SN T 5227.7-2019 出口食品中马源性成分快速检测 重组酶介导链替换核酸扩增法(RAA法).pdf
《SN T 5227.7-2019 出口食品中马源性成分快速检测 重组酶介导链替换核酸扩增法(RAA法).pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《SN T 5227.7-2019 出口食品中马源性成分快速检测 重组酶介导链替换核酸扩增法(RAA法).pdf(12页珍藏版)》请在麦多课文档分享上搜索。
1、以正式出版文本为准 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5227.7 2019 出口食品中马源性成分快速检测 重组酶介导链替换核酸扩增法(RAA 法) Rapid detection of horse derived ingredient in food for export Recombinase-aid amplification (RAA) method 2019-12-27发布 2020-07-01 实施 ICS 67.050 C 53 中华人民共和国海关总署发 布 以正式出版文本为准 以正式出版文本为准 SN/T 5227.7 2019 I 前 言 SN/T 522720
2、19出口食品中动物源性成分快速检测 重组酶介导链替换核酸扩增(RAA)法 预计分为如下部分: 第 1 部分:出口食品中鸡源性成分快速检测 重组酶介导链替换核酸扩增法(RAA 法); 第 2 部分:出口食品中猪源性成分快速检测 重组酶介导链替换核酸扩增法(RAA 法); 第 3 部分:出口食品中羊源性成分快速检测 重组酶介导链替换核酸扩增法(RAA 法); 第 4 部分:出口食品中鸭源性成分快速检测 重组酶介导链替换核酸扩增法(RAA 法); 第 5 部分:出口食品中牛源性成分快速检测 重组酶介导链替换核酸扩增法(RAA 法); 第 6 部分:出口食品中水牛源性成分快速检测 重组酶介导链替换核酸
3、扩增法(RAA 法); 第 7 部分:出口食品中马源性成分快速检测 重组酶介导链替换核酸扩增法(RAA 法); 第 8 部分:出口食品中驴源性成分快速检测 重组酶介导链替换核酸扩增法(RAA 法); 第 9 部分:出口食品中狐狸源性成分快速检测 重组酶介导链替换核酸扩增法(RAA 法); 第 10 部分:出口食品中貂源性成分快速检测 重组酶介导链替换核酸扩增法(RAA 法); 第 11 部分:出口食品中大鼠源性成分快速检测 重组酶介导链替换核酸扩增法(RAA 法)。 本部分为 SN/T 52272019 第 7 部分。 本部分按照 GB/T 1.12009 给出的规则起草。 本部分由中华人民共
4、和国海关总署提出并归口。 本部分起草单位:中华人民共和国郑州海关、中华人民共和国厦门海关、郑州牧业经济学院、 中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国北京海关、中华人民共和国大连海关、中华人民共和国成 都海关、中华人民共和国石家庄海关、杭州众测生物科技有限公司。 本部分主要起草人:苗丽、徐淑菲、王海花、张秀平、韩建勋、汪琳、郑秋月、林华、孔繁德、 王建昌、程奇。 以正式出版文本为准 以正式出版文本为准 SN/T 5227.7 2019 1 出口食品中马源性成分快速检测 重组酶介导链替换核酸扩增法(RAA 法) 1 范围 SN/T 52272019 的本部分规定了出口食品中马源性成分的 RAA 检
5、测方法。 本部分适用于出口食品中马源性成分的定性检测。 2 规范性引用文件 此部分所规定方法的最低检出限(LOD)为 0.1 %(W/W)。 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 274032008 实验室质量控制规范 食品分子生物学检测 3 术语、定义和缩略语 3.1术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1.1 马 Equus caballus 奇蹄目,马形亚目,马科,马亚科,马属。 3.1.2 实时荧光
