SC T 3024-2004 腹泻性贝类毒素的测定.生物法.pdf

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1、ICS 67.050 B 50 华人共和7 . = 丁非暴SC/T 3024-2004 月重泻E毒素的测自生ADetermination of diarrhoea shellfish poison Bioassay 2004-0个07发布2004 -03 -01实施华人民租国农业部发布中华人民共和圄水产行业标准腹泻性贝类毒素的测定生物法SC/T 3024-2004 -9毛甲.、中国农业出版社出版(北京市朝阳区麦子店街18号楼)(邮政编码:100026 闷址:) 中国农业出版社印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经销子令子开本880mmx 1230mm 1/16 印张0.5字数5千字20

2、04年2月第1版2004年2月北京第1次印刷书号:16109. 306 印数:1-1 000册定价:6.00元版权专有侵权、究举报电话:(010) 65005894 SC/T 3024-2004 目日西本标准参考了日本厚生省推荐使用的腥泻性贝类毒素的测定方法c本标准的附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准起草单位:国家水产品质量监督检验中心、中国水产科学研究院东海水产研究所。本标准主要起草人:王联珠、袁联、李晓川、冷凯良、陈亚瞿、蒋玫。I SC/T 3024-2004 腹泻性贝类毒素的测定生物法1 范围本标准规定了腹泻性贝类毒素(DSP)的测定方法一一生物法c本标准适用于

3、软体动物贝类可食部分中腹泻性贝类毒案(DSP)的测定32 原理用丙酣提取贝类中毒素，再转移至乙融中.经i戚压浓缩蒸干后，再以l%吐温-60生理盐水溶解残留物，注射小鼠，观察存活情况，计算其毒力33 试剂和材料3.1 丙酣(分析纯)0 3.2 乙酶(分析纯)0 3.3 1 %吐温-60生理盐水:称取1.0g吐温-60，溶于生理盐水(0 .8% )laCl)中.并定容至lOO.OmLc 4 仪器和设备4.1 旋转蒸发器c4.2 均质器c4.3 磨口烧瓶:圄底，500 mL、lOOmL4.4 布氏漏斗:们00mmo 4.5 分;夜漏斗:具塞，500 mL 4.6 天平:感量0.1gc 4.7 刻度试

4、管:10 mL. 4.8 冰箱:0(-5(和l5(-20C。4, 9 注射器:1 mLo 4.10 注射器针头:8: 0 4. 11 小鼠:体重为16g-20 g的健康ICR系雄性小鼠=5 检样的制备5.1 生鲜带壳的贝类a)用清水彻底洗净贝类外壳，开亮.用清水淋洗内部去除泥沙及其他外来杂质，仔细取出贝肉切勿割破肉体;b)收集贝肉，沥水5mi口，捡出碎壳等杂物，迅速冷冻，贮藏备用;c)注意不要破坏闭壳脱以外的组织，尤其是中肠腺(又称消化盲囊，组织呈暗绿色或揭缘色):开壳前不能加热或用麻醉剂c5.2 冷冻贝言是在室温下，使冷冻的样品(带亮或去壳的)冷冻状态.按5.1方法清洗、开壳、淋洗、SC/T

5、 3024-2004 取肉c5.3 取样a)可以切取中肠腺的贝类(扇贝、贻贝、牡厉等)称取200g贝肉后，仔细切取全部中肠腺，将中肠腺称重后细切i昆合作为检样，注意不要使中肠内容物污染案板;b)对于尚未确定部位毒性的贝类及不易切取中肠腺的小型贝肉，可将全部贝肉细切、混合，作为检样;c)为避免毒素的危害，应戴手套进行检验操作，移液管等用过的器材应在5%的次氯酸铀溶液中浸泡1h以上，以使毒素分解;废弃的提取准等也应用5%的次氨酸纳j容液处理c6 提取6. 1 取5.3a)处理的中肠腺，或5.3b)处理的200g贝肉置于均质杯内，均质2minc 6.2 加3倍量丙剧，与样品充分搅拌均匀后，用布氏漏斗

