GB T 19182-2003 咖啡 咖啡因含量的测定 高效液相色谱法.pdf

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1、G/T 19182-2003/180 15，1992 前本标准等同采用国际标准ISO10095: 1992(咖啡一句咖啡因含量的测定高效液相包谱法队本标准由中华人民共和雷农业董事提出.本标准由农业部热带作物及制品标准化技术委负会归口。本标准起草单位z华商热带农产品加工设计研究所。本标准主要是草草人2黄幸福毛程雪梅、llj-英。本标准为首次发布。I GB/T 19182-2003/ISO 10095.1992 1 范醺咖啡咖啡因含量的溜走高效液榈色谱法本标准规定用高效液相色谱测定普通的和脱咖啡因的生咖啡和熔妙咖啡豆，以及普通的和脱咖啡囚的咖啡拍提秘中的咖啡因含量的一矜方法.2 魏范饺害!湾文件下

2、列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改岛生(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否巧使用这些文件的盖章新版本e凡是不注5期的引用文件，其最新版本适用于本标准。lS0 1447 ,1 978 生咖啡一一水分含量的测定常规法lS0 3726.1983 速溶咖啡一一夜70C减压条件下减童的测定ISO 4072 袋装咖啡取样ISO 6670 村里箱装速溶咖啡取牛羊ISO 6673.1983 g;:_咖啡一一在105C下减重部测定3 原琅将试料放入水中.加热至90C，在有氧化续存在的条件下，拍摄咖啡因并过滤

3、，然后用苯基改饺二氧化磁徽位将全董事拢援液纯化，使用就有紫外捡瘾君器的高效液褪色滋仪草草定其嘟啡盟军含量e4 试剂除非另有规定，只能使用确认的分析级试剂，以及然馆水或脱矿物质水或与之等效纯度的水。在1原董事，滚裙色滋绞。4.2 氨挥军液(0.3 mol!L) 甲醇，90, 10体积混合液，4.3 洗提溶剂，纯化校用，甲醇g水乙酸，75, 25 , 1体积混合液。4.4 流动相，甲醇s水，30 70体积混合液。草草600mL甲醇(4.1)倒入2L单辛苦容量瓶内，加水窒刻度，混合后混合液用孔径为0.45严m过滤器过滤e4.5 乙畔=水，1 4体积混合液。4.6 氧化续。4.7 咖啡因储备液z相当于

4、每升含0.5g咖啡因溶液。称取125mg咖啡囚，精确O. 1 mg，放入250mL稼忽波璃容量瓶内，并用乙醇z水(4.5)主在至丰满，咖啡因溶董事后，再加指爵的乙董事z水混合液到j刻度。该擒液在冰箱内可保存一个月。4.8 咖啡因标准溶液A，相当于每升含0.010g咖啡因，用于脱咖啡因的产品。将储备液(4.7)郊器甚至室温后，用被移管(5.12)吸毒呈2黯L移人1mL单标容缓#在内，用水补充至刻度并摇匀。该溶液于当日配制使用。l GB/T 191822003/ISO 10095: 1992 4.9 咖啡因标准溶液B.相当于每升含0.05g咖啡郎，屑于普通的产品。将储备液(4.7)加热至室温后，用

5、吸移管(5.12)吸取5mL移入50mL单标容量瓶内，并用水补充至刻度并摇匀。5 仪毒普普通实验鑫仪器，特别是下列各项。5. 1 离效液秘色谱仪，配有紫外检测器，允许使用的波长在254nm至280nm之闵岱装有一台楼刻度记录纸的记录仪。测定时最好选择接近280nm处，因为咖啡因最大吸收波长是在272nm , 5.2 离效液栩色谱用的色i普拉C18盟，最好是微球辈辈，并至少具有50个理论塔级数量蚀链。一条柱的理论塔板数N.可以根据注入纯咖啡因标准溶液，而得到的峰形进行如下计算。N = 5.54吐了.( 1 ) 式中2t一峰部保留时间zw-半峰宽度。5.3 纯化柱，瓶子反丰富色层分离)法。柱部容量