6、 RAA real-time RAA 一种重组酶介导链替换的恒温核酸快速扩增技术(简称 RAA 技术)。利用从细菌或真菌中获得的 重组酶,在恒温下(一般为 37 42 ),该重组酶可与引物紧密结合,形成酶和引物的聚合体,在 单链 DNA 结合蛋白的帮助下,打开模板 DNA 的双链结构,当引物在模板 DNA 上搜索到与之完全匹 配的互补序列时,在 DNA 聚合酶的作用下,形成新的 DNA 互补链,扩增产物以指数级增长。利用荧 光探针的标记,随着 RAA 反应的进行,RAA 产物与荧光信号的增长呈现对应关系。 3.1.3 Ct 值 cycle threshold 每个反应管内的荧光信号达到设定阈值
7、时所经历的循环数。 3.1.4 T 值 Time threshold 每个反应管内荧光信号达到设定阈值时所需要的时间。 以正式出版文本为准 SN/T 5227.7 2019 2 3.2缩略语 下列缩略语适用于本文件。 BS-recA : Bacillus subtilis recombinase,枯草芽孢杆菌重组酶。 Bsu : Bacillus subtilis,枯草芽孢杆菌。 CTAB :cetyltrithylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵。 DNA :deoxyribonuleic acid,脱氧核糖核酸。 dNTPs :deoxyribonuleoside t
8、riphosphate,脱氧核苷三磷酸。 EDTA :ethylene diaminetetraacetic acid,乙二胺四乙酸。 RAA :重组酶介导扩增(recombinase-aid amplification)。 SC-recA : Streptomyces coelicolor recombinase,天蓝色链霉菌重组酶。 SSB :single stranded DNA binding protein,单链 DNA 结合蛋白。 Tricine :N-tris Hydroxymethyl methylglycine,N- 三羟甲基甲基氨基酸。 Tris :tris(Hydroxy
9、methyl)aminomethane,三羟甲基氨基甲烷。 4 方法提要 以提取的 DNA 为模板,采用马的特异性检测引物和探针进行实时荧光 RAA 扩增,根据实时荧光 RAA 的增幅情况,实现对食品和饲料中马成分的检测鉴定。 5 试剂和材料 除另有规定外,所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水符合 GB/T 6682 的要求。所有试剂均 用无 DNA 酶污染的容器分装。 表 1 检测用引物和探针 物种名称 引物 / 探针序列(5 null 3 null) 扩增片段长度 靶基因 马 F :AGCTATTCCCCTATGGGCAGGGACAGTATT 211bp 线粒体 ATP 合成酶 6 (A
10、TPase-6) R :GATGAGGTGTATTAGGAGGTGTCCGGCGGT P :TACTAGTAATTATCGAGACTATCAGCC TATFAM-dTTTHFBHQ-dTTCAACCTGTAGCCCT-C3spacer 注: 目的基因序列参见附录 A。F 为上游引物,R 为下游引物,P 为探针,FAM-dT,THF,BQH-dT 和 C3spacer 均为探针修饰基团。 5.1 CTAB 提取缓冲液(pH8.0):10 g/L CTAB,0.7 mol/L NaCl,0.05 mol/L Tris-HCl,0.01 mol/L Na 2 EDTA。 5.2 酚 : 氯仿 : 异
- 1.请仔细阅读文档,确保文档完整性,对于不预览、不比对内容而直接下载带来的问题本站不予受理。
- 2.下载的文档,不会出现我们的网址水印。
- 3、该文档所得收入(下载+内容+预览)归上传者、原创作者;如果您是本文档原作者,请点此认领!既往收益都归您。
下载文档到电脑,查找使用更方便
5000 积分 0人已下载
下载 | 加入VIP,交流精品资源 |
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- SN 5227.7-2019 出口食品中马源性成分快速检测 重组酶介导链替换核酸扩增法RAA法 5227.7 2019 出口 食品 中马源性 成分 快速 检测 重组 酶介导链 替换 核酸 扩增 RAA

链接地址:http://www.mydoc123.com/p-1521148.html