SN T 2012-2019 出口食醋中苯甲酸、山梨酸的检测方法 液相色谱及液相色谱-质谱质谱法.pdf
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1、书书书 犐犆犛 犆 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛犖 犜 代替 出口食醋中苯甲酸、山梨酸的检测方法 液相色谱及液相色谱 质谱质谱法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犫犲狀狕狅犻犮犪犮犻犱犪狀犱狊狅狉犫犻犮犪犮犻犱犻狀狏犻狀犲 犵 犪狉犳狅狉犲狓 狆 狅狉狋 犔犆犪狀犱犔犆犕犛 犕犛犿犲狋犺狅犱 发布 实施 中华人民共和国海关总署发布 书书书 前 言 本标准是按照 给出的规则编写。 本标准代替 进出口食醋中苯甲酸、山梨酸的检测方法 液相色谱法,除编辑 性修改外,主要变化如下: 本标准增加确证法; 标准名称改为出口食醋中苯甲酸山梨酸的检测方法液相色谱及液相色谱 质谱法。 本标准由中华人民共
2、和国海关总署提出并归口。 本标准起草单位:中华人民共和国太原海关、山西中医药大学。 本标准主要起草人:花锦、宋欢、高媛惠、张鑫鑫、刘晓琳、郭丽丽。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为: 。 犛犖 犜 出口食醋中苯甲酸、山梨酸的检测方法 液相色谱及液相色谱 质谱质谱法 范围 本标准规定了进出口食醋中苯甲酸、山梨酸的液相色谱检测以及液相色谱 质谱质谱检测和确证 方法。 本标准适用于食醋中苯甲酸、山梨酸的测定和确证。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本标 准。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本标准。 分析实
3、验室用水规格和试验方法 方法提要 试样在酸性条件下蒸馏,馏出液采用液相色谱紫外检测器或液相色谱 质谱质谱仪测定,外标峰面 积法定量。 试剂和材料 除有特殊说明以外,所用试剂均为分析纯,水为一级水。 甲醇:色谱纯。 乙腈:色谱纯。 柠檬酸( )。 柠檬酸三钠( )。 酒石酸。 乙酸铵:色谱纯。 氯化钠。 碳酸氢钠。 柠檬酸缓冲溶液( ):称取柠檬酸( ) 和柠檬酸三钠( ) 加水溶解定容 至 。 酒石酸( ):取 酒石酸( )用水定容到 。 碳酸氢钠溶液( ):称取 碳酸氢钠( ),加水至 ,振摇溶解。 乙酸铵溶液:称取 乙酸铵( ),加水至 ,振摇溶解。 苯甲酸钠标准物质( , 号: ),纯度
4、 :或苯甲酸( , 号: ),纯度 ,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。 山梨酸钾标准物质( , 号: ),纯度 ;或山梨酸( , 号: ),纯度 ,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。 苯甲酸、山梨酸标准储备溶液( ):分别准确称取苯甲酸钠( )和山梨酸钾( )标 犛犖 犜 准物质 、 (精确到 ),用水溶解并分别定容至 。于 贮存。当使用苯甲 酸和山梨酸标准品时,需要用甲醇溶解并定容。 苯甲酸、山梨酸标准混合液:准确移取苯甲酸、山梨酸标准储备液( )各 ,移入 容量瓶中,用水定容。置于 保存 周。 空白样品提取液:采用空白样品,按照 步骤得到的溶液。 消泡剂:信越 。 滤膜:
