GA T 1923-2021 法庭科学 疑似毒品中8种芬太尼类物质检验 液相色谱和液相色谱-质谱法.pdf

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1、 中华人民 共和国 公安部 发 布 ICS 13.310 CCS A 92 中 华 人 民 共 和 国 公 共 安 全 行 业 标 准 GA GA/T 法庭科学 疑似毒品 中 8 种芬 太尼类物 质 检验 液相 色谱和 液 相色谱- 质谱 法 Forensic sciences Examination methods for 8 fentanyl derivatives in suspected drugs LC and LC-MS - - 发布 - - 实施 GA/T I 前 言 本文件 按 照 GB/T 1.1 2020 标 准化 工作 导则 第 1 部分： 标准 化文 件的 结构 和起草

2、 规则 的 规定 起草。 请注意 本文 件的 某些 内容 可能涉 及专 利 。 本文 件的 发布机 构不 承担 识别 专利 的责任 。 本 文件 由全 国刑 事技 术标 准化技 术委 员会 毒物 分析 分技术 委员 会 （SAC/TC 179/SC 1 ） 提 出并 归口。 本 文件 起草 单位 ： 山 东省 公安厅 物证 鉴定 研究 中心 、 公安 部物 证鉴 定中 心、 甘肃省 公安 厅、 公安 部 禁毒情 报技 术中 心 。 本 文件 主要 起草 人： 高宏 、宋丽 娟、 张广 华、 赵培 铎、闫 帅 、 郑珲 、张 忠斌 、冯超 。 GA/T 1 法庭科学 疑 似毒 品中 8 种 芬太

3、尼 类物质检验 液相色谱 和液相 色谱- 质谱 法 1 范围 本文件 规定 了 法 庭科 学领 域疑似 毒品 样品 中芬 太尼 、 乙酰 芬太 尼、 丁 酰芬 太 尼、 卡 芬太 尼、 呋 喃 芬太尼 、 舒芬 太尼 、 阿 芬 太尼 、 瑞 芬太 尼的 液相 色 谱- 质谱 （LC-MS ） 定性 检 验 方法 和液 相色 谱 （LC ） 或液相 色谱- 质谱 （LC-MS ）定量 检验 方法 。 本 文件 适用 于 法 庭科 学领 域疑似 毒品 样品 中芬 太尼 、 乙酰 芬太 尼、 丁 酰芬 太 尼、 卡 芬太 尼、 呋 喃 芬太尼 、 舒 芬太 尼、 阿 芬太 尼 、 瑞 芬太 尼的

4、定性 分析 和定量 分析 。 其 他 芬 太尼 类物质 检验 可参 照使 用。 2 规 范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款 。 其 中， 注日 期的 引用 文 件， 仅该 日期 对应 的版 本 适用于 本文 件 ； 不 注日 期 的引用 文件 ， 其最 新版 本 （包 括所 有的 修改 单） 适 用于本 文件 。 GB/T 6682 分析 实验室 用 水规格 和试 验方 法 GB/T 27418 测量 不确 定度 评定与 表示 GA/T 122 毒 物分 析名 词术 语 3 术 语和 定义 GA/T 122 界 定的 术语

5、 和定 义适用 于本 文件 。 4 原理 对疑似 毒品 样品 中的 芬太 尼 、 乙 酰芬 太 尼 、 丁 酰芬 太尼、 卡芬 太尼 、 呋 喃芬 太尼、 舒芬 太尼 、 阿 芬太尼 、 瑞 芬太 尼 （化 合 物信息 参见 附录A ） 进行 提 取。 采 用液 相色 谱- 质谱 检 测， 以 保留 时间、 质谱 特征离 子 对 和离 子对 丰度 比 作为 定性 判断 依据 ； 采 用液相 色谱 或液 相色 谱- 质 谱检测 ， 以 色谱 峰面 积 作 为定量 依据 ， 用 外标 或内 标法进 行定 量分 析 。 5 试剂 和 材料 5.1 LC-MS 分 析用 试剂 实验用 水应符合 GB/

6、T 6682 中规 定的 一级 水。 除非 另有说 明， 在分析 中使 用 的试剂 均为 色谱 纯， 试剂包 括： a ） 甲醇； b ） 内标物 ： 丙 基解 痉素 （SKF 525A）； c ） 0.1% 甲 酸（ 以配 制 1000mL 为 例） ： 量取 甲酸 1.0mL ，用 200mL 水稀 释， 转移 至 1000mL 容 量瓶中 用 水 定容 ，用 超声 波清洗 器超 声， 即可 使用 ； d ） LC-MS 分析 提取 溶剂 （以 配制 1000mL 为 例） ： 量取 900mL 0.1% 甲酸 和 100mL 甲醇 ，混 匀 即可使 用； e ） 标准溶 液： GA/T

