SF T 0113-2021 血液中氰化物的气相色谱-质谱和气相色谱检验方法.pdf

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1、 ICS 07.140 CCS C06 SF 中 华 人 民 共 和 国 司 法 行 政 行 业 标 准 SF/T 0113 2021 代替 SF/Z JD0107002 2010 血液中氰 化物的气 相色谱- 质 谱和气相 色谱 检验方法 Determination of cyanide in blood by gas chromatography-mass spectrometry and gas chromatography 2021 - 11 - 17 发布 2021 - 11 - 17 实施 中华人民 共和国 司 法部 发 布 SF/T 0113 2021 I 目 次 前言 . II

2、 1 范围 . 1 2 规 范性 引用 文件 . 1 3 术 语和 定义 . 1 4 原理 . 1 5 试 剂、 仪器 和材 料 . 1 6 定 性分 析 . 2 7 定 量分 析 . 3 8 分 析结 果评 价 . 5 附录A （资 料性 ） 血液 中氰根 离子 的检 出限 和定 量限 . 7 SF/T 0113 2021 II 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标 准化 工作 导则 第1 部分： 标准 化文 件的 结构 和起草 规则 的 规 定 起草。 本文件 代替SF/Z JD01070022010 血 液中 氰化 物的 测定 气相 色谱 法 ， 与SF/Z JD01070

3、022010 相比， 除结 构调 整和 编辑 性改动 外， 主要 技术 变化 如下： a) 增加了 血液 中氰 化物 的气 相色谱-质 谱方 法(见第 6 章、7.1.1 和7.2.1.1) ； b) 增加了 定量 分析 中进 样 和 记录等 内容(见7.2.2 和7.3.1) ； c) 增加了 内标-工 作曲 线法、 内标- 单点 校正 法和 外标- 单点校 正法 （见 7.3.2 、 7.3.3 和 7.3.5）； d) 增加了 分析 结果 评价 （见 第 8 章 ）。 请注意 本文 件的 某些 内容 可能涉 及专 利。 本文 件的 发布机 构不 承担 识别 专利 的责任 。 本文件 由

4、司 法鉴 定科 学研 究 院提 出。 本文件 由 司 法部 信息 中心 归口。 本文件 起草 单位 ： 司 法鉴 定科学 研究 院。 本文件 主要 起草 人： 刘伟 、向平 、乔正 、 严慧 、沈 保华 、 卓先 义。 本文件 及其 所代 替文 件的 历次版 本发 布情 况为 ： 2010 年首 次发 布为SF/Z JD01070022010 ； 本次为 第一 次修 订。 SF/T 0113 2021 1 血 液中氰 化物的气 相色谱- 质 谱和气 相色谱 检验方法 1 范围 本 文件 描述 了血 液中 氰化 物的 气 相色 谱- 质谱 和 气 相 色谱检验 方法 ， 包括 原理 、 试剂 、

5、 仪器 和材 料、 定性分 析 、 定量 分析 以及 分析结 果评 价。 本 文件 适用于 血液 中氰化 物的 气 相色谱-质谱 的 定 性 、定量 分析 及 气相 色谱定 量分析 ，其 它 检材 中 氰化物 的 定 性定 量分 析 参 照使用 。 2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款 。 其 中 ， 注日 期的 引用 文件 ， 仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件； 不注 日期 的引 用文件 ， 其 最新 版本 （包 括所有 的修 改单 ） 适 用 于 本 文件。 GB/T 6682 分 析实 验室 用 水规格

6、 和试 验方 法 GA/T 122 毒物 分析 名词 术语 3 术语和 定义 GA/T 122 界 定的 术语 和定 义适用 于本 文件 。 4 原理 氰化物 在酸 性条 件下 形成 氢氰酸 ， 氢 氰酸 易挥 发为 氰化氢 气体 ， 用 气相 色谱- 质谱法(GC-MS) 进行 检 测，以 保留时 间、 特征碎 片离子 和离子 丰度 比进行 定性分 析；以 定量 离子峰 面积为 依据， 用气 相色谱- 质谱法 （GC-MS ） 以 内标 法 进行定 量分 析， 或以 氰根 离子衍 生化 物峰 面积 为依 据， 用 气相 色谱-电 子捕 获 检测器 法（GC-ECD ） 以外 标法进 行定 量