6、抽滤并收集提取液c对残渣以检样两倍量丙酣再次抽滤两次，合并抽滤;夜:6.3 将抽提液移人500mL的磨口烧瓶中，减压i农缩(旋转蒸发器，56C)去除丙剧，直至在液体表面分离出油状物G6.4 将被培液移入分i夜漏斗内，以100mL 200 mL乙酷和少量的水洗下粘璧部分，轻轻振荡(不能生成乳油液)，静置分层后，去除水层(下层)，用相当乙融半量的蒸情水洗乙路层两次，再将乙酷层移入250mL的磨口烧瓶中，(戚压i衣结(旋转蒸发器，35CC)去除乙酶c6.5 以少量乙髓将被缩物移人100mL磨口烧瓶中，再次减压浓结去除乙酷二66 以1%吐温-60生理盐水将全部浓编物在刻度试管中稀释到10mL此时1mL

7、式液相当于20g 去壳贝肉的重量，以此悬浮液作为试验原液c6 7以试验原;副主射小鼠，24 h内3只均死亡时，需将试验原液进一步稀释，再注射小鼠c稀释前，应先振荡使j容;夜成均匀悬浮液，再取部分试;夜以1%吐温-60生理盐水稀释。7 小黑试验7.1 以振荡器使试;夜或其稀释;夜成为均匀的悬浮液c7、2将每只小鼠称重，每三只小鼠为一组，分别将1mL试液注射到小鼠腹腔中。7.3 同时，另取三只小鼠作为对照组，注射1mL 1%吐温-60生理盐水于腹腔中乙7.4 观察自注射开始至124 h盾的小鼠存活情况，求出一组三只中死亡两只及两只以上的最小注75 小鼠注射腹泻性贝毒后的症状为运动不活泼，大多呼吸异

8、常，致死时间长28 结果计算和表述8.1 毒力的计算使体重16g20 g的小鼠在24h死亡的毒力为1个小鼠单位(MU)样品中DSP毒力的计算，按表1选择24h内死亡两只及两只以上鼠的最小注射量及最大稀释倍数进行计算8.2 注射量与毒力的关系注射量与毒力的关系见表10? 表1注射景与毒力的关系试验;夜注射量检样莹a日1Lg 原;夜1. 0 20 原i夜0.5 10 2倍稀释:夜1. 0 10 2倍稀释;夜。恤53 4倍稀释;夜1.0 3 4倍稀释;夜0.5 2.5 8倍稀释;夜1. 0 2.5 8倍稀释;夜0.5 1. 25 16倍稀释;夜1. 0 1. 25 16倍稀释:夜0.5 0 ,625

9、 以中肠腺为检样时，指当于含有中肠踪的去完贝肉量3SC/T 3024-2004 ?rU/g 。，050.1 0.1 0.2 0.2 0 .4 0.4 0.8 。刨81. 6 气J 寸CON-寸NO的伊们的附录A(资料性附录)本标准与日本厚生省栋准的技术辈辈异及原因SC/3024-2004 表人.1为本标准与日本厚生省标准的技术差异及原因一览表。表A.l本标准与日本厚生省标准的技术差异及原因本标准的掌条技术性差异原因捕前言、标准的全文|!东、方法标准的格式与此完全不同标准格式采用GBfL 1-2000的规定5 !苦-9主主文字叙述中有部分改动，将原文中的大段文字按GB1.1-2000的要求，将标准条文细化，修改为逐条叙述使其更有逻辑性、更有条理，使用便捷原标准为必、妥时，对试验溶液PJf放进一步稀6 7 辛辛.，现改为以试验原液注射鼠时.24 h内3E在清楚说明筒妥稀释时的情况，便于试验时的绿只均死亡时，需将试验原液进一步稀辛辛，再注射ft 鼠书号:16109. 306 股权专有侵权必究举报电话:(010) 65005894 定价:6.00元-与-SC!T 3024-2004