6、3mL，是用子数教平均大小为40严m苯J毒攻性的二氧化硅填充。注在反梅E罢析中，ffl苯基玫梭的3mL Baker SPE柱是一种可在市场买到的适用产品，这是给使用本国际标准她人员提供方便的信息。而不是国际标准化组织对这产品的认可。5.4 咖啡磨.适用于麽碎蜡妙的咖啡豆。5.5 饿齿轮麟，装有冷却套s或者分析磨、装有万片和冷却禁;或者其他适于磨碎1:.咖啡豆的磨。5.6 筛，用金j溪材料织成，其子L径大小为630m，5. 7 过滤器，其微孔大小为0.45m，5.8 水浴锅，能在90C土1C温度下连续搅持工作。5.9 分析天平1能称毅精确王O.o 1 g , 5. 10 螺旋盖瓶子，容量为250

7、mL试剂瓶。5. 11 单标容缝瓶，容量为10mL、50担L、100mL、250自L和21-，5. 12 吸移管，容量为2.0mL、5.0mL、10.0mL。6 取样袋装咖啡取样按IS04072执行。衬里箱装速挥军咖啡取样按ISO6670执行。7 主式样约草j备若有必要，用5.4成立5所规定的设备研磨，直至试样能通过(5.们所述的筛网为止。8 操作程序8. 1 子物质含量量的吉普测定一部分试样巾的水分含量，用于计算干物质的含量，并接下列方法进行。ISO 1447军XISO 6673.扇子生咖啡。ISO 3726用于速溶咖啡。对手其他类别在专替自啡以及从湖啡衍生灼产品，将按未来的居际标准执行。8

8、.2 试料2 GB/T 19182-2003/ISO 10095 , 1992 8. 2. 1 普通的和脱咖啡园的生咖啡或精妙嘟啡z称取这种试样1g，精确至0.00019, 8.2.2 普通的和磁露宿将层的速溶咖啡粉=称取这种试祥乱5罩，精确至O.号001富。8.3 咖啡因的提取8. 3. 1 把试料(8.2. 1或8.2. 2)放入250mL的瓶中(5.10)，加入氧化缓4g土0.5g以及水100日，称瓶和内攘物的质量，精确至0.1g. 8.3.2 釜好瓶子，撼匀内盛物，把瘾秘内盛物童子90C水浴上继续搅拌20min.冷却瓶子及内援物，再次称堡，精确至0.1g。其质量应等子8.3.1所测定的

9、质量。8.3.3 若质量不一致，取另一试料按(8.3. 1和8.3. 2)另一次提取。8.3.4 将溶液静置，转移部分溶液并用过滤器(5.7)过滤。8.4 滚滚的提纯夜溶液发生任何分离前，需准备好纯化柱(5.3)。8. 4. 1 纯化柱的制备辈革自己纯化柱如图1所示。打开活塞，用5mL Ifl董事(4.1)洗涤柱子，其对需调节活塞，使其达到满注，当在二氧化硅面保持有1 mm-2 mm军醇对，关闭活塞。加水5mL，再次打开活塞，哥在当二氧化硅lli保持有1四盟-2mm水时，再次关闭活塞。不允许柱于泪，否则常重做。1-注射器32拉;3-f哥苯基改性的:工载化硅g一1mm-Z mm EJ*醉z水$5

10、-活塞打开或活关闭。8.4.2 激将盟幸亏吸收5 固1纯化校的制备F自吸移管吸取溶液至2往中，选挎方法有两种za) 对于普通咖啡或咖啡提取物，吸取从8.3.4获得的滤液2.0mL。3 GB/T 19182-2003SO 10095: 1992 b) 对于脱咖啡因咖啡或脱咖啡园的咖啡提取物，吸取从8.3.4获得的滤液10.0mL. 满节活寨，使溶液漓泼，在液远吉普降3在低于二氧化破草吉普才关上活塞。8.4.3 脱除不需要的化食物首先打开活塞，加入2.5mL氨溶液s甲醇的混合液(4.幻，在液面刚刚降低于二氧化硅面时，关上活塞。再次加入2.5mL混合液(4.幻，使其完全流过枝。然后吹人约30mL空气