7、分 析 。 5 试剂、 仪器 和材 料 试剂 试验用 水应 符 合GB/T 6682 中规 定的 三级 水。 除 另有 说明外 ， 在 分析 中所 用的 试剂均 为分 析纯 ， 试 剂包括 ： a) 氰化钠 或氰 化钾 ，纯 度95% ； b) 磷酸； c) 二氯甲 烷； d) 4%氢氧 化钠 溶液 ； e) 0.5%氯胺 T 溶液 ； f) 氰根离 子(CN - ) 对照 品储 备 液：精 密称 取氰 化钠 或氰 化钾5.1 a ） 适量 ，用 4%氢氧 化钠 溶 液 5.1 d ） 配成1.0mg/mL 的氰根 离子(CN - )储 备液 ， 密封 ， 置 冰箱 中冷 藏保 存 ， 有 效

8、期 为 12 个 月； g) 氰根离 子(CN - ) 对照 品工 作 液： 试 验中 所用 其它 浓度 氰根离 子(CN - ) 对照 品工 作 液均由 氰根 离子 (CN - ) 对照 品储 备液5.1 f ），用 4% 氢氧 化钠 溶液5.1 d ）稀 释而 得， 密封 ，置冰 箱中 冷 藏 保存， 有效 期 为3 个 月； h) 内标二 氯甲 烷储 备液 ： 精 密称取 适量 二氯 甲烷5.1 c ） ， 用 甲醇 配 成1.0mg/mL 二氯 甲烷 储备 液，密 封， 置 冰 箱中 冷冻 保存， 有效 期 为 12 个月 ； SF/T 0113 2021 2 i) 内标二 氯甲 烷工

9、 作液 ：将 内标二 氯甲 烷储 备液5.1 h）用 水稀 释， 得10ng/mL 内标 二氯 甲烷 工作液 。临 用前 配制 。 仪器和 材料 仪器和 材料 包括 ： a) 气相色 谱- 质谱 仪 ： 配有 电 子轰击 源（EI）； b) 气相色 谱仪 ： 配 有电 子捕 获检测 器 （ECD ）； c) 顶空自 动进 样器 ； d) 精密移 液器 ； e) 电子天 平： 分度 值0.1mg ； f) 顶空进 样瓶 ：10mL ； g) 硅橡胶 垫； h) 铝帽； i) 密封钳 ； j) 恒温水 浴锅 ； k) 进样针 ：0.5mL 。 6 定性分 析 样品前 处理 6.1.1 案件样 品

10、取血液 样 品0.5mL 置于 10mL 顶空 进样 瓶 中， 加入10ng/mL 内标 二氯 甲烷 工作 液5.1 i ）0.5mL ， 再加 入 100L 磷酸5.1 b ）， 立即 加盖 密封 ，混 匀 ，待加 热 后 进样 。 6.1.2 控制样 品 取空白 血液 样 品0.5mL 两 份， 一 份作 为空 白样 品， 一 份添加 氰根 离子(CN - )对 照 品工作 液5.1 g ） ， 制得 0.05g/mL 添加 样品 ，加入 10ng/mL 内标 二氯 甲烷 工 作液5.1 i ）0.5mL ，然 后按 照 6.1.1 方法 操作。 仪器分 析 6.2.1 仪器条 件 仪器

