GB 20287-2006 农用微生物菌剂.pdf

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1、ICS 65. 100.01 B 13 GB 中华人民共和国国家标准农用微生物菌Microbial inoculants in agriculture 2006-05-25发布中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员?GB 20287-2006 剂2006-09-01实施GB 20287-2006 目次前言.1 I 范围-2 规范性引用文件-3 术语和定义. 4 产品分类5 要求5. 1 菌种5. 2 产品外观(感官)5.3 产品技术指标16 试验方法6.1 仪器、设备6. 2 试剂6. 3 产品参数的检测37 检验规则7. 1 抽样-7.2 检验分类. 7.3 判定规则6

2、8 包装、标识、运输和贮存68. 1 包装68. 2 标识.6 8.3 运输8.4 贮存. 附录A(规范性附录)常用检测培养基 8 附录肌资料性附录)常用染色剂附录C(规范性附录)稀释法(MPN5管法)12附录职规范性附录)酶活的测定uGB 20287-2006 目。昌本标准的5.1、5.3、第8章为强制性条款，其余为推荐性条款。本标准的附录A、附录C和附录D为规范性附录，附录B为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。本标准起草单位:农业部微生物肥料质量监督检验测试中心、中国农业科学院土壤肥料研究所。本标准主要起草人:沈德龙、李俊、姜昕、张玉洁、李力、冯瑞华、曹凤明、杨小红、关大

3、伟。I GB 20287-2006 农用微生物菌剂1 范围本标准规定了农用微生物菌剂(即微生物接种剂)的术语和定义、产品分类、要求、试验方法、检验规则、包装、标识、运输和贮存。本标准适用于农用微生物菌剂类产品。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过的修改单(不包括勘误的内是否可使用这些文件的最GB/ T 8170 GB/ T 19524. QB/ T 1803 3 术语和定义下列术语和3.1 农用微生物目标微生物(恢复地力，维持根4 产品分类5 要求5. 1 菌种期的引用文件，其随后所有准达成协议的各方研究间接改良土壤、物菌剂、硅酸盐微生物生产用的微生物菌种应安全、有效。生产者应提供菌种的分类

4、鉴定报告，包括属及种的学名、形态、生理生化特性及鉴定依据等完整资料。生产者应提供菌种安全性评价资料。采用生物工程菌，应具有允许大面积释放的生物安全性有关批文。5.2 产品外观(感官)粉剂产品应松散;颗粒产品应无明显机械杂质、大小均匀、具有吸水性。5. 3 产品技术指标5. 3. 1 农用微生物菌剂产品的技术指标见表1，其中有机物料腐熟剂产品的技术指标按表2执行。GB 20287-2006 表1农用微生物菌剂产品的技术指标剂型项目液体粉剂颗粒有效活菌数(cfu)/(亿/g或亿/mU二三2.0 2. 0 1. 0 霉菌杂菌数/(个/g或个/mL)王三3.0X10 3.0X106 3. OX 10

5、杂菌率/c%) 10.0 20.0 30.0 水分/(%) 三三35.0 20.0 细度/(%)二三80 80 pH值5. 08. 0 5. 58. 5 5. 58. 5 保质期b/月3 3 6 a 复合菌剂，每一种有效菌的数量不得少于0.01亿/g或0.01亿/mL;以单一的胶质芽胞杆菌(BaciLlusmuci laginosus)制成的粉剂产品中有效活菌数不少于1.2亿/g。b 此项仅在监督部门或仲裁双方认为有必要时检测。表2有机物料腐熟剂产晶的技术指标剂型项目液体粉剂颗粒有效活菌数(cfu)/(亿/g或亿/mL)二三1. 0 O. 50 O. 50 纤维素酶活，/CU/g或U/mL)二

6、z30.0 30.0 30. 0 蛋白酶活b/CU/g或U/mL)飞?15.0 15.0 15.0 水分/(%) 35.0 20.0 细度/(%) 二三70 70 pH值5. 08. 5 5. 58. 5 5. 58. 5 保质期/月二三3 6 a 以农作物秸轩类为腐熟对象测定纤维素酶活。b 以畜禽粪便类为腐熟对象测定蛋白酶活。C 此项仅在监督部门或仲裁双方认为有必要时检测。5.3.2 农用微生物菌剂产品中无害化指标见表3。表3农用微生物菌荆产品的无害化技术指标参数标准极限粪大肠菌群数/(个/g或个/mL)主三100 蚓虫卵死亡率/(%) 二三95 碑及其化合物(以As计)/(mg/kg)三三