7、2 1） 标准物 质储 备液 ： 芬太 尼 、乙 酰芬 太尼 、丁 酰芬 太 尼、 卡芬 太尼 、呋 喃芬 太 尼、 舒芬 太 尼、阿 芬太 尼、 瑞芬 太尼 标准物 质储 备液 ； 2） 内标储 备液 ： 称 取 SKF 525A 粉末适 量， 用甲 醇定 容， 配制 成 0.1mg/mL 的 SKF 525A 内标 储 备液。0 o C4 o C 冷 藏保 存 ，有效 期 6 个月 ； 3） 标准工 作 溶 液： 定性 用 标准 工作 溶液/ 外标单 点法 定量 用标 准工 作溶液 ： 移 取标 准物 质储 备液适 量 ， 用 LC-MS 分 析提 取溶 剂 稀 释，分 别配 制 成 50

8、ng/mL 的定性 或外 标单 点 法 定量 用 标 准工作 溶液 。0 o C4 o C 冷 藏保存 ，有 效 期 3 个月 ； 定 性质 控标 准工 作溶 液： 移 取标 准物 质储 备液 适量， 用 LC-MS 分析 提取 溶剂稀释， 分别配 制 成 1ng/mL 的 定性 质控 标 准工 作溶 液。0 o C4 o C 冷 藏保 存， 有效 期 15 天； 内 标工 作溶 液： 移取 SKF 525A 内标 储备 液 适 量， 用 LC-MS 分析 提取 溶剂 稀 释， 配 制 成 50ng/mL 的 内标 工作 溶 液 。0 o C4 o C 冷藏 保存 ， 有效 期 3 个月 ；

9、内 标单 点法 定量 用标准 工作 溶液： 移 取标 准物 质储备 液适 量， 用 LC-MS 分析 提 取 溶剂 稀 释， 配制 成 50ng/mL 的 标准 溶液， 与 50ng/mL 的 SKF 525A 内 标工 作 溶液等体 积混合 ，配 制成 内标 单点 法定量 用 标 准工 作溶 液。0 o C4 o C 冷 藏保 存， 有效期 3 个 月。 注： 外标单点法定量用标准工作溶液和内标单点法定量用标准工作溶液的浓度 可根据仪器配置情况进 行调整。 内标单点法定量用标准工作溶液中目标物的浓度是与内标工作液等体积混合前浓度值。 5.2 LC 分 析用 试剂 实验用 水应 符 合 GB/

10、T 6682 中规 定的 一级 水。 除非 另有说 明， 在分 析中 使用 的试剂 均为 色谱 纯， 试剂包 括： a ） 乙腈； b ） 磷酸； c ） 内标物 ： 丙 基解 痉素 （SKF 525A ） ； d ） 0.1% 磷 酸（ 以配 制 1000mL 为 例） ： 量取 磷酸 1.0mL ，用 200mL 水稀 释， 转移 至 1000mL 容 量瓶中 用 水 定容 ，用 超声 波清洗 器超 声， 即可 使用 ； e ） LC 分析 提取 溶剂 （以 配 制 1000mL 为例） ：量 取 900mL 0.1%磷酸 和 100mL 乙腈， 混匀 即可 使用； f ） 标准溶 液：

11、1） 标准物 质储 备液 ： 芬太 尼 、乙 酰芬 太尼 、丁 酰芬 太 尼、 卡芬 太尼 、呋 喃芬 太 尼、 舒芬 太 尼、阿 芬太 尼、 瑞芬 太尼 标准物 质储 备液 ； 2） 内标储 备液 ：称取 SKF 525A 粉末 适量 ，用 甲醇 定容 ， 配制成 10mg/mL 的 SKF 525A 内 标 储 备液。0 o C4 o C 冷 藏保 存 ，有效 期 12 个月 ； 3） 标准工 作溶 液： 外 标单 点法 定量 用标准 工作 溶液 ：移 取标 准物 质储备 液适 量， 用 LC 分 析提取 溶剂 稀释， 分别 配制 成 0.1mg/mL 和 0.01mg/mL 的外 标 单

12、点法 定量 用 标 准工 作溶 液。 0 o C4 o C 冷藏 保存 ， 0.1mg/mL 标 准工 作溶 液 有 效期 6 个月 ， 0.01mg/mL 标 准工 作溶 液有效 期 3 个月 ； 外 标标 准曲 线法 定量 用标准 工作 溶液 ：移取 标 准物质 储备 液适 量 ， 用 LC 分析 提 取 溶剂稀 释， 配制 成浓 度 为 0.01mg/mL0.1mg/mL 范 围的 外 标标 准曲 线法 定量 用 标准 工作溶 液， 至少 配 制 5 个 浓度 ； 内 标工 作溶 液： 移 取 SKF 525A 内 标储 备液 适量 ， 用 LC 分析 提取 溶剂 稀释 ，配制 成 0.