11、参 考条 件如下 ， 应用 时 可根 据不 同品牌 仪器 的 实际情况 进 行调 整 。 a) 色谱柱 ：GC-GASPRO (30m0.32mm) 毛 细管 柱或 其它 等 效柱 ； 注： GC-GASPRO 柱为Agilent 公司产 品的商品名称， 给出这一信息是为了方便本 文件的使用者， 并不是表示对该产品 的认可。如果其 它等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 柱温： 初 温50 C 保持 1min ，以 40 C/min 程 序升 温 至150 C，保 持5min ； c) 载气： 氦气 ，纯 度99.999% ，流 速3.5mL/min ； d) 进样口 温度 ：

12、150 C ； e) 离子源 温度 ：230 C ； f) 四极杆 温度 ：150 C ； g) 传输线 温度 ：230 C ； h) 检测 方 式： 选择 离子 监 测 扫描(SIM) ，氰 化氢 的 特 征 碎片离 子 为 m/z 26 、m/z 27 、m/z 28，二 氯甲烷 的特 征碎 片离 子 为m/z 84 、m/z 86 、m/z 49 。其 中m/z 27 、 m/z 86 为定量 离子 。氰 化氢和 二氯 甲烷 的保 留时 间分别 为 4.56min 和4.83 min 。 6.2.2 进样 6.2.2.1 顶空自 动进 样器 进样 SF/T 0113 2021 3 将顶空

13、 进样 瓶 置 于顶 空自 动进样 器样 品架 上 ， 顶 空 自动进 样器 自动 加热 、 进 样。 顶空 自动 进样 器参 考条件 如下 ： a) 加热箱 温度 ：45 C； b) 定量环 温度 ：105 C； c) 传输线 温度 ：110 C； d) 气相循 环时 间：16min ； e) 样品瓶 加热 平衡 时间 ：30min ； f) 样品瓶 加压 时间：0.10min ； g) 定量环 充满 时间 ：0.10min ； h) 定量环 平衡 时间 ：0.05min ； i) 进样时 间：0.01min 。 6.2.2.2 顶空手 动进 样 将 顶空 进样 瓶置于 45 C 恒 温水浴

14、 锅内 ，加 热 30min 后， 用 0.5mL 进 样针 吸取 加热后 瓶内 液面 上 气 体0.5mL，按 照6.2.1 规定 的条件 进 样分 析。 记录 记录 案 件样 品 、 空 白样 品 和添加 样品 中可 疑色 谱峰 的保留 时间 、 特征 碎片 离 子和离 子丰 度比 。 血液 中氰根 离子 的检 出限 和定 量限见 附 录 A。 定性判 断依 据 以保留 时间 、 特 征碎 片离 子和离 子丰 度比 作为 定性 判断依 据。 如 果 案 件样 品 中出 现 氰化物 的 定 性离 子 的特 征 色谱峰 ， 保 留时 间 与添 加 样品中 氰 化 物的 色 谱峰 保 留时间 比

15、较 ， 相 对误 差在 2%内 ， 在 样品 质谱 图中 ， 所选 择的 离子 均出 现， 且定性 离子 丰度 比与 添 加 样 品的离 子丰 度比 之相 对误 差不超 过 表1 规 定的 范围 ，则可 判断 案件 样品 中存 在氰化 物。 表1 离子丰 度比 的最 大允 许相 对误差 单位为百分数（% ） 离子丰度比 50 20 50 10 20 10 允许的相对误差 10 15 20 50 7 定量分 析 样品前 处理 7.1.1 适用 于GC-MS 的 样品 前处 理 取案件 血液 样品 0.5mL 两 份，分别 置于 10mL 顶空 进样瓶 中， 加入 10ng/mL 内标二 氯甲 烷

