DB5133 T 31-2019 牦牛梨形虫病防治技术规范.pdf

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1、ICS 点 击 此 处 添 加 ICS号点 击 此 处 添 加 中 国 标 准 文 献 分 类 号 DB51四 川 省 （ 甘 孜 州 ） 地 方 标 准DB 5133/T 31 2019牦 牛 梨 形 虫 病 防 治 技 术 规 范 Technical Regulation of Prevention and Treatment of Yak Piroplasmosis 2019 - 12- 30发 布 2020- 01-30实 施甘 孜 州 市 场 监 督 管 理 局 发 布 DB5133/T 31 2019 I 目 次前 言 .II1 范 围 .12 规 范 性 引 用 文 件 .13

2、术 语 与 定 义 .14 诊 断 .25 防 治 .4 DB5133/T 31 2019 II 前 言本 标 准 按 GB/T 1.1 2009 标 准 化 工 作 导 则 第 1部 分 标 准 的 结 构 和 编 写 给 出 的 规 则 起 草 。本 标 准 由 甘 孜 藏 族 自 治 州 农 牧 农 村 局 提 出 并 归 口 。本 标 准 起 草 单 位 ： 甘 孜 藏 族 自 治 州 畜 牧 业 科 学 研 究 所 、 西 南 民 族 大 学 生 命 科 学 与 技 术 学 院 。本 标 准 主 要 起 草 人 ： 李 友 英 汤 承 贺 安 祥 郝 力 力 任 秀 梅 刘 怡 雯

3、尼 玛 央 宗 蓝 岚 张 康 林 潘 瑶 。 DB5133/T 31 2019 1 牦 牛 梨 形 虫 病 防 治 技 术 规 范1 范 围本 标 准 规 定 了 牦 牛 梨 形 虫 病 的 诊 断 和 防 治 。本 标 准 适 用 于 甘 孜 州 行 政 区 域 内 牦 牛 养 殖 户 及 动 物 疫 病 诊 疗 单 位 对 牦 牛 梨 形 虫 病 的 诊 断 和 防 治 。2 规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 对 于 本 文 件 的 应 用 是 必 不 可 少 的 。 凡 是 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 仅 所 注 日 期 的 版 本 适 用 于 本 文件 。 凡 是 不

4、 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 最 新 版 本 （ 包 括 所 有 的 修 改 单 ） 适 用 于 本 文 件 。GB 19489 实 验 室 生 物 安 全 通 用 要 求 GB 16548 病 害 动 物 和 病 害 动 物 产 品 生 物 安 全 处 理 规 程GB 16567 种 畜 禽 调 运 检 疫 技 术 规 范NY/T 472 绿 色 食 品 兽 药 使 用 准 则NY/T 5030 无 公 害 农 产 品 兽 药 使 用 准 则SN/T 1678 梨 形 虫 病 病 原 鉴 定 方 法 中 华 人 民 共 和 国 兽 药 典 3 术 语 与 定 义下 列 术 语 和

5、 定 义 适 用 于 本 文 件 。3.1 牦 牛 梨 形 虫 病 Yak piroplasmosis 由 顶 复 门 、 孢 子 虫 纲 、 梨 形 虫 亚 纲 中 的 巴 贝 斯 科 和 泰 勒 科 原 虫 寄 生 于 牦 牛 体 内 引 起 的 一 类 血 液 原 虫病 ， 过 去 称 为 焦 虫 病 或 血 孢 子 虫 病 。3.2 牦 牛 巴 贝 斯 虫 病 Yak babesia由 巴 贝 斯 科 、 巴 贝 斯 属 的 梨 形 虫 寄 生 于 牦 牛 的 红 细 胞 内 引 起 的 一 类 疾 病 。3.3 牦 牛 泰 勒 虫 病 Yak theileriosis由 泰 勒 科