13、1 mg/mL 的内 标工 作液。 0 o C4 o C 冷藏 保存， 有效 期 6 个 月。 实验 中所 用其 他浓 度 的内标 工作 溶液 均 由 10mg/mL 内标 储备 溶液 稀释 得 到； 内 标单 点法 定量 用标准 工作 溶液： 移 取标 准物 质储备 液适 量， 用 LC 分 析提取 溶 剂 稀释， 分别 配制 成 0.1mg/mL 和 0.01mg/mL 的 标准 溶液， 与 等 浓度 的 SKF 525A 内标 工作液 等 体 积混 合， 配制 成 内标 单点 法定 量用 标准 工作溶 液。0 o C4 o C 冷藏 保存 ， 0.1mg/mL 标准 工作 溶液 有 效期

14、 6 个月 ，0.01mg/mL 标准工 作溶 液有效期 3 个月 ； 内 标标 准曲 线法 定量 用标准 工作 溶液 ： 标 准物 质储备 液适 量， 用 LC 分 析提取 溶 剂GA/T 3 稀 释 ， 配 制 成 浓 度 为 0.01mg/mL0.1mg/mL 范 围 的 标 准 溶 液 ， 与 0.04mg/mL 的 SKF 525A 内标 工作 液等 体积 混合 ， 配 制成 内标 标准 曲 线法定 量用 标准 工作 溶液 ， 至 少 配制 5 个浓 度 。 注：内标 单 点法 与 内标 标 准曲线 法 定 量用 标准 工 作溶 液 中目标 物 的 浓度 是与 内 标工 作 液等体

15、积 混 合前 浓度值 。 5.3 材料 材料包 括 ： a ） 具盖离 心管 ； b ） 容量瓶 ； c ） 有机系 微孔 滤膜 ：0.22 m 。 6 仪 器和 设备 仪器 和 设备 包括 ： a ） 液相色 谱仪 （LC）： 配 有 二极管 阵列 （DAD ）或 紫 外 检测 器 （UV ） ； b ） 液相色 谱-质谱 仪 （LC-MS ） ：配 电喷 雾离 子源 ； c ） 离心机 ； d ） 超声波 清洗 器 ； e ） 涡旋振 荡器 ； f ） 电子天 平： 定性 检验 实际 分度 值 d 0.1m g ， 定量 检 验实际 分度 值 d 0.01m g ； g ） 移液器 或移

16、液管 。 7 操 作方 法 7.1 定性 分析 7.1.1 样 品制 备 7.1.1.1 固体 样品 制备 样品充 分均 质化 ， 根据 实 际需求 ， 称取 10mg100mg 于具 盖离 心管 中 ， 加 入 10mL 甲 醇 ， 密 封并 振荡 5min ， 以不 低于 4000r/min 离心 5min ，取上 清 液，用 LC-MS 分析 提取 溶 剂 稀释 ， 使 稀释 液中 目 标物浓 度接 近定 性用 标准 工作溶 液浓 度， 稀释 液 经 0.22m 的有 机系 微孔 滤膜 过滤， 滤液 作为 样品 溶 液， 供 LC-MS 分析 。 7.1.1.2 液体 样品 制备 样品充

17、 分混 匀， 以不 低于 4000r/min 离心 5min ， 取 上清液 ， 用 LC-MS 分析 提 取溶剂 稀释 ，使稀 释液中 目标 物浓 度接 近定 性用标 准工 作溶 液浓 度， 稀释液 经 0.22m 的 有机 系微孔 滤膜 过滤 ，滤 液 作 为样品 溶液，供 LC-MS 分 析。 7.1.2 仪 器检 测 7.1.2.1 液相 色谱- 质谱 仪条件 以下为 参考 条件 ，可 根据 不同品 牌仪 器和 不同 样品 等实际 情况 进行 调整 ： a ） 色谱柱 ：Hypersil Gold （50mm 2.1mm 1.9m ） 柱 或等效 色谱 柱； 注：Hypersil Go

18、ld 色谱柱是 Thermo 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表GA/T 4 示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b） 柱温：40 o C ； c ） 流动相 ：A 相 ：甲醇 ， B 相：0.1%甲酸 ； d） 梯度程序 ：见表 1； 表1 梯度 洗脱 程序 时间 min 流动相 A 流动相 B 0 10% 90% 0.5 10% 90% 2.0 90% 10% 5.0 90% 10% 5.5 10% 90% 8.0 10% 90% e ） 流速：0.3mL/min ； f ） 进样量 ：2L ； g） 离子源 ：电 喷雾