16、 工 作液 5.1 i ）0.5mL ，然后 按照 6.1.1 的 方法 操作 。 另 取空 白血 液 样 品若 干 份 ， 添加 系列 浓度 的 氰 根离 子 或单 点浓 度的 氰根 离子 ， 制得 系列 浓度 或单 点 浓度的 添加 样品 ，与 案件 样品 平 行操 作。 案件样 品 中 氰根 离子 的浓 度应在 工作 曲线 的线 性范 围内。 配制 单点 浓度 的添 加样品 时， 案件 样品 中 氰根离 子浓度 应 在该 浓度 的50% 内。 7.1.2 适用 于GC-ECD 的样 品前 处 理 取 案件 血液 样 品 0.2mL 两 份，分 别 置 于已 装 有 4mL 水的10mL

17、顶空 进样 瓶 中， 混匀， 瓶中 放入 加 有 0.5%氯胺 T 溶液5.1 e）1mL 的 内管 ，再 加100L 磷酸5.1 b ）于 待检 血液 中，立 即加 盖密 封。 待 顶 空进样 瓶在 65 C 水浴 中加热 30min 后 ，取 0.4mL 液 上气体 注入 气相 色谱 仪中 分析。 SF/T 0113 2021 4 另取空 白血 液样 品若 干份 ， 添加 系列 浓度 的 氰 根离 子 或单 点浓 度的 氰根 离子 ， 制得 系列 浓度 或单 点 浓度的 添加 样品 ，与 案件 样品平 行操 作。 案件样 品中 氰根 离子 的浓 度应在 工作 曲线 的线 性范 围内。 配制

18、 单点 浓度 的添 加样品 时 ， 案件 样品 中 氰根离 子浓度 应 在该 浓度 的50% 内 。 仪器分 析 7.2.1 仪器条 件 7.2.1.1 GC-MS 参考 条件 GC-MS 参考 条件 应符 合6.2.1 的 规定 。 7.2.1.2 GC-ECD 参 考条 件 GC-ECD 参 考条 件如 下， 应 用时可 根据 不同 品牌 仪器 的实际 情况 进行 调整 。 a) 色谱柱 ：SE-30 熔融 石英 毛细管 柱(30m0.22mm0.25m)或 其它 等效 柱 ； b) 柱温：40 C； c) 载气： 氮气 ，纯 度99.999% ； d) 进样口 温度 ：120 C ； e

19、) 检测器 温度 ：300 C 。 7.2.2 进样 分别取 案件 样品 、 系 列浓 度的氰 化物 添加 样品 或单 点浓度 的氰 化物 添加 样品 ， 按 照 7.2.1 规定 的 条 件进样 分析 。 记录与 计算 7.3.1 记录 记录各 样品 中氰 根离 子和 内标的 定量 离子 峰面 积 （ 适用 于 GC-MS） ， 或 各样 品 中 氰根 离子 衍生 化 物 的峰面 积（ 适用 于 GC-ECD ），然 后计 算案 件样 品中 氰化物 的含 量。 7.3.2 内标- 工作 曲线 法（ 适用 于 GC-MS） 在系列 质量浓 度的 添加样 品中， 以 氰根 离子 与内标 的峰面

20、积 比(Y)为纵 坐标 、 氰根离 子的质 量浓度 (C)为 横坐 标进 行线 性回 归 ， 得 线性 方程 。 根据 案件 样 品 中 氰 根离 子与 内标 的 峰 面积 比 ， 按公 式(1)计算 出 案件 样品 中氰 根离 子 的 质量浓 度 。 b a Y C . (1) 式中： C 案 件样 品 中 氰根 离子 的质量 浓度 ， 单 位为 微克 每毫升(g/mL) ； Y 案件 样品 中 氰 根离 子 与内标 的峰 面积 比； a 线性 方程 的截 距 ； b 线性 方程 的斜 率 。 7.3.3 内标- 单点 校正 法（ 适用 于 GC-MS） 根据案件 样品 及添 加样品 中 氰