11、通过柱子，以便尽可能多地磁徐混合液(4.2)司注军在这个阶段的操作穰序中，在可能变成千池。8.4.4 咖啡因的洗提将10mL单标容量瓶嫂子柱的下端，打开活塞而且加入7.5mL(4. 3)洗提溶剂，调节活塞使之滴泣，让洗是挥j1J完全流人容缝瓶，用水如刻度并摇匀内援物。8.5 离效液秘色谱分新8. 5. 1 仪稽的调整装配好色谱仪(5.1).按以下条件进行调整z按所使用的拄见5.2)调流动相(4.4)的流速在0.5mL/min至1.5 mL/min之间，柱(5.幻的温度在垂在C.注2通过升高柱温也能改静峰值分离效果，假不能超过60(;。8.5.2 分析在流动相(4.4)的流迹和柱温稳定后，将从8

12、.4.4所得的试液10L注入柱中，而且若以等体积标准咖啡因滚液(4.8或4.9)泼入控中。注2常规Heer法溅，可以满足嘟啡园的浓度大军O. 025 g/L，这个水平离于黑本试验方法的嘟啡部浓度，但这不会导致仪器的偏差，光度与咖啡因浓度校撒幽线。9 结果的理提示样品令普雷待l!iI含量以辈革100g子物质所含部克数表示29.1 用于普通熔炒咖啡、咖啡或速溶咖啡粉zA, 10 X 100 100 兰兰xc, X一一一一一一一一一一一一X100 ( 2 ) A, . . -. . 2 X m, X 1 000 . R舍式中gA 从试液中得到j灼咖啡民蜂舵在哥积$A, .-从标准咖啡因溶液中得到的咖

13、啡因峰的面积pc，扫一标准咖啡因溶液的浓度(4.9) .单位为克每升(g/L)1 mo一一试料的质量，单位为克(g); R，一试祥觅8.1)子物质含量部盖章f量百分率a9.2 用于脱咖啡因自告熔炒咖啡或生咖啡或咖啡粉z式中gA. 10x100 .100 二三XC2 X一一一L一一一一一X 100 ( 3 ) 10 X mo X 1 000 R, C，一一标准咖啡因滚滚的浓度(4.衍，单位为克每升(g/L)。10 精密度10. 1 重援性在短绑内，用指向的设备、格同约操作人员，并在商-3军基金室，用完全怨阔的试验材料进行试验，获得的两个单独试验的结果绝对误差，应不超过表1所列的数值。4 GB/T

14、 19182-2003/150 10095 :1 992 亵1重复校和再现位样品嘟时卡因吉量/(g/100g咖啡重复性/(g咖啡因1100g咖啡再理性/(g咖啡囡/100g咖啡蜡妙咖啡豆电20.07 0.34 句l0.04 O. 12 E盖嘟啡嚣的熔纱哥哥哥F豆号.1 .01 0.02 速扭串咖啡句40.09 0.36 脱咖啡因的0.3 0.02 0.03 遮割草咖啡10.2 尊王理性用不阔的设备、不向稳操作人员，在不岗的实验寞，对完全相同的试验材科，以榕在哥的方法进行试验，获得的两个单独试验的结果绝对谈堂堂，应不超过袭1所列数值。11 试验报告试验报告至少应绘出以下几个方攘的内容z一一试样p一使用的标准(包括发布或出版年号); 一使用的方法(如果标准中包括几个方法); 一一结果，包祭涉及结果计算擎的内容，一一与基本分析步骤的差异，. 一一观察到的异常现象;一试验日期。5