5、 ,水系。 滤膜: ,水系。 仪器和设备 天平:感量为 和 。 高效液相色谱仪:配紫外检测器。 高效液相色谱 质谱质谱仪,配有电喷雾离子源( )。 蒸馏装置:参见附录 。 测定步骤 试样的处理 准确称取 试样,加入 氯化钠( ), 酒石酸溶液( ), 滴消泡剂( ),加 水至约 ,混匀后,进行蒸馏(蒸馏速度约为 ),收集约 馏出液,用水定容至 。用 的滤膜过滤后,待液相色谱测定(如需质谱法确证,用 的滤膜过滤)。 测定 液相色谱条件 液相色谱条件如下: ) 色谱柱: 柱( , ,或相当者); ) 流动相:甲醇:乙腈: 柠檬酸缓冲溶液( , ); ) 流速: ; ) 检测波长: ; ) 柱温:
6、; ) 进样量: 。 高效液相色谱 质谱质谱条件 高效液相色谱 质谱质谱条件如下: ) 色谱柱: 柱( , ,或相当者); ) 流动相:甲醇 乙酸铵溶液,梯度洗脱程序见表 ; 表 梯度洗脱程序 时间( ) 乙酸铵( )甲醇( ) 犛犖 犜 表 (续) 时间( ) 乙酸铵( )甲醇( ) ) 流速: ; ) 柱温: ; ) 进样量: ; ) 离子源:电喷雾离子源; ) 扫描方式:负离子; ) 检测方式:多反应监测( ); ) 质谱质谱参考条件参见附录 。 液相色谱测定 根据样液中苯甲酸和山梨酸的含量,选定浓度相近的标准混合工作液,保证样品溶液中苯甲酸、山 梨酸的响应值在线性范围内,标准工作液与样
7、液等体积参差进样进行测定。在上述色谱条件下,苯甲酸 和山梨酸的参考保留时间分别约为 和 。苯甲酸、山梨酸标准溶液色谱图参见附录 中 。 液相色谱 质谱质谱测定和确证 按照液相色谱 质谱质谱条件测定样品和基质标准工作溶液,如果目标化合物的保留时间与标准 品保留时间相差不超过 ,所选择的离子对均出现,且定性离子对的丰度比与浓度相当基质标准 工作溶液的丰度比一致,丰度比允许偏差不超过表 规定的范围,则可确定为样品中存在对应的待测分 析物。苯甲酸、山梨酸标准溶液多反应监测图参见附录 。 表 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差 相对丰度( 基峰)允许的相对偏差 到 到 空白试验 除不加式样外,均按上述
8、步骤进行。 结果计算和表述 用色谱数据处理软件外标法或按式( )计算,计算结果需扣除空白值: 犛犖 犜 犡犻 犃犮犻犞 犃犛犿 ( ) 式中: 犡犻 试样中苯甲酸或山梨酸含量,单位为毫克每千克( ); 犃 样液中苯甲酸或山梨酸的峰面积; 犮犻 标准工作液中苯甲酸或山梨酸的浓度,单位为微克每毫升( ); 犞 样液最终定容体积,单位为毫升( ); 犃犛 标准工作液中苯甲酸或山梨酸的峰面积; 犿 试样的质量,单位为克( )。 计算结果以待测物的平行测定值的算术平均值表示。当计算结果大于等于 时,保留到三位有效 数字;当计算结果小于等于 时,保留到两位有效数字。 定量限、正确度(回收率)测定低限 测定