19、 离子 源； h） 检测模 式： 正离 子模 式， 多反应 监测 （MRM ） ； i ） 喷雾电 压（IS）： 5500V ； j ） 气帘气 （CUR）： 35psi ； k） 喷雾气 （Gas1）： 55psi ； l ） 辅助加 热气 （Gas2）： 55psi ； m ） 离子源 温度 （TEM）： 550 o C ； n） 芬太尼 、 乙酰 芬太 尼 、 丁 酰芬太 尼 、 卡 芬太 尼 、 呋 喃芬太 尼 、 舒 芬太 尼 、 阿 芬太尼 、 瑞芬 太尼 、 SKF 525A （LC-MS 单点法 定 量内标 ）的 离子 对和 去簇 电压（DP ） 、 碰撞 能 量 （CE ）

20、： 见表 2 。 表2 质谱 参考 条件 名称 母离子 m/z 子离子 m/z 去簇电压 V 碰撞能量 eV 芬太尼 337.2 188.2 60 33 105.2 48 乙酰芬太尼 323.2 188.2 40 32 105.2 50 丁酰芬太尼 351.2 188.2 50 34 105.2 57 卡芬太尼 395.2 335.3 50 27 246.2 30 呋喃芬太尼 375.2 188.2 60 31 105.2 57 舒芬太尼 387.2 238.1 50 27 111.2 55 阿芬太尼 417.2 268.2 50 25 197.1 35 瑞芬太尼 377.2 113.2 50

21、 40 317.2 23 GA/T 5 表2 质谱 参考 条件 （续 ） SKF525A 354.2 209.2 60 26 105.2 36 7.1.2.2 进样 分别吸 取样 品空 白（LC-MS 分析 提取 溶剂 ） 、 样品 溶 液、标 准溶 液空 白 （LC-MS 分析 提取 溶剂 ） 和定性 用标 准工 作溶 液 ， 按 7.1.2.1 条件 进样 分析 。 或根据 实际 需求 ， 再分 别吸 取标准 溶液 空白 （LC-MS 分析提 取溶 剂 ） 和定 性质 控 标准 工作 溶液 ， 按 7.1.2.1 条件 进样 分析 。 7.2 定量 分析 7.2.1 液 相色 谱内/ 外标

22、 单点法 7.2.1.1 含量 预分 析 7.2.1.1.1 固 体样 品 根据实 际需 求， 称取 10mg100mg 样品 置于 具盖 离心 管 中， 加入 10mL LC 分 析提取 溶剂 ，密封 并振荡 10min ， 以不 低于 4000r/min 离心 5min ， 取上清 液 用 0.22 m 的 有机 系微 孔滤膜 过 滤 ， 滤 液作 为 样品溶 液 ， 供 LC 分析 。 或 根据实 际需 要， 将上 清液 用 LC 分 析提 取溶 剂 稀 释 ， 稀释 液作 为样 品溶 液， 供 LC 分 析。 采用 外标 单 点法定 量 用 0.1mg/mL 的标准 工作 溶液 作为

23、定量 参照 。 按 照公 式（1） 计算 样品 中 目标物 的百分 含 量。 ( ) 3 02 + = 100% C A V V V A V m 0 1 2 （1 ） 式中： 样 品中 目标 物的 百分 含量， 用百 分比 （% ）表示 ； C 0 外 标单 点法 定量 用 标 准工作 溶液 中目 标物 的浓 度，单 位为 毫克 每毫 升 （mg/mL ）； A 样品溶 液中 目标 物 的 色谱 峰面积 值； A 0 外 标单 点法 定量 用 标 准工作 溶液 中目 标物 的色 谱峰面 积 值 ； V 1 样 品初 次定 容体 积， 单位为 毫升 （mL ）； V 2 从 V 1 中移 取的

24、体积 ， 单位为 毫升 （mL ） ； V 3 将 V 2 稀释 时加 入 LC 分析提 取溶 剂 的 体积 ，单 位为毫 升 （mL ） ； m 样品 的 称 量重 量 ， 单 位为毫 克 （mg ） 。 7.2.1.1.2 液 体样 品 移取液 体样 品原 液 ， 以不 低于 4000r/min 离心 5min ，取上 清液 作为 样品 溶液 ，供 LC 分 析。 或 根 据实际 需要 ，将 上清 液 用 LC 分 析提 取溶 剂稀释 n 倍 ，稀释 液作 为样 品溶 液， 供 LC 分 析。 采用 外标 单点法 定量 用 0.1mg/mL 的 标准工 作溶 液作 为定 量参 照。 按 照

25、公 式（2） 计算 样品 中 目标物 的含 量。 0 0 100% = C A n V A m （2 ） 式中： 样 品中 目标 物 的 含量 ， 用百 分比 （% ）表示 ； C 0 外 标单 点法 定量 用 标 准工作 溶液中 目 标物 的浓 度，单 位为 毫克 每毫 升（mg/mL）； A 样品 溶液 中 目标 物 的 色 谱峰面 积值 ； GA/T 6 A 0 外 标单 点法 定量 用 标 准工作 溶液中 目 标物 的色 谱峰面 积值 ； n 液 体样 品原 液 的 稀释 倍 数 ； V 样品 的体 积 ，单 位为 毫 升 （mL ）； m 样品 的称 量质 量， 单 位为毫 克 （m