21、根 离子 与 内标 的峰面 积比， 按公式 （2） 计算 出 案件样 品中氰 根离 子 的质量 浓度 。 i i A A c A A C (2) SF/T 0113 2021 5 式中： C 案件样 品 中 氰根 离子 质量 浓 度， 单位 为 微 克每 毫升(g/mL) ； A 案 件样 品 中 氰根 离子 的峰面 积值 ； A 添加 样品 中 氰 根离 子 的峰 面积 值； Ai 案件 样品 中内 标的 峰面积 值； Ai 添加 样品 中内 标的 峰面积 值； c 添加 样品 中 氰 根离 子 的质量 浓度 ，单 位为 微克 每毫升(g/mL) 。 7.3.4 外标- 工作 曲线 法（ 适

22、用 于 GC-ECD ） 在系列 浓度 的添 加样 品中 ， 以氰 根离 子衍 生化 物的 峰面积 值(Y)为 纵坐 标、 氰 根离子 的 质 量浓 度(C) 为横坐 标进 行线 性回 归， 得线性 方程 。 根据 案件 样 品中 氰根 离子衍 生化 物的 峰面 积值 ， 按公式(3) 计算 出 案 件样 品 中氰根 离子 的质 量浓 度 。 b a Y C (3) 式中： C 案件样 品中 氰根 离子 的质量 浓度 ，单 位为 微克 每毫升(g/mL) ； Y案件 样 品中 氰根 离子 衍生化 物 的 峰面 积 值 ； a 线 性方 程的 截距 ； b 线性 方程 的斜 率。 7.3.5 外

23、标- 单点 校正 法（ 适用 于 GC-ECD ） 根据案件 样品 和添加 样品 中 氰根 离子 衍 生化 物 的峰 面积值 ，按公 式(4) 计算出 案件样 品中氰 根离 子 的质量 浓度 。 A c A C (4) 式中： C 案件样 品中 氰根 离子 的质量 浓度 ，单 位为 微克 每毫升(g/mL) ； A 案件 样 品中 氰根 离子 衍生化 物 的 峰面 积 值 ； A 添加 样 品中 氰根 离子 衍生化 物 的 峰面 积 值 ； c 添 加样 品中 氰根离 子 的质量 浓度 ，单 位为 微克 每毫升(g/mL) 。 7.3.6 计算相 对相 差 案件样 品 同 时平 行测 定两 份

24、，双 样相 对相 差按 公式 （5） 计算 ： 0 0 2 1 100 C C - C RD . (5) 式中： RD 相对 相差 ； C 1 、C 2 两份 案件 样品 平行定 量测 定的 质量 浓度 ，单位 为微 克每 毫升(g/mL) ； C 两份 案 件样 品 平 行 定量测 定质 量浓 度的 平均 值 ，单 位为 微克 每毫 升(g/mL) 。 8 分析结 果评 价 定性分 析结 果评 价 8.1.1 阴性结 果评 价 SF/T 0113 2021 6 阴性 结 果评 价包 括： a) 如果案 件样 品中 仅检 出内 标 ，未 检出 氰化 物， 添加 样品中 检出 氰化 物 ， 则阴

25、 性结果 可靠 ； b) 如果案 件样 品中 未检 出内 标 或添 加样 品中 未检 出 氰 化物 ， 则 阴性 结果 不可 靠 ， 应按 照 第 6 章 的 规定重 新提 取检 验。 8.1.2 阳性结 果评 价 阳性 结 果评 价包 括： a) 如果案 件样 品中 检出 氰化 物且空 白样 品无 干扰 ，则 阳性结 果可 靠； b) 如果空 白样 品亦 呈阳 性， 则阳性 结果 不可 靠， 应按 照第 6 章的 规定 重新 提取 检验。 定量分 析结 果评 价 两份案 件样 品的 相对 相差 不超 过 20% （腐 败检 材不 超过 30% ） 时， 结果 按两 份案件 样 品 的平 均值 计 算，否 则应 重新 测定 。 SF/T 0113 2021 7 附录A （资料 性） 血液中 氰根 离子 的检 出限 和定量 限 血液中 氰根 离子 的检 出限 为0.05g/mL ；定 量限 为0.1g/mL 。