7、75 铺及其化合物(以Cd计)/(mg/kg)王三10 铅及其化合物(以Pb计)/ (mg/kg) 100 错及其化合物(以Cr计)/(mg/kg) 三三150 求及其化合物(以Hg计)/ (mg/kg) 飞二飞5 2 GB 20287-2006 6 试验方法6. 1 仪器、设备6.1.1 生物显微镜。6.1.2 恒温培养箱。6.1.3 恒温干燥箱。6.1.4 超净工作台或洁净室。6.1.5 电子天平(或精密天平)。6.1.6 摇床。6. 1. 7 蒸汽灭菌锅。6. 1.8 试验筛。6. 1. 9 酸度计。6.2 试剂6.2.1 无离子水、无菌水(或生理盐水)、蒸馆水。6.2.2 检测用培养基

8、:按附录A的规定执行。6.2.3 染色试剂:参见附录B。6.3 产品参数的检测6.3.1 外观(感官)的测定取少量样品放到白色搪瓷盘(或白色塑料调色板)中，仔细观察样品的颜色、形状、质地。6.3.2 有效活菌数的测定采用平板计数法，根据所测微生物的种类选用适宜的培养基。若采用稀释法最大可能数(MPN)5管法，按附录C的规定执行。6.3.2.1 系列稀释称取样品10g(精确到O.Olg)，加入带玻璃珠的100mL无菌水(或生理盐水)中液体菌剂取10.0 mL加入90mL无菌水(或生理盐水)中，静置20min，在旋转式摇床上200r/min充分振荡30 min，即成母液菌悬液(基础液)。用无菌移液

9、管分别吸取5.0mL上述母液菌悬液，加入45mL无菌水(或生理盐水)中，按110进行系列稀释，分别得到1-lX101、1-1X 102、11X 103、11X 104稀释的菌悬液(每个稀释度应更换元菌移液管)。6.3.2.2 加样及培养每个样品取3个连续适宜的稀释度，用无菌移液管分别吸取不同稀释度菌悬液0.1mL，加至预先制备好的固体培养基平板上，分别用无菌玻璃刮刀将不同稀释度的菌悬液均匀地涂于琼脂表面。每一稀释度重复3次，同时以无菌水(或生理盐水)作空白对照，于适宜的条件下培养。6.3.2.3 菌落识别根据所检测菌种的技术资料，每个稀释度取不同类型的代表菌落通过涂片、染色、镜检等技术手段确认

10、有效菌。当空白对照培养皿出现菌落数时，检测结果无效，应重做。6.3.2.4 菌落计数以出现20个300个菌落数的稀释度的平板为计数标准(丝状真菌为10个150个菌藩数)，分别统计有效活菌数目和杂菌数目。当只有一个稀释度，其平均菌落数在20个300个之间时，则以该平均菌落数计算。若有两个稀释度，其平均菌落数均在20个300个之间时，应按两者菌落总数之比值决定。若其比值小于等于2应计算两者的平均数;若大于2则以稀释度小的菌落平均数计算。有效活菌数按式(1)或式(2)计算:3 GB 20287-2006 式中:rkV, _ , nm二丁寸X10-0 mo v z .:rkV，。v二一;+X 10-0

11、 V oVz nm一质量有效活菌数，单位为亿每克(亿/g);E一二菌落平均数，单位为个;走一一稀释倍数;V1一一一基础液体积，单位为毫升(mL); mo 样品量，单位为克(g);Vz 菌悬液加入量，单位式中:m 样品n j 杂菌n 有效6.3.5 水分的t将空铝盒置百二王行样品(颗粒型样.质量。将装好样F黠mz一烘干后样品和铝盒的/贝mo一一空铝盒的质量，单位为克(g)。6.3. 6 细度的测定6. 3. 6.1 粉荆样晶. ( 1 ) ( 2 ) 称取样品50g(精确到O.1 g) ，放入300mL烧杯中，加200mL水浸泡10min30 min后倒入孔径0.18mm的试验筛中，然后用水冲洗