6、、 泰 勒 属 的 梨 形 虫 寄 生 于 牦 牛 的 巨 噬 细 胞 、 淋 巴 细 胞 和 红 细 胞 内 引 起 的 一 类 疾 病 。3.4 蜱 tick DB5133/T 31 2019 2 属 节 肢 动 物 门 、 蛛 形 纲 、 蜱 螨 亚 纲 、 寄 螨 目 、 蜱 总 科 ， 为 专 性 体 外 吸 血 的 节 肢 动 物 ， 是 一 类 陆 生 脊椎 动 物 身 上 的 非 永 久 性 体 外 寄 生 虫 。4 诊 断4.1 病 原牦 牛 梨 形 虫 病 的 病 原 主 要 有 巴 贝 斯 科 的 牛 双 芽 巴 贝 斯 虫 和 牛 巴 贝 斯 虫 ， 以 及 泰 勒 虫

7、 科 的 环 形 泰 勒虫 、 中 华 泰 勒 虫 和 瑟 氏 泰 勒 虫 。 牦 牛 梨 形 虫 病 感 染 牛 耳 尖 采 血 涂 片 ,姬 姆 萨 染 色 ,在 油 镜 下 对 红 细 胞 内 的虫 体 形 态 进 行 观 察 ， 主 要 病 原 学 特 征 参 见 表 1。表 1 牦 牛 梨 形 虫 病 主 要 病 原 学 特 征科 种 虫 体 大 小 形 状 染 色 质 巴 贝斯科 双 芽巴 贝斯 虫 长 度 大 于 红 细 胞半 径 ， 大 小 约 为4.0-5.0m2.0m。 主 要 有 环 形 、 梨 籽 形 、 圆 形 、 椭 圆形 、 不 规 则 形 等 ， 典 型 虫 体

8、 形 状 为成 双 的 梨 籽 形 ， 尖 端 以 锐 角 相 连 。虫 体 大 都 在 红 细 胞 的 中 央 。 多 为 浅 蓝 色 的 两 团 ， 位 于 虫 体边 缘 部 ， 颜 色 较 深 ， 中 部 呈 空泡 状 的 无 色 区 。牛 巴贝 斯虫 长 度 小 于 红 细 胞半 径 ， 梨 籽 形 虫体 大 小 约 为1.8-2.8m0.8-1.2m。 主 要 有 梨 形 、 圆 形 、 椭 圆 形 不 规 则形 及 阿 米 巴 形 等 ， 典 型 虫 体 形 状 为成 双 的 梨 籽 形 ， 尖 端 以 钝 角 相 连 。虫 体 大 都 寄 生 在 红 细 胞 边 缘 或 偏 中央

9、 。 呈 淡 蓝 色 的 一 团 ， 位 于 虫 体 一端 或 两 端 ， 边 缘 比 中 部 着 色 深 。 泰 勒科 环 形泰 勒虫 虫 体 小 ， 大 小 约为 0.8-1.7m。 形 态 多 样 ， 有 杆 形 、 梨 形 、 圆 环 形 、卵 圆 形 、 逗 点 形 、 圆 点 形 、 十 字 架形 等 ， 以 圆 环 形 、 卵 圆 形 为 主 。 呈 淡 蓝 色 ， 包 含 许 多 紫 红 色 颗粒 状 的 核 。 圆 环 形 虫 体 原 生 质位 于 边 缘 ， 多 呈 半 月 形 。 卵 圆形 虫 体 原 生 质 位 于 虫 体 较 粗 一端 。中 华泰 勒虫 梨 子 形 虫

10、 体 大 小为 0.5-2.5um0.4-1.2m。 圆 环形 虫 体 大 小 为1.4-3.2um。 有 梨 子 形 、 圆 环 形 、 杆 形 、 边 虫 样 、椭 圆 形 、 三 叶 形 、 十 字 架 形 、 双 梨子 形 、 不 规 则 形 、 出 芽 形 、 逗 点 形等 ， 以 梨 籽 形 和 圆 环 形 虫 体 为 主 。大 多 数 虫 体 很 大 ， 有 的 甚 至 占 据 整个 红 细 胞 ， 有 的 仅 为 核 而 见 不 到 原生 质 。 呈 浅 蓝 色 。 梨 子 形 虫 体 紫 红 色的 核 多 位 于 钝 端 。 圆 环 形 虫 体中 央 透 明 ， 紫 红 色

