GB T 23385-2009 饲料中氨苄青霉素的测定.高效液相色谱法.pdf

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1、ICS 65.120 B 46 道自中华人民共和国国家标准GB/T 23385-2009 饲料中氨韦青霉素的测定高效液相色谱法2009-03-26发布Determination of ampicillin in feed一High performance Iiquid chromatography 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会2009-07-01实施发布G/T 23385-2009 目U吕本标准的附录A为资料性附录。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)提出并归口。本标准起草单位:黑龙江省兽药饲料监本标准主要起草人:金慧然、吨且晴在、范锡龙、

2、郭文欣、恤I 飞1 范围饲料中氨韦青霉素的测定高效液相色谱法本标准规定了用高效液相色谱(HPLC)法测定饲料中氨韦青霉素的含量。GB/T 23385-2009 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中氨韦青霉素含量的测定.本标准检出限为1.0 mg/问，定量限为5.0mg/悔。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单不包括勘误的内容或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验

3、方法(GB/T6682- 2008, ISO 3696:1987 , MOD) GB/T 14699. 1饲料采样(GB/T14699.1-2005,ISO 6497:2002 ,IDT) GB/T 20195 动物饲料试样的制备(GB/T20195-2006, ISO 6498:998,IDT) 3 原理用磷酸盐缓冲液提取试样中的氨韦青霉素，高效液相色谱仪反相色谱系统分离，紫外检测器或二极管矩阵检测器在波长220nm处进行定性、定量测定。4 试剂和溶班除非另有规定，在分析中仅使用确认为分析纯试剂和符合GB/T6682规定的一级水。4. 1 乙睛z色谱纯。4.2 磷酸二氢饵溶液，c(KH2PO

4、.)=0.02mol/L:准确称取2.72g磷酸二氢饵于1000mL容量瓶中，加水溶解稀释至刻度。4.3 提取液:磷酸二氢饵溶液(4.2)+乙脯(4.1)=19+1.4. 4 HPLC流动相z取920mL磷酸二氢饵溶液(4.2)和80mL乙腊(4.1)，混合均匀，通过0.45m的溶剂微孔过滤膜过滤，使用前用超声波脱气。4.5 氨韦青霉素标准贮备液z准确称取氨带青霉素标准品含量不少于86.5%)50吨精确至0.00001 g) , 于50mL容量瓶中，用超纯水溶解井定容至刻度，摇匀。其溶液浓度为1.0 mg/mL，贮于4c 6 c冰箱中，有效期2d。4.6 氨韦青霉素标准工作液=准确移取氨带青霉

5、素标准贮备液(4.5)适量，用水稀释成浓度分别为1.0g/mL、5.0g/mL、10.0g/mL、25.0g/mL、50.0g/mL、100.0g/mL，现用现配。5 仪器和设备5. 1 分析天平:感量为0.00001 g和0.0001 g各1台。5.2 高效液相色谱仪z配紫外检测器或二极管矩阵检测器。5.3 超声波清洗机。5.4 振荡器。G/T 23385-2009 5. 5 离心机。5.6 涡旋混合器。5. 7 微孔滤膜:0.45n106 试样帘l备6. 1 按GB/T14699. 1采样6.2 选取有代表性样品至少500毡，按G/T20195进行样品制备，精碎.全部通过孔径为0.45ll

6、J汩的孔筛，充分混匀，装入密闭容器中，避光保古-7 分析步黯7. 1 试样溜班的制备称取饲料样品5g , 荡器上振荡提取5min 滤膜，供高效液相色t7.2 色谱条件色谱柱:C1S柱柱温:室温。检测器:紫外流动相:磷-8 结果的计算与/ m一一试样质量，单位为克(g)。平行测定结果用算术平均值表示，保留三位有效数字。9 重复性同一分析者对同一试样同时两次平行测定结果的相对偏差不大于10%.2 mL提取液(4.3).子振附景A 资料性附最氯誓膏霉素标准样晶色谱固图A.l给出了氨苇青霉素高效液相色谱图.mAU 120 1 80 60 40 20 。3 4 固A.l10.6钊5 6 7 8 9 10 11 氯誓膏霉最高效液相色晴条件下标准样晶色遭困GB/T 23385-2009 12 nun