12、，并用刷子轻轻地刷筛面上的样品，直至筛下流出清水为止。将试验筛连同筛上样品放入干燥箱中，在105C士2C烘干4h 6 h。冷却后称量筛上样品质量。样品细度按式(5)计算，数值以%表示:5=1-mo(伫Jx100 . ( 5 ) 4 GB 20287-2006 式中:5一一筛下样品质量分数，%;m 筛上干样品质量，单位为克(g);m o 样品质量，单位为克(g); 样品含水量，(%)。6.3.6.2 颗粒样晶称取样品50g(精确到0.1g)，将两个不同孔径的试验筛(1.0 mm和4.75mm)摞在一起放在底盘上(大孔径试验筛放在上面)。样品倒入大孔径试验筛内筛样品，然后称小孔径试验筛上的样品质量

13、。颗粒细度按式(6)计算，数值以%表元一一式中:g一一样品质量分m一一小孔径试6.3.7 pH值的现打开酸度计6.3.7.1 液体盛口用量筒取应符合GB/T1 6. 3.9 蛐虫卵死亡应符合GB/T1952 6. 3. 10 纤维素酶活、蛋国应符合附录D的规定。6.3. 11 呻、铺、铅、错、柔的测定应符合GB18877-2002中的5.12 6.3.12 保质期的检验在产品说明书标明的保质期前，按6.3. 16. 3. 11测定产品相应指标。7 检验规则水加到烧杯中(如本标准中产品技术指标的数字修约应符合GB/T8170的规定;产品质量合格判定应符合GB/ T 1250-1989中修约值比较

14、法的规定。7.1 抽样按每一发酵罐菌液(或每批固体发酵)加工成的产品为一批，进行抽样检验，抽样过程严格避免杂菌污染。5 GB 20287-2006 7. 1. 1 抽样工具元菌塑料袋(瓶)、金属勺、抽样器、量筒、牛皮纸袋、胶水、抽样封条及抽样单等。7. 1. 2 抽样方法和数量一般在成品库中抽样，采用随机法抽取。抽样以件为单位，小包装以每一包装箱为一件。随机抽取3件5件，每件中随机抽取一袋(瓶); 若每袋(瓶)包装小于500g(或500mL)的产品，应多抽几件。大包装产品以一袋(桶)为一件，随机抽取5件10件，在无菌条件下，每件取样500g(或500mL)，然后将抽取样品混匀，按四分法分装3袋

15、(瓶)，每袋(瓶)不少于500g(或500mL)。7.2 检验分类7.2. 1 出厂检验7.2.1.1 产品出厂时，应由生产厂的质量检验部门，按产品标准规定逐批进行检验，检验合格并签发质量合格证的产品，方可出厂。出厂检验时不检保质期。7.2. 1. 2 出厂检验项目为5.2和5.3.1规定的各个项目，但不包括保质期。7.2.2 型式检验7.2.2.1 有下列情况之一者，应进行型式检验。a) 新产品鉴定时;b) 产品的工艺、材料等有较大更改与变化时;c) 出厂检验结果与上次型式检验有较大差异时;d) 国家质量监督机构进行抽查时。7.2.2.2 型式检验项目为5.2和5.3规定的各个项目。7.3

16、判定规则7.3.1 具下列任何一条款者，均为合格产品a) 检验结果各项技术指标均符合标准要求的产品;b) 在产品的外观、水分、细度、pH值等检测项目中，有一项不符合要求，而其他各项技术指标符合要求的产品。7.3.2 具下列任何一条款者，均为不合格产品a) 有效活菌数不符合技术指标;b) 霉菌杂菌数不符合技术指标;c) 杂菌率不符合技术指标;d) 粪大肠菌群不符合技术指标;e) 蛐虫卵死亡率不符合技术指标;f) 呻、铺、铅、锚、录中任一含量不符合技术指标;g) 有机物料腐熟剂产品中所测酶活不符合技术指标;h) 在外观、水分、细度、pH值等检测项目中，有两项(含)以上不符合要求。8 包装、标识、运

17、输和贮存8. 1 包装根据不同产品剂型选择适当的包装材料、容器、形式和方法，以满足菌剂产品包装的基本要求。产品包装中应有产品合格证和使用说明书，在使用说明书中标明使用范围、方法、用量及注意事项等内容。8.2 标识标识所标注的内容，应符合国家法律、法规的规定。6 GB 20287-2006 8.2. 1 产晶名称及商标应标明国家标准、行业标准己规定的产品通用名称，商品名称或者有特殊用途的产品名称，可在产品通用名下以小一号字体予以标注。国家标准、行业标准对产品通用名称没有规定的，应使用不会引起用户、消费者误解和混淆的商品名称。企业可以标注经注册登记的商标。8.2.2 产晶规格应标明产品在每一个包装