26、g ） 。 7.2.1.2 准确 定量 7.2.1.2.1 固 体样 品称 量 质 量的 计算 根据预 分析 中 目 标物 含量 测定结 果 ， 选 择合 适的 定容 体积与 内/ 外 标单 点法 定量 用 标准 工作 溶液 浓 度 （参 见附录 B 中 表 B.1 ） ， 并按 照公式（3 ） 计算 出 样品称 量质量（m ） ， 使样 品溶液 中目 标物 的浓 度 在所用 标准 工作 溶液 浓度 的（100 30 ）% 范围 内。 0 = CV m （3） 式中 ： m 称量 质量 ，单 位为 毫 克（mg）； C 0 内/ 外标 单点 法 定 量用 标准工 作 溶 液中 目标 物 的 浓

27、度， 单位 为毫 克每 毫升 （mg/mL）； V 样品 溶液 定容体 积， 单 位为毫 升（mL）； 样 品中 目标 物 的 预分 析 百分 含量 ， 用 百分 比（% ）表 示 。 7.2.1.2.2 液 体样 品稀 释 倍数的 计算 根据预 分析 中 目 标物 含量 测定结 果， 选择 合适 的 内/ 外标单 点法 定量 用标准 工作 溶液 浓度 ， 并 按 照 公 式（4 ）计算出 液体样品原 液的稀释 倍数（n ） ， 使样 品溶液中 目标物的 浓度在 所用标准 工作溶液 浓 度的（100 30 ）% 范 围内 。 0 = m n VC （4 ） 式中： n 液 体样 品原 液的 稀

28、释 倍 数； 样 品中 目标 物 的 含量 ， 用百 分比 （% ）表示 ； m 样品 的称 量质 量， 单 位为毫 克 （mg）； V 样品 的体 积， 单 位为 毫 升 （mL ）； C 0 内/ 外标 单点 法 定 量用 标准工 作 溶 液中 目标 物 的 浓度 ， 单位 为毫 克每 毫升 （mg/mL ） 。 7.2.1.2.3 样 品制 备 7.2.1.2.3.1 外标 单点 法 样品制 备 根据7.2.1.2.1 或7.2.1.2.2 计算 结果 ，平 行称取 或移 取样品2份于 容量 瓶中 （ 需要对 定量 结 果 进行不 确定度 评定 时 ， 至少 平行 称取 或移 取6 份）

29、 ， 根据 预分 析 含量结 果， 固体 样品 用LC 分析提 取溶 剂 定 容 （ 参 见附录B 中表B.1）， 液体 样 品 用LC 分析 提取 溶剂 逐级 定容稀释n 倍， 超声 振荡10min ， 以 不低 于4000r/min 离心5min ，取 上清 液 用0.22 m 的有 机系 微孔 滤膜 过 滤，滤 液作 为样 品溶 液 ， 供LC 分 析。 7.2.1.2.3.2 内标 单点 法 样品制 备 根据7.2.1.2.1 或7.2.1.2.2 计算 结果 ，平 行称取 或移 取样品2份于 容量 瓶中 （ 需要对 定量 结果 进行不 确定度 评定 时 ， 至少 平行 称取 或移 取

30、6 份） ， 根据 预分 析 含量结 果， 固体 样品 用LC 分析提 取溶 剂定容 （参 见附录B 中表B.1）， 液体 样 品 用LC 分析 提取 溶剂 逐级 定容稀释n 倍， 超声 振荡10min ， 以 不低 于4000r/min 离心5min ， 根据 使用 的内 标单点 法定 量用 标准 工作 溶液浓 度 ， 取上 清液 与等 浓度 的SKF 525A 内标 工作 液 等体积 混合 ， 经0.22m 的 有机系 微孔 滤膜 过滤 ，滤 液作为 样品 溶液 ，供LC 分 析。 GA/T 7 7.2.1.2.4 仪 器检 测 7.2.1.2.4.1 液相 色谱 仪 条件 以下为 参考

31、条件 ，可 根据 不同品 牌仪 器和 不同 样品 等实际 情况 进行 调整 ： a ） 检测器 ：二 极管 阵列 或可 变波长 紫外 检测 器； b） 色谱柱 ：ACQUITY UPLC BEH C 18 （100mm 2.1mm 1.7m ） 柱或 等效 色谱 柱； 注：ACQUITY UPLC BEH C18 色谱柱是 Waters 公司产品的商品名称， 给出这一信息是为了方便本标准的使用者， 并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 c ） 柱温：25 o C ； d） 流动相 ：A 相 ：乙腈 ，B 相：0.1% 磷 酸； e ） 梯度程 序：

