体平铺于无菌平皿内，用微量进样器吸取HI如Ag悬液，滴注于载体中央，每个载体201，.然后用L型自金丝将悬液涂布均匀，放37（培养箱4060min，待悬液干燥后进行抗原性破坏试验。E7. 2. 2 抗原性破坏试验取污染HBsAg的载体，平放于元菌平皿内，用吸管吸取预定浓度的消毒液50L，滴注于载体中央，迅即涂匀，使整个载体均匀受药。每2片一组，置20士2C水浴中，作用至规定时间后，用无菌慑子将载体移入含1.Oml,10 %小牛血清的中和剂试

33、管中。作用1030min，敲打振荡200次，取样检测残留HBsA自的活性，每一样本取样2份，每份O.lmL，取其平均值，判定抗原性的破坏效果。每种消毒剂观察3个浓度，每个浓度观察4个作用时间。试验重复5次。在观察紫外线破坏HBsAg的效果时，将污染载体直接置作用因子下，作用至规定剂量后将载体移入含1.Oml,10%小牛血清PBS的试管中，敲打振荡200次，取祥检测残留HBsAg活性，每样本取样2份，每份。lml，取其均值，判定破坏效果。试验重复5次。E7. 2. 3 阳性对照在观察消毒剂破坏HBsAg效果时，取50L试验用消毒液加到含1.OmL10%小牛血清中和剂的试管中作用1030min，制

34、成中和产物溶液。取该中和产物溶液1.OmL加到大试管中，然后将滴染HBsAg的载体移入，敲打振荡200次，每一样本检测3份，每份O.lmL，取其平均值为阳性对照值。在观察紫外线破坏HBsAg效果时，将污染HBsAg的载体直接移入含1.OmL 10%小牛血清的PBSpH 7. 2 7. 4）的试管中，敲打振荡200次，每一样本检测3份，每份0.lmL，取其平均值为阳性对照值。町，2.4阴性对照在观察消毒剂破坏HBsAg效果时，取50L消毒液加到含lmL10%小牛血清中和剂试管中，作用1030min，取样检测，每一样本检测3份，每份。lmL。取其平均值为阴性对照值。在观察紫外线破坏HBsAg时阴性对照则为含10%小牛血清的PBS(pH7.2 7. 4）。每一样本检测3份，每份。lmL，取其平均值为阴性对照值。应注意阴性对照不能用试剂盒的阴性对照样本。因破坏效果判定以S!N2.l作为HBsAg抗原性破坏合格标准。其中S是消毒因子作用后被检样品或阳性对照样品千均每分钟脉冲数（cpm）值或光密度（OD）值。N是试验中阴性对！照样品平均cpm值或OD值。附加说明：本标准由中华人民共和国卫生部提出。本标准由中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所负责起草。本标准k要起草人袁洽励、王太星、顾健。4:标准由卫生部委托技术归口单位卫生部传染病防治监督管理办公室负责解释。1、t月