18、物中的净重，并使用国家法定计量单位。标注净重的误差范围不得超过其明示量的土5%。8.2.3 产品执行标准应标明产品所执行的标准编号。8.2.4 产晶登记证号应标明有效的产品登记证号。8.2.5 生产者名称、地址应标明经依法登记注册并能承担产品质量责任的生产者名称、地址、邮政编码和联系电话。进口产品可以不标生产者的名称、地址，但应当标明该产品的原产地(国家/地区)，以及代理商或者进口商或者销售商在中国依法登记注册的名称和地址。8.2.6 生产日期或生产批号应在生产合格证或产品包装上标明产品的生产日期或生产批号。8.2.7 保质期用保质期个月(或若干天、年)表示。8.3 运输运输过程中有遮盖物，防

19、止雨淋、日晒及高温。气温低于OOC时采取适当措施，以保证产品质量。轻装轻卸，避免包装破损。严禁与对微生物菌剂有毒、有害的其他物品?昆装、混运。8.4 贮存产品应贮存在阴凉、干燥、通风的库房内，不得露天堆放，以防日晒雨淋，避免不良条件的影响。7 GB 20287-2006 A. l 营养琼脂A.4 8 蛋白陈牛肉膏氯化铀(NaCl)琼脂蒸馆水pH值氯化铀(N碳酸钙(甘露醇(C;6 硫酸钙(琼脂蒸馆水pH值氧化铀(NaCl)甘露醇(C6H1406)酵母膏0.5%刚果红琼脂蒸馆水pH值硅酸盐细菌培养基.m;糖(C12H22 011 ) 磷酸氢二铀(Na2HP04.12H2Q) 硫酸镜(MgS04.,

20、 7H20) 碳酸钙(CaC03)三氯化铁(FeC13. 6H20) 附录A(规范性附录)常用检测培养基6. 87. 0 5.0 g 2.0 g 0.5 g 0.1 g 0.005 g 琼脂蒸馆水pH值A.5 固氮(茎瘤)根瘤菌培养基乳酸铀(C3H503Na) 磷酸氢二饵(K2HP04 3H20) 磷酸二氢伺(KH2P04) 氯化铀(NaCl)氯化钙(CaC12) pH值葡萄糖(C6硫酸摸(M蛋白陈硫酸亚铁(FeS04.7H20) 可溶性淀粉(C6HlO05)n 18 g 1 000 mL 7. 58. 0 10.0 g 1. 67 g o. 87 g 琼脂18.0 g 蒸馆水1 000 mL

21、 pH值7.27. 4 制法:先将淀粉用少量水加热潜解，再与其他成分?昆合。A.8 联合固氮菌培养基D-葡萄糖酸铀(C6Hll 07 Na) 磷酸二氢饵(KH2P04) 5.0 g 0.4 g GB 20287一20069 GB 20287-2006 磷酸氢二梆(几HP04.3H20) 硫酸馍(MgS04.7H20) 酵母膏氯化饷(NaCl)氧化钙(CaC12) 三氯化铁(FeC13 6H20) 锢酸铀(Na2Mo04.2H20) 琼脂蒸馆水pH值A.9 马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)马铃薯葡萄糖(C6H12 06 H20) 琼脂蒸榴水0.1 g 0.2 g 1. 0g O. 1 g 0.0

22、2 g 0.01 g O. 002 g 18.0 g 1 000 mL 6.87.0 200 g 20.0 g 18.0 g 1 000 mL 制法:称取去皮马铃薯200g，切块煮沸30min，然后用纱布过滤取汁，再加葡萄糖及琼脂，榕化后补足水至1000 mL, 121 oC灭菌30mino A.10 乳酸细菌培养基(MRS)蛋白陈牛肉膏酵母膏拧橡酸氢二钱【(NH4)2HC6 H5 07 葡萄糖(C6H1206 H20) 吐温80乙酸内(CH3COONa3H20) 磷酸氢二梆(K2HP04 3H20) 硫酸馍(MgS04 7H20) 硫酸锚(MnS04 H20) 琼脂蒸馆水pH值A.11 光合

23、细菌培养基10 酵母粉蛋白豚硫酸镜(MgS04 7H20) 氧化钙(CaC12) 蒸情水pH值10.0 g 10.0 g 5.0 g 2.0 g 20.0 g 1. 0 mL 5.0 g 2.0 g 0.58 g 0.25 g 18.0 g 1 000 mL 6. 26. 6 3.0 g 3.0 g 0.5 g 0.3 g 1 000 mL 6. 87. 0 B.1 革兰氏染色荆B. 1. 1 结晶紫染色液CHucker氏配方)甲掖:结晶紫Ccrystal violet) 乙醇(95%)乙液:草酸镀(NH4)2C204 H20 蒸锢水甲、乙两液相氓，过滤，棕色瓶保存。B. 1.2 卢哥(Lug