9、低限 液相色谱法及液相色谱 质谱质谱法中苯甲酸和山梨酸的定量限均为 。 回收率 液相色谱及液相色谱 质谱质谱法的测定回收率参见附录 。 犛犖 犜 附 录 犃 (资料性附录) 蒸馏装置图 + Char212Char181Char201Char198 Char32Char208Char192Char196Char185 Char50Char53Char48Char109Char108Char200Char189Char198 Char192Char196Char215Char214 Char33Char34Char204 图 犃 蒸馏装置图 犛犖 犜 附 录 犅 (资料性附录) 质谱仪器参考条件
10、犅 质谱仪器参考条件 ) 毛细管电压: ; ) 去溶剂气温度:氮气 ; ) 锥孔反吹气:氮气 ; ) 去溶剂气流速:氮气 ; ) 离子源温度: ; ) 碰撞气体:氩气 。 表 犅 苯甲酸和山梨酸的定性、定量离子对及碰撞能量 目标物名称定性离子对( )定量离子对( )碰撞气能量 苯甲酸 山梨酸 为定量离子;对于不同质谱仪器,仪器参数可能存在差异,测定前应将质谱参数优化到最佳。 非商业性声明:附录 所列参考质谱条件是在 液质联用仪上完成的,此处列出试验 用仪器型号仅为提供参考,并不涉及商业目的,鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。 犛犖 犜 附 录 犆 (资料性附录) 标准品液相色谱图及多反应
11、监测( 犕犚犕 )色谱图 图 犆 苯甲酸、山梨酸标准品液相色谱图 注:图中各峰分别为: :苯甲酸、 :山梨酸 图 犆 苯甲酸标准物质多反应监测( 犕犚犕 )色谱图 图 犆 山梨酸标准物质多反应监测( 犕犚犕 )色谱图 犛犖 犜 附 录 犇 (资料性附录) 正确度(回收率) 表 犇 液相色谱和液相色谱 质谱质谱法的回收率 名称添加水平( )液相色谱法液相色谱串联质谱法 苯甲酸 山梨酸 犛犖 犜 犉狅狉犲狑狅狉犱 犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱犻狊犪犮犮狅狉犱犪狀犮犲犱狑犻狋犺犌犅 犜 犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱狑犪狊狆狉狅狆狅狊犲犱犫狔犪狀犱犻狊狌狀犱犲狉狋犺犲犮犺犪狉犵犲狅犳狋犺犲犌犲狀犲狉犪犾犃犱犿
12、犻狀犻狊狋狉犪狋狅狅狀狅犳犆狌狊狋狅犿狊狅犳 狋犺犲犘犲狅狆犾犲狊犚犲狆狌犾犫犻犮狅犳犆犺犻狀犪 犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱狑犪狊犱狉犪犳狋犲犱犫狔狋犺犲犜犪犻犢狌犪狀犆狌狊狋狅犿狊犇犻狊狋狉犻犮狋狅犳狋犺犲犘犲狅狆犾犲狊犚犲狆狌犫犾犻犮狅犳犆犺犻狀犪 , 犛犺犪狀狓犻 狌狀犻狏犲狉狊犻狋狔狅犳狋狉犪犱犻狋犻狅狀犪犾犆犺犻狀犲狊犲犿犲犱犻犮犻狀犲 犜犺犻狊犿犪犻狀犱狉犪犳狋犲狉狊狅犳狋犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱犪狉犱犎狌犪犑犻狀 , 犛狅狀犵犎狌犪狀 , 犌犪狅犢狌犪狀犺狌犻 , 犣犺犪狀犵犡犻狀狓犻狀 , 犔犻狌犡犻犪狅犾犻狀 , 犌狌狅犔犻犾犻 犖狅狋犲 : 犜犺犻狊犈狀犵犾犻狊犺狏犲狉狊犻狅狀