32、见表 3； 表 3 梯度 洗脱 程序 时间 min 流动相 A 流动相 B 0 10% 90% 8.0 70% 30% 10 70% 30% 10.1 10% 90% 15 10% 90% f ） 流速：0.3mL/min ； g） 进样量 ：2L ； h） 检测波 长：210nm ，带 宽 ：4.8nm 。 7.2.1.2.4.2 进样 分别吸 取样 品空 白 （LC 分 析提取 溶剂 ） 、 样品 溶液 、 标准溶 液空 白（LC 分析 提 取溶剂 ） 、LC 内 标单点 法定 量用 标准 工作 溶液或 LC 外 标单 点 法 定 量用标 准工 作溶 液，按 7.2.1.2.4.1 条 件

33、进 样分 析。 当称取 2 份 样品 时， 每份 样品进 样 23 针。8 种 芬 太尼 类 物质 的液 相色 谱图 参见附 录 C 。 7.2.1.2.5 含 量计 算 7.2.1.2.5.1 固体 样品 外 标单点 法含 量计 算 按 照公 式（5） 计算 样品 中 目标物 的百分 含 量。 0 0 100% C V A mA = （5 ） 式中： 样 品中 目标 物 的 百分 含量， 用百 分比 （% ）表 示 ； C 0 外 标单 点法 定量 用 标 准工作 溶液中 目 标物 的浓 度，单 位为 毫克 每毫 升（mg/mL）； V 样品 溶液 定容体 积， 单 位为毫 升（mL）； m

34、 样品 的称 量质 量， 单 位为毫 克（mg ） ； A 样品 溶液 中 目标 物 的 色 谱峰面 积平均 值； A 0 外 标单 点法 定量 用 标 准工作 溶液中 目 标物 的色 谱峰面 积平均 值 。 7.2.1.2.5.2 液体 样品 外 标单点 法含 量计 算 按 照公 式（2） 计算 样品 中 目标物 的含 量。 7.2.1.2.5.3 固体 样品 内 标单点 法含 量计 算 GA/T 8 按 照公 式（6） 计算 样品 中 目标物 的百分 含 量。 0 is 0i 100% C V A A m A A = （6 ） 式中： 样 品中 目标 物 的 百分 含量， 用百 分比 （%

35、 ）表 示 ； C 0 内 标单 点法 定量 用 标 准工作 溶液中 目 标物 的浓 度，单 位为 毫克 每毫 升（mg/mL）； V 样品 溶液 定容体 积， 单 位为毫 升（mL）； m 样品 的称 量质 量， 单 位为毫 克（mg）； A 样品 溶液 中 目标 物的 色 谱峰面 积平均 值； A 0 内 标单 点法 定量 用 标 准工作 溶液中 目 标物 的色 谱峰面 积平均 值； A is 内标 单点 法定 量用 标 准工作 溶液 中内 标的 色谱 峰面积 平均 值； A i 样 品溶 液中 内标 的色 谱峰面 积平均 值。 7.2.1.2.5.4 液体 样品 内 标单点 法含 量计

36、算 按 照公 式（7） 计算 样品 中 目标物 的含 量。 0 is 0i 100% = C A A n V A A m （7） 式中： 样 品中 目标 物 的 含量 ， 用百 分比 （% ）表示 ； C 0 内 标单 点定 量用 标准 工作 溶 液中 目标 物 的 浓度 ，单位 为毫 克每 毫升 （mg/mL）； A 样品 溶液 中 目标 物的色谱 峰面 积平均 值； A 0 内 标单 点定 量用 标准 工作 溶 液中 目标 物 的 色谱 峰面积 平均 值； A is 内标 单点 定量 用 标 准 工作 溶 液中 内标 的色 谱峰 面积平均 值； A i 样 品溶 液中 内标 的色 谱峰面

37、积平均 值； n 液 体样 品的 稀释 倍数 ； V 样品 的体 积， 单 位为 毫 升 （mL ）； m 样品 的称 量质 量， 单 位为毫 克 （mg ） 。 7.2.2 液 相色 谱外 标标 准 曲线法 7.2.2.1 标准 工作 曲线 绘 制 采用5.2 中配制 的外标 标准曲 线法定量 用标准工 作溶液 及标准溶 液空白（LC 分析 提取试剂 ） 分别 绘 制 成 线性 范 围为0.01mg/mL0.1mg/mL 范围 的 芬太尼 、 乙 酰芬 太 尼、 丁 酰芬太 尼 、 卡芬 太 尼、 呋喃 芬太尼 、舒 芬太 尼、 阿芬 太尼、 瑞芬 太尼 标准 工作 曲线。 7.2.2.2