24、oD氏确液附录B(资料性附录)常用染色荆2.0 g 20.0 mL 0.8 g 80.0 mL 腆(12)片1.0g腆化押(KI)2.0 g 蒸馆水300 mL GB 20287-2006 先搭腆化拥于少量蒸馆水中，再将腆溶于腆化押溶液中，可稍加热，最后加足蒸馆水，棕色瓶保存。B. 1.3 脱色液95%的乙醇液。B. 1.4 复染液0.5%的番红水溶液(safranin0) 2.5%的番红酒精溶液20 mL 蒸馆水80 mL B.2 芽胞染色液B. 2.1 孔雀绿染色液Cmalachitegreen) 孔雀绿蒸榴水B.2.20.5%番红染色液B.3 石碳酸复红染色液甲液:碱性复红(basicf

25、uchsin) 95%酒精乙液:石碳酸(phenoecrystalsC. P) 蒸馆水5.0 g 100 mL 0.3 g 10.0 mL 5.0 g 95 mL 将甲、乙两液混合后即得石碳酸复红染色液原液。染色时，将原液稀释5倍10倍使用。11 GB 20287一2006附录C(规范性附录)稀释法(MPN5管法)C. l 稀释称取样品10.0g，加入带玻璃珠的100mL的元菌水中(液体菌剂取10.0mL加入90mL的无菌水中)，静置20min，在旋转式摇床上200r/min充分振荡30min，即得到1X 101稀释度的菌悬液。用无菌移液管吸取5.0mL上述菌部抑明明嘀崎悻菌水的三角瓶中，充分

26、振荡摇匀，得到1 X 102稀释度的菌悬液，依此方法制, 换无菌移液管)。C.2 加样生臼、菌养T节叫l芋，L菌m无J问养有阱培盛儿3的管巳MPN统计表中查表示。计算方法:C. 5 计数规则国标系取稀释系列中三个连续稀释管的结例如:为5-5-3-0-0时，则取5-3-0数明C. 5. 2 在全部5支试管中均不出现生if5-3-0-0-0时，则取5-3-0数列;C. 5. 3 如果应用上述两条规则，会出现采用如5-5-4-3-0这样的4个等级的稀释度的情况。此时，可先取前面的5-4-3数列，后取4-3-0数列，分别求出IgMPN，然后算出其真数的平均值。在此列中，数列5-4-3的IgMPN为1.

27、447，数列4-3-0的IgMPN为0.431+1C后一数列与前一数列相应稀释了10倍，故要加1进行校正), (1. 447十1.431)-;.-2=1.439，所以MPN=27.5012 GB 20287-2006 表C.lMPN、IgMPN表阳性试管数MPN 阳性试管数MPN 第一第二第三(相当于第一IgMPN 第一第二第三(相当于第一IgMPN 稀释管稀释管稀释管稀释管1毫升)稀释管稀释管稀释管稀释管1毫升)。5 。2. 3 o. 362 。1 。o. 18 0.255-1 5 。1 3.1 0.491 。o. 20 0.301-1 5 。3.3 o. 519 1 。0. 40 0.60

28、2-1 5 4. 6 o. 663 2 。0.45 o. 653-1 5 2 。4. 9 o. 690 2 。1 O. 68 7.0 0.845 2 1 。O. 68 2 9.5 O. 978 2 2 。7.9 0. 898 3 。11. 0 1. 041 3 。14. 0 1. 146 3 。13.0 1. 114 3 2 。1. 230 4 。1. 342 4 。1. 447 4 1 1. 380 4 1 1. 544 4 2 1. 732 4 2 1. 964 4 3 2. 7 2.204 2.255 13 GB 20287-2006 D.1 纤维素酶活的测定D. 1. 1 原理附录D(