11、的 核 位 于 边缘 。东 方（ 瑟氏 ） 泰勒 虫 大 小 类 似 环 形 泰勒 虫 。 除 有 特 别 长 的 杆 状 形 外 ， 其 他 形 态类 似 环 形 泰 勒 虫 ， 但 瑟 氏 泰 勒 虫 以杆 形 和 梨 籽 形 为 主 。 呈 淡 蓝 紫 色 ， 位 于 虫 体 一 端 。 DB5133/T 31 2019 3 4.2 流 行 病 学 特 点4.2.1 巴 贝 斯 虫 病多 发 生 于 6-9月 ,呈 散 发 。 两 岁 以 内 的 犊 牛 多 发 ； 本 地 牛 症 状 轻 微 ， 引 进 牛 、 纯 种 牛 和 改 良 牛 常 表 现明 显 临 床 症 状 。4.2.2

12、 泰 勒 虫 病环 形 泰 勒 虫 病 多 发 于 5-8月 份 ， 主 要 引 起 1-3岁 的 舍 饲 牛 发 病 ， 本 地 牛 的 发 病 率 和 死 亡 率 较 低 ， 而 引入 牛 易 感 性 高 。 东 方 （ 瑟 氏 ） 泰 勒 虫 和 中 华 泰 勒 虫 病 多 发 于 5-10月 份 ， 主 要 引 起 2-3岁 放 牧 牛 发 病 ， 年龄 越 大 ， 发 病 率 越 低 。4.3 典 型 临 床 症 状巴 贝 斯 虫 病 潜 伏 期 为 1周 -2周 ， 泰 勒 虫 病 潜 伏 期 在 2周 至 数 周 。 临 床 主 要 可 见 体 温 升 高 ， 呈 稽 留 热 型

13、 ； 贫 血 ， 可 视 黏 膜 苍 白 或 黄 染 ； 出 现 血 红 蛋 白 尿 ， 尿 由 浅 红 色 至 棕 红 色 、 黑 红 色 ； 泰 勒 虫 病 牛 体 表 淋 巴 结肿 大 ； 巴 贝 斯 虫 感 染 时 ， 会 表 现 较 严 重 的 神 经 症 状 。4.4 典 型 病 理 变 化病 理 变 化 主 要 有 血 液 稀 薄 如 水 ， 凝 固 不 良 ； 皮 下 组 织 、 肌 肉 结 蹄 组 织 和 脂 肪 呈 黄 色 胶 样 水 肿 状 ； 全身 皮 下 、 肌 间 、 黏 膜 和 浆 膜 上 可 见 出 血 点 与 出 血 斑 ； 实 质 性 脏 器 肿 大 ， 肺

14、 脏 淤 血 、 水 肿 ， 并 有 出 血 点 ；皱 胃 和 肠 粘 膜 潮 红 并 有 点 状 出 血 ； 泰 勒 虫 病 牛 的 淋 巴 结 肿 胀 ， 切 面 多 汁 ， 有 暗 红 色 和 灰 白 色 大 小 不 一 的结 节 。4.5 梨 形 虫 鉴 定4.5.1 血 液 涂 片 姬 姆 萨 染 色 镜 检病 牛 采 集 血 液 制 成 血 液 涂 片 后 ， 经 姬 姆 萨 染 色 后 镜 检 ， 应 参 照 SN/T1678与 表 1所 描 述 的 病 原 特 点 进 行 鉴 定 。4.5.2 巢 式 PCR检 测4.5.2.1 生 物 安 全 要 求样 品 采 集 、 处 理

15、 及 检 测 过 程 中 涉 及 的 实 验 操 作 ， 应 遵 守 GB 19489的 相 关 规 定 。4.5.2.2 样 品 处 理采 集 牦 牛 静 脉 血 5ml 10ml于 抗 凝 真 空 采 血 管 中 ， 编 号 ， 4 保 存 ， 送 检 。4.5.2.3 DNA提 取用 全 血 DNA提 取 试 剂 盒 提 取 全 血 总 DNA， 提 取 的 DNA立 刻 进 行 PCR扩 增 或 -20 保 存 备 用 。4.5.2.4 反 应 体 系 及 反 应 条 件 DB5133/T 31 2019 4 外 上 游 引 物 ： GATAACCGTGCTAATTGTAGG， 外 下