38、样品 制备 平 行移 取液体 样本2 份 或 称取 固体 样本2 份各10mg100mg 于100mL 容 量瓶 中（需 要对 定量 结果 进 行不确 定度 评定 时， 至少 平行移 取 或 称取6份 ） ， 用LC 分析 提取 溶剂 定容 ， 超 声振荡10min ， 以不 低于 4000r/min 离心5min ，取 上 清液用0.22 m 的有 机系 微 孔滤膜 过滤 ，滤 液作 为样 品溶液 ，供LC 分 析。 样品中 目标 物的 含量 应在 标准工 作 曲 线的 线性 范围 内。 7.2.2.3 仪器 检测 7.2.2.3.1 液 相色 谱仪 条件 同 7.2.1.2.4.1 。 7

39、.2.2.3.2 进样 GA/T 9 分别吸 取样 品空 白（LC 分 析提取 溶剂 ） 、 样品 溶液 ， 按 7.2.1.2.4.1 条件 进样 分 析 ，每 份样 品进 样 23 针 。 7.2.2.4 含量 计算 以外标 标准 曲线 法定 量用 标准工 作溶 液中 目标 物的 峰面积 值为 纵坐 标、 外标 标准曲 线法 定量 用 标 准工作 溶液 中目 标物 的浓 度 为横 坐标 进行 线性 回归 ， 得 到线 性方 程 。 根 据样 品溶液 中目 标物 的峰 面 积 值，按 照公 式（8） 计算 出 样品中 目标 物的 百分 含量 () 100% Y b V am = （8） 式中

40、： 样 品中 目标 物的 百分 含量， 用百 分比 （% ）表 示； Y 样 品溶 液中 目标 物 的 峰 面积平均 值； b 线 性方 程的 截距 ； V 样品 溶液 的体积 ，单 位 为毫升 （mL ）； a 线 性方 程的 斜率 ； m 样品 的称 量质 量， 单 位为毫 克（mg ）。 7.2.3 液 相色 谱内 标标准 曲线法 7.2.3.1 标准 工作 曲线 绘 制 采用5.2 中配制 的内 标 标准曲 线法定量 用标准工 作溶液 及标准溶 液空白（LC 分析 提取试剂 ）分别 绘 制 成 线性 范 围为0.01mg/mL0.1mg/mL 范围 的 芬太尼 、 乙 酰芬 太 尼、

41、丁 酰芬太 尼 、 卡芬 太 尼 、 呋喃 芬太尼 、舒 芬太 尼、 阿芬 太尼、 瑞芬 太尼 标准 工作 曲线。 7.2.3.2 样品 制备 平 行移 取液体 样本2 份 或 称取 固体 样本2 份各10mg100mg 于100mL 容 量瓶 中（需 要对 定量 结果 进 行不确 定度 评定 时， 至少 平行移 取 或 称取6份 ） ， 用LC 分析 提取 溶剂 定容 ， 超 声振荡10min ， 以不 低于 4000r/min 离心5min ， 取上 清液 与 浓度 为0.04mg/mL 的SKF 525A 内 标工 作液 等体 积 混合 ， 经0.22 m 的有 机 系微孔 滤膜 过滤

42、，滤 液作 为样品 溶液 ，供LC 分 析。 样品中 目标 物的 含量 应在 标准工 作 曲 线的 线性 范围 内。 7.2.3.3 仪器 检测 7.2.3.3.1 液 相色 谱仪 条件 同 7.2.1.2.4.1 。 7.2.3.3.2 进样 分别吸 取样 品空 白（LC 分 析提取 溶剂 ） 、 样品 溶液 ， 按 7.2.1.2.4.1 条件 进样 分 析 ，每 份样 品进 样 23 针 。 7.2.3.4 含量 计算 以内标 标准 曲线 法定 量用 标准工 作溶 液中 目标 物与 内标物 的峰 面积 比 的 平均 值 为纵 坐标 、 内 标 标 准曲线 法定 量用 标准 工作 溶液中

43、目标 物的 浓度 为横 坐标进 行线 性回 归 ， 得 到 线性方 程 。 根 据样 品溶 液 中目标 物与 内标 物的 峰面 积 比， 按照 公式 （9 ）计 算 出样品 中目 标物 的百 分含量 GA/T 10 () 100% Y b V am = （9 ） 式中： 样 品中 目标 物的 百分 含量， 用百 分比 （% ）表 示； Y 样 品溶 液中 目标 物 与 内 标物 的 峰面 积 比 的平 均值 ； b 线 性方 程的 截距 ； V 样品 溶液 的体积 ，单 位 为毫升 （mL ）； a 线 性方 程的 斜率 ； m 样品 的称 量质 量， 单 位为毫 克（mg ）。 7.2.4