29、规范性附录)酶活的测定用竣甲基纤维素铀盐(CMC)作底物，经纤维素酶水解后生成还原糖;3，5二硝基水杨酸(DNS)是一种氧化剂，能与还原糖作用，使硝基还原成氨基，榕液变为橙色，橙色的深度与还原糖的浓度成正比。因此，可采用比色法求得还原糖的含量，进而从还原糖的数量来求得纤维素酶活的大小。D. 1. 2 试剂和溶液a) 磷酸铀缓冲液(0.2mol/L , pH6. 0):将0.2mol/L磷酸氢二铀(Na2HP04) 12. 3 mL和0.2 mol/L磷酸二氢铀(NaHzP04月7.7mL混合即得。b) CMC缓冲液:准确称取O.625 g竣甲基纤维素饷盐，溶于100.0mL磷酸铀缓冲液，加热搅

30、拌使之梅解。c) DNS显色剂:称取10.0g3，5二硝基水杨酸洛于蒸馆水中，加入20.0g氢氧化纳、200.0g酒石酸饵销和500.0mL水，加热榕解后再加入重蒸酣2.0g、无水亚硫酸饷0.5g待全部潜解后冷却，定容至1000.0 mL。d) 1 000g/mL标准葡萄糖榕液:准确称取25.0mg葡萄糖，用蒸馆水定容至25.0mL。D. 1. 3 仪器、设备a) 分光光度计;b) 电子天平;c) 振荡器;d) 培养箱。D. 1. 4 标准曲线绘制取5支大试管，按表D.1用吸管准确吸取标准葡萄糖榕液与磷酸铀缓冲液泪匀，即得各种不同浓度的标准葡萄糖液。表D.1不同浓度标准葡萄糖液的制备试管号标准

31、葡萄糖溶液/mL磷酸纳缓冲液/mL试管中葡萄糖量/g1 。5.0 。2 0.4 4. 6 400 3 O. 8 4. 2 800 4 1. 6 3. 4 1 600 5 3. 2 1. 8 3200 每管中各加3.0mL DNS显色液，摇匀后置于沸水浴中准确加热5.0mn后，流水冷却，摇匀后于490 nm处测定各管的OD值，以葡萄糖的微克数为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线。D. 1.5 原样酶液的制备称取样品10.0g(或10.0mL)，加入装有玻璃珠的三角瓶中，再加入一定体积的蒸馆水稀释，静置20 mn ,200 r/mn振荡30min，然后四层纱布过滤，滤被3000 r/min离心1

32、0min。离心后的上清液根据酶活力稀释至适当浓度，即为原样酶液，供测试用。14 GB 20287-2006 D. 1.6 测定步骤取3支大试管，1支作为空白对照，其余2支作为平行样品管。样品管中加1.0 mL原样酶液，然后3支试管中分别加入4.0mL己预热至60C的CMC缓冲液，在600C的水浴锅中反应20min取出，每管立即加入3.0mL DNS显色液，摇匀后在对照管中再加入1.0 mL原样酶液。将3支试管放入沸水浴中，显色5min后立即取出，流水冷却，用分光光度计于490nm处测其OD值。D. 1.7 纤维素酶活计算根据标准曲线将测得的OD值换算成葡萄糖微克数，按式(D.1)计算酶活力:式

33、中:u=走旦1二mo(丑1) 20 U 样品的酶活，单位为微克每克(g/g)或微克每毫升(g/mL); 走一一一样品稀释倍数;ml一一样品葡萄糖量，单位为微克(g);m。对照葡萄糖量，单位为微克(g); 20 酶与底物反应时间，单位为分钟(min)。1 mL原样酶液，1min产生1g葡萄糖定义为1个酶活力单位(u)。D.2 蛋白酶活的测定D. 2.1 定义1 mL原样酶液，在一定条件下，1min 水解酷素产生lg酷氨酸为1个酶活力单位(u)0 D.2.2 试验方法应符合QB/T1803-1993中A3.2的规定，其中对A3.2. 4. 2具体操作中修改如下:a) 原样酶液的制备称取样品10.0

34、g(或10.0mL)，加入装有玻璃珠的三角瓶中，再加入一定体积的磷酸缓冲液，静置20 min , 200 r/min振荡30min，然后四层纱布过滤，腊、液于3000 r/min离心10min，离心后的上清液根据酶活力用缓冲液稀释至适当浓度，即为原样酶液，供测试用。b) 测定在具体测定中有两点改变:一是温浴反应时间由10min改为30min;二是原静止10min过滤改为3 000 r/min离心5min取上清液。CON-hNON筒。押j国华人民共和国家标准用微生物菌GB 20287-2006 中农9峙中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销9峰印张1.25 字数33千字2006年9月第一次印刷开本880X1230 1/16 2006年9月第一版9峰定价13.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533书号:155066. 1-27935 GB 20287-2006