13、 , 犪狋狉犪狀狊犾犪狋犻狅狀犳狉狅犿狋犺犲犆犺犻狀犲狊犲狋犲狓狋 , 犻狊狊狅犾犲犾狔犳狅狉犵狌犻犱犪狀犮犲 犛犖 犜 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犫犲狀狕狅犻犮犪犮犻犱犪狀犱狊狅狉犫犻犮犪犮犻犱犻狀 狏犻狀犲 犵 犪狉犳狅狉犲狓 狆 狅狉狋 犔犆犪狀犱犔犆犕犛 犕犛犿犲狋犺狅犱 犛犮狅 狆 犲 犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱狊狆犲犮犻犳犻犲狊狋犺犲犿犲狋犺狅犱狅犳狊犪犿狆犾犲犱犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀犪狀犱犮狅狀犳犻狉犿犪狋犻狅狀狅犳犫犲狀狕狅犻犮犪犮犻犱犪狀犱 狊狅狉犫犻犮犪犮犻犱犻狀狏犻狀犲犵犪狉犳狅狉犲狓狆狅狉狋犫狔犾犻狇狌犻犱犮犺狉狅犿犪狋狅犵狉犪狆犺狔狋犪狀犱犲犿犿犪狊狊狊狆犲犮狋狉
14、狅犿犲狋狉狔 犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱犻狊犪狆狆犾犻犮犪犫犾犲狋狅狋犺犲犱犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犫犲狀狕狅犻犮犪犮犻犱犪狀犱狊狅狉犫犻犮犪犮犻犱犻狀狏犻狀犲犵犪狉 犖狅狉犿犪狋犻狏犲狉犲犳犲狉犲狀犮犲 犜犺犲犳狅犾犾狅狑犻狀犵狀狅狉犿犪狋犻狏犲犱狅犮狌犿犲狀狋狊犮狅狀狋犪犻狀狆狉狅狏犻狊犻狅狀狊狑犺犻犮犺 , 狋犺狉狅狌犵犺狉犲犳犲狉犲狀犮犲犻狀狋犺犻狊狋犲狓狋 , 犮狅狀 狊狋犻狋狌狋犲狆狉狅狏犻狊犻狅狀狊狅犳狋犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱犉狅狉犱犪狋犲犱狉犲犳犲狉犲狀犮犲狊 , 狊狌犫狊犲狇狌犲狀狋犪犿犲狀犱犿犲狀狋狊狋狅 , 狅狉狉犲狏犻狊犻狅狀狊 狅犳犪狀狔狅犳狋犺犲狊犲狆狌犫犾犻犮犪
15、狋犻狅狀狊犱狅狀狅狋犪狆狆犾狔犎狅狑犲狏犲狉狆犪狉狋犻犲狊狋狅犪犵狉犲犲犿犲狀狋狊犫犪狊犲犱狅狀狋犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱犪狉犲 犲狀犮狅狌狉犪犵犲犱狋狅犻狀狏犲狊狋犻犵犪狋犲狋犺犲狆狅狊狊犻犫犻犾犻狋狔狅犳犪狆狆犾狔犻狀犵狋犺犲犿狅狊狋狉犲犮犲狀狋犲犱犻狋犻狅狀狊狅犳狋犺犲狀狅狉犿犪狋犻狏犲犱狅犮狌 犿犲狀狋狊犻狀犱犻犮犪狋犲犱犫犲犾狅狑犉狅狉狌狀犱犪狋犲犱狉犲犳犲狉犲狀犮犲狊 , 狋犺犲犾犪狋犲狊狋犲犱犻狋犻狅狀狅犳狋犺犲狀狅狉犿犪狋犻狏犲犱狅犮狌犿犲狀狋狉犲 犳犲狉狉犲犱狋狅犪狆狆犾犻犲狊 犌犅 犜犠犪狋犲狉犳狅狉犪狀犪犾狔狋犻犮犪犾犾犪犫狅狉犪狋狅狉狔狌狊犲犛狆犲犮犻犳犻犮犪狋犻狅狀犪狀
16、犱狋犲狊狋犿犲狋犺狅犱狊 犘狉犻狀犮犻 狆 犾犲 犜犺犲狋犲狊狋狊犪犿狆犾犲犻狊犱犻狊狋犻犾犾犲犱犻狀犪犮犻犱犮狅狀犱犻狋犻狅狀狊 , 犪犳狋犲狉狋犺犲狀 , 犱犲狋犲狉犿犻狀犲犱犫狔犔犆犕犛 犕犛狑犻狋犺犲狓狋犲狉狀犪犾 狊狋犪狀犱犪狉犱犿犲狋犺狅犱 犚犲犪 犵 犲狀狋狊犪狀犱犕犪狋犲狉犻犪犾狊 犝狀犾犲狊狊狅狋犺犲狉狑犻狊犲狊狆犲犮犻犳犻犲犱 , 犪犾犾狋犺犲狉犲犪犵犲狀狋狊狌狊犲犱狊犺狅狌犾犱犫犲犪狀犪犾狔狋犻犮犪犾犾狔狆狌狉犲 , 狑犪狋犲狉犻狊犮狅犿狆犾犻犲犱狑犻狋犺 犌犅 犜狆狉狅狏犻犱犲狊 犕犲狋犺犪狀狅犾 : 犎犘犔犆犵狉犪犱犲 犃犮犲狋狅狀犻狋狉犻犾犲 : 犎犘犔犆犵狉犪犱犲