44、液 相色 谱-质 谱内/ 外标单 点法 7.2.4.1 含量 预分 析 7.2.4.1.1 固 体样 品含 量 预分析 根据实 际需 求， 称取10mg50mg 样品 置于 具盖 离心 管中 ， 加入10mL LC-MS 分析提 取溶 剂 ， 密封 并 振 荡10min ， 以 不 低 于4000r/min 离心5min ， 取 上 清 液 用LC-MS 分 析 提 取 溶 剂 稀释10 n 倍 ， 稀 释 液 经 0.22m 的 有机 系微 孔滤 膜 过滤 ， 供LC-MS 分 析。 采用 外标 单点 法定 量用 标准 工作溶 液作 为定 量参 照 。 按 照公 式（10） 计算 样品 中目

45、标 物 的 百分 含量 。 0 0 n 10 100% C A V mA = （10 ） 式中： 样 品中 目标 物 的 百分 含量， 用百 分比 （% ）表 示 ； C 0 外 标单 点法 定量 用 标 准工作 溶液 中目 标物 的浓 度，单 位为 毫克 每 毫 升（mg/mL ）； A 样品 溶液 中 目标 物 的 色 谱峰面 积 值 ； A 0 外 标单 点法 定量 用标 准工作 溶液 中目 标物 的色 谱峰面 积 值 ； V 样品 溶液 初次定 容体 积 ，单位 为毫 升（mL ）； m 样品 的称 量质 量， 单 位为毫 克（mg ）； n 样 品溶 液以10 为 单位 的 稀释次

46、数。 7.2.4.1.2 液 体样 品含 量 预分析 移取液 体样 品原 液， 以不 低于 4000r/min 离心 5min ，取上 清液 用 LC-MS 分 析提取 溶剂 稀释 10 n 倍， 稀释 液 经 0.22 m 的有 机系微 孔滤 膜过 滤 ， 供 LC-MS 分析 。 采用 外标 单点 法定量 用标 准工作 溶液 作为定 量参 照 。 按 照公 式（11 ）计 算样 品 中 目标 物 的 含量 。 0 0 n 10 100% = CA A V m （11 ） 式中： 样 品中 目标 物 的 含量 ， 用百 分比 （% ）表示 ； C 0 外 标单 点法 定量 用 标 准工作 溶

47、液中 目 标物 的浓 度，单 位为 毫克 每毫 升（mg/mL ）； A 样品 溶液 中 目标 物 的 色 谱峰面 积 值 ； A 0 外 标单 点法 定量 用 标 准工作 溶液中 目 标物 的色 谱峰面 积 值 ； n 样 品溶 液以 10 为 单位 的稀释 次数 。 V 样品 的体 积， 单 位为 毫 升 （mL ）； m 样品 的称 量质 量， 单 位为毫 克 （mg ） 。 GA/T 11 7.2.4.2 准确 定 量 7.2.4.2.1 固 体样 品称 量 质量的 计算 根据预 分析 中目 标物 含量 测定结 果， 选择 合适 的初 次 定容 体积 、 稀 释倍 数及 内/ 外标 单

48、点 法定 量用 标准工作 溶 液浓 度（ 参见 附录 B 中表 B.2 ） ，并 按照公 式（12） 计算 出样 品称 量质量 （m）， 使 样品 溶 液中目 标物 的浓 度在 所用 标准工 作溶 液浓 度的 （100 30 ）% 范 围内 。 0 = C V d m （12 ） 式中： m 称量 质量 ，单 位为 毫 克（mg）； C 0 标 准工 作液 中 目 标物 的浓度 ，单 位为 毫克 每毫 升（mg/mL）； V 样品 溶 液 初次定 容体 积 ，单位 为毫 升（mL）； d 样 品溶 液稀 释倍 数； 样 品中 目标 物 的 预分 析 百分 含量 ， 用 百分 比（% ）表 示

49、。 7.2.4.2.2 液 体样 品稀 释 倍数的 计算 根据预 分析 中 目 标物 含量 测定结 果， 选择 合适 的 内/ 外标单 点法 定量 用标 准 工 作溶液 浓度 ， 并 按 照 公式（13） 计算 出样 品原 液以 10 为 单位 的稀 释次 数（n）， 使 样品 溶液 中目 标物的 浓度 在所 用标 准 工 作溶液 浓度 的（100 30 ）% 范围 内。 0 10 0 log = n mA C A V （13） 式中： n 样 品溶 液以 10 为 单位 的稀释 次数 ； 样 品中 目标 物 的 含量 ， 用百 分比 （% ）表示 ； m 样品 的称 量质 量， 单 位为毫 克 （mg ） ； A 0 外 标单 点法 定量 用标 准工作 溶液 中目 标物 的色 谱峰面 积平均 值； A 样品 溶液 中目标 物的 色 谱峰面 积平均 值； C 0 外 标单 点法 定量 用标 准工作 溶液 中目 标物 的浓 度，单 位为 毫克 每