DB36 Z 003-2022 粮食中黄曲霉毒素 B1、玉米赤霉烯酮、脱氧雪腐镰刀菌烯醇的检测 量子点微球荧光免疫层析法.pdf

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1、ICS 67.060CCS B 22DB36江 西 省 地 方 标 准 化 指 导 性 技 术 文 件DB36/Z 0032022粮食中黄曲霉毒素 B1、玉米赤霉烯酮、脱氧雪腐镰刀菌烯醇的检测 量子点微球荧光免疫层析法Determination of aflatoxin B1,zearalenone and deoxynivalenol in grainQuantum dot microsphere lateral flow immunoassay2022-12-06 发布2022-12-06 实施江西省市场监督管理局发 布DB36/Z 0032022I目 次前 言.II1范围.12规范性引用

2、文件.13术语和定义.14原理.15试剂和材料.16仪器和设备.27试样制备.28测定步骤.29结果表述.310其他.3DB36/Z 0032022II前 言本文件按照GB/T 1.1-2020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由江西省市场监督管理局提出并归口。本文件起草单位：南昌大学、江西省市场监督管理局、江西省检验检测认证总院、江西维邦生物科技有限公司。本文件主要起草人：赖卫华、李越凡、余颐、刘文娟、罗凯、张威、郭平、熊华亮、熊勇华、陈媛、李响敏、彭娟、黄小林、唐丽君、肖小月、吴梦

3、云、唐艳艳、李雯、蒋峰华。DB36/Z 00320221食中黄曲霉毒素 B1、玉米赤霉烯酮、脱氧雪腐镰刀菌烯醇的检测 量子点微球荧光免疫层析法1范围本文件规定了粮食中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇的量子点微球荧光免疫层析检测方法。本文件适用于大米、玉米、小麦中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇的快速检测。本方法检测黄曲霉毒素B1的检出限为1 g/kg，定量限为2 g/kg；检测玉米赤霉烯酮的检出限为10g/kg，定量限为20 g/kg；检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇的检出限为50 g/kg，定量限为150 g/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。

4、凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 5009.22食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定GB 5009.111食品安全国家标准食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定GB 5009.209食品安全国家标准食品中玉米赤霉烯酮的测定GB/T 5491粮食、油料检验 扦样、分样法GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4原理本方法以量子点微球为荧光标记物，基于竞争抑制免疫层析技术原理，通过荧光免疫分析仪进行数据读取和分析，根据已设定的标准曲线计算

5、样品中待测物质的含量，对黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇进行定量检测。5试剂和材料除另有说明外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。5.1乙腈（C2H3N）。5.2氯化钠（NaCl）。5.3氯化钾（KCl）。5.4磷酸氢二钠（Na2HPO4）。DB36/Z 003202225.5磷酸二氢钾（KH2PO4）。5.6试样提取液（84%乙腈-水溶液）：吸取 84 mL 乙腈（5.1），用水定容至 100 mL，混匀。5.7试样稀释液：分别称取氯化钠（5.2）8 g、氯化钾（5.3）0.2 g5.8磷酸氢二钠（5.4）1.44 g、磷酸二氢钾（5.5）0.2

6、g 于 1000 mL 烧杯中，加水充分搅拌溶解后定容至 1000 mL。6仪器和设备6.1分析天平：感量为 0.01 g。6.2微量移液器：量程为 20L200 L、100 L1000 L 和 1mL10 mL。6.3旋涡混合器：转速2500 r/min。6.4恒温孵育器：设定温度为 37，误差不超过1。6.5荧光免疫分析仪：激发波长为 360nm5 nm，发射波长为 610nm5 nm。6.6离心机：转速4000 r/min。6.7离心管：1.5 mL 和 50 mL。6.8高速粉碎机：转速30000 r/min6.9分样筛：20 目。6.10黄曲霉毒素 B1、玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌

7、烯醇量子点微球免疫层析包装盒：含量子点微球免疫层析试纸条和标准曲线内置卡（ID 卡），ID 卡内设对应批次标准曲线。7试样制备7.1分样和粉碎将原始样品充分混匀，按照GB/T 5491方法中的四分样方法进行分样，用高速粉碎机（6.8）粉碎后过20目分样筛。7.2试样前处理7.2.1称取 5g 0.05 g 粉碎试样于 50 mL 离心管中，加入 25 mL 样品提取液（5.6），漩涡震荡混匀 2min，4000 rpm 离心 2 min，如无离心机可静置 2 min。7.2.2检测黄曲霉毒素 B1：取 50 L 离心后上清液加入 950 L 试样稀释液（5.7）混匀后用于检测。7.2.3检测玉

8、米赤霉烯酮：取 50 L 离心后上清液加入 700 L 试样稀释液（5.7）混匀后用于检测。7.2.4检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇：取 50 L 离心后上清液加入 700 L 试样稀释液（5.7）混匀后用于检测。注：不同厂家量子点微球免疫层析试纸条所用的样品前处理方法可能不同，应按照产品使用说明中规定方法进行操作。8测定步骤8.1测试前打开荧光免疫分析仪（6.5），确认包装盒中的 ID 卡与产品批号是否匹配，插入 ID 卡，在仪器测试界面点击“读卡/读项目”，界面出现“读取完成”，点击“确认”即可使用。8.2将恒温孵育器（6.4）开机，待温度升至 37即可使用。8.3从密封包装袋中取出量子点微球免疫

9、层析试纸条，在 30 min 内使用。DB36/Z 003202238.4将检测卡平放，用微量移液器吸取 90 L 稀释后的待测液于量子点微球免疫层析试纸条的加样孔（S）中，在恒温孵育器中 37孵育反应 10 min。8.5反应时间结束后立即将量子点微球免疫层析试纸条插入荧光免疫分析仪中，点击仪器界面的“测试”，仪器会自动给出定量测试结果，15 min 内测试，结果有效。注：不同厂家荧光免疫分析仪所用仪器界面设置可能不同，应按照仪器使用说明中规定方法进行。9结果表述样品中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量由荧光免疫分析仪自动计算并显示，单位为微克/千克（g/kg）。10其他10.1注意事项：使用前请仔细阅读说明书，仪器的具体操作详见仪器操作说明书；检测卡为一次性使用，检测时请勿触摸检测卡结果显示区，并避免阳光直射和电风扇直吹；请勿使用自来水、蒸馏水或去离子水作为阴性对照；结果的确证需要使用国家规定的参比标准方法进行。10.2本方法参比标准方法按照 GB 5009.22、GB 5009.111 和 GB 5009.209 的规定执行。