17、 犆犻狋狉犻犮犪犮犻犱 ( 犆犎犗犎犗 ) 犛犖 犜 犜狉犻狊狅犱犻狌犿犮犻狋狉犪狋犲 ( 犖犪犆犎犗 犎犗 ) 犜犪狉狋犪狉犻犮犪犮犻犱 犃犿犿狅狀犻狌犿犪犮犲狋犪狋犲 : 犎犘犔犆犵狉犪犱犲 犛狅犱犻狌犿犮犺犾狅狉犻犱犲 犛狅犱犻狌犿犫犻犮犪狉犫狅狀犪狋犲 犆犻狋狉犻犮犪犮犻犱犫狌犳犳犲狉狊狅犾狌狋犻狅狀 ( 犿犿狅犾 犔 ): 犇犻犾狌狋犲犮犻狋狉犻犮犪犮犻犱 ( ) 犵犪狀犱犜狉犻狊狅犱犻狌犿犮犻狋狉犪狋犲 ( ) 犵狑犻狋犺狑犪狋犲狉狋狅狋犺犲狏狅犾狌犿犲狅犳犔 犜犪狉狋犪狉犻犮犪犮犻犱 ( ): 犇犻犾狌狋犲狋犪狉狋犪狉犻犮犪犮犻犱 ( ) 犵狑犻狋犺狑犪狋犲狉狋狅狋犺犲狏狅犾狌犿
18、犲狅犳犿犔 犛狅犱犻狌犿犫犻犮犪狉犫狅狀犪狋犲狊狅犾狌狋犻狅狀 ( 犵 犔 ): 犇犻犾狌狋犲狊狅犱犻狌犿犫犻犮犪狉犫狅狀犪狋犲 ( ) 犵狑犻狋犺狑犪狋犲狉狋狅狋犺犲 狏狅犾狌犿犲狅犳犿犔 , 狊犺犪犽犻狀犵犪狀犱犱犻狊狊狅犾狏犻狀犵 犃犿犿狅狀犻狌犿犪犮犲狋犪狋犲狊狅犾狌狋犻狅狀 ( 犿犿狅犾 犔 ): 犇犻犾狌狋犲犪犿犿狅狀犻狌犿犪犮犲狋犪狋犲 ( ) 犵狑犻狋犺狑犪狋犲狉 狋狅狋犺犲狏狅犾狌犿犲狅犳犐犔 , 狊犺犪犽犻狀犵犪狀犱犱犻狊狊狅犾狏犻狀犵 犛狅犱犻狌犿犫犲狀狕狅犪狋犲 ( 犆犎犆犗犗犖犪 , 犆犃犛犖狅 : ), 犘狌狉犻狋狔 ; 狅狉犫犲狀狕狅犻犮犪犮犻犱 ( 犆犎犆犗犗犎
19、 , 犆犃犛犖狅 : ), 犘狌狉犻狋狔 , 犆犲狉狋犻犳犻犲犱狉犲犳犲狉犲狀犮犲犿犪狋犲狉犻犪犾狊犮犲狉狋犻犳犻犲犱犫狔狋犺犲狊狋犪狋犲 犪狀犱犮犲狉狋犻犳犻犲犱犫狔犮犲狉狋犻犳犻犲犱狉犲犳犲狉犲狀犮犲犿犪狋犲狉犻犪犾狊 犘狅狋犪狊狊犻狌犿狊狅狉犫犪狋犲 ( 犆犎犓犗 , 犆犃犛犖狅 : ), 犘狌狉犻狋狔 ; 狅狉狊狅狉犫犻犮犪犮犻犱 ( 犆犎犗 , 犆犃犛 犖狅 : ), 犘狌狉犻狋狔 , 犆犲狉狋犻犳犻犲犱狉犲犳犲狉犲狀犮犲犿犪狋犲狉犻犪犾狊犮犲狉狋犻犳犻犲犱犫狔狋犺犲狊狋犪狋犲犪狀犱犮犲狉狋犻犳犻犲犱犫狔 犮犲狉狋犻犳犻犲犱狉犲犳犲狉犲狀犮犲犿犪狋犲狉犻犪犾狊 犛狋犪狀犱犪狉犱狊狋狅
20、犮犽狊狅犾狌狋犻狅狀狅犳犫犲狀狕狅犻犮犪犮犻犱犪狀犱狊狅狉犫犻犮犪犮犻犱 ( 犿犵 犔 ): 犃犮犮狌狉犪狋犲犾狔狑犲犻犵犺犪狀犪犱 犲狇狌犪狋犲犪犿狅狌狀狋狅犳犫犲狀狕狅犻犮犪犮犻犱 ( ) 犵犪狀犱狊狅狉犫犻犮犪犮犻犱 ( ) 犵 , 犱犻犾狌狋犲狑犻狋犺狑犪狋犲狉狋狅狋犺犲 狏狅犾狌犿犲狅犳犿犔犐狋狊犺狅狌犾犱犫犲狊狋狅狉犲犱犻狀犪狉犲犳狉犻犵犲狉犪狋狅狉犪狋 , 犠犺犲狀狌狊犻狀犵犫犲狀狕狅犻犮犪犮犻犱犪狀犱狊狅狉犫犻犮 犪犮犻犱狊狋犪狀犱犪狉犱 , 犻狋犻狊狀犲犮犲狊狊犪狉狔狋狅犕犻狓犲犱狊狋犪狀犱犪狉犱狊狋狅犮犽狊狅犾狌狋犻狅狀狅犳犫犲狀狕狅犻犮犪犮犻犱犪狀犱狊狅狉犫犻犮犪犮犻犱
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