16、 游 引 物 ： ATCGTCTTCGATCCCCTAACT， 扩 增 片 段 大 小 为843bp； 内 上 游 引 物 ： AATTGTAGGGCTAATACATGTTCG， 内 下 游 引 物 ： GAAAACATCCTTGGCAAATGCTTTCGC， 扩 增片 段 大 小 为 760bp， 靶 基 因 18SrRNA。反 应 条 件 为 ： 第 一 轮 反 应 94 预 变 性 3min； 94 变 性 30s， 60 退 火 40s， 72 延 伸 1min， 共 30个 循环 ； 72 延 伸 7min； 16 反 应 结 束 。 第 二 轮 反 应 95 预 变 性 4min；

17、 94 变 性 45s， 55 退 火 20s， 72 延伸 30s， 共 35个 循 环 ； 72 延 伸 10min； 16 反 应 结 束 。 将 第 二 轮 PCR产 物 经 1.5 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 鉴 定 。4.5.3 虫 种 鉴 定PCR产 物 克 隆 后 送 基 因 测 序 公 司 进 行 测 序 ， 序 列 分 析 后 确 定 虫 种 。 5 防 治5.1 预 防5.1.1 传 播 媒 介 驱 杀体 内 给 药 与 体 外 给 药 相 结 合 ， 杀 灭 牦 牛 体 表 和 环 境 中 的 蜱 虫 ， 全 年 进 行 3-4次 预 防 ， 通 过 牛 群 状 态以

18、及 流 行 特 点 进 行 酌 量 增 减 。 灭 蜱 常 用 药 物 及 具 体 用 法 参 见 表 2。表 2 灭 蜱 常 用 药 物 表药 名 用 法 与 用 量 注 意 事 项双 甲 脒 参 照 药 品 使 用 说 明 书 使 用 注 意 环 境 与 畜 体 同 时 处 理 。 21 天 休药 期 。二 嗪 农 畜 群 均 应 处 理 。溴 氰 菊 酯 间 隔 10-15d 重 复 使 用 1 次 。氰 戊 菊 酯 配 制 时 水 温 超 过 50 ， 药 液 会 失 效 ；还 应 避 免 使 用 碱 性 水 。碘 硝 酚 注 射 液 剂 量 必 须 准 确 掌 握 。伊 维 菌 素

19、注 射 液 仅 限 于 皮 下 注 射 ， 35 天 休 药 期 。5.2 治 疗5.2.1 用 药 原 则 DB5133/T 31 2019 5 应 依 据 NY/T 472、 NY/T 5030和 中 华 人 民 共 和 国 兽 药 典 等 规 定 ， 选 取 兽 医 主 管 部 门 规 定 批 准 的抗 梨 形 虫 药 物 。 注 意 应 选 取 多 种 抗 梨 形 虫 药 物 交 替 使 用 ， 以 免 产 生 耐 药 性 。5.2.2 治 疗常 用 治 疗 药 物 及 具 体 用 法 可 参 见 表 3。表 3 牦 牛 梨 形 虫 病 常 用 治 疗 药 物 表药 名 用 法 与 用

20、 量 注 意 事 项咪 唑 苯 脲 参 照 药 品 使 用 说 明 书 使 用 组 织 内 会 产 生 长 期 药 残 ， 规 定 休 药 期 45天 。贝 尼 尔 严 格 掌 握 用 药 剂 量 ， 一 般 用 药 一 次 比 较 安全 ， 连 续 使 用 易 出 现 毒 性 反 应 ， 应 对 症 治疗 。 休 药 期 28 天 。硫 酸 喹 啉 脲 出 现 肌 肉 震 颤 、 流 涎 、 呼 吸 困 难 等 不 良 反应 ， 严 重 者 可 皮 下 注 射 阿 托 品 。盐 酸 吖 啶 黄 缓 慢 注 射 ， 勿 漏 出 血 管 。 重 复 使 用 应 间 隔24-48h。青 蒿 琥 酯 本 品 有 明 显 胚 胎 毒 作 用 ， 妊 娠 畜 慎 用 。5.3 尸 体 、 粪 便 及 圈 舍 废 弃 物 处 理发 生 本 病 后 ， 应 隔 离 病 牛 ， 并 对 病 牛 的 圈 舍 、 器 具 、 周 围 环 境 以 及 可 能 污 染 的 场 地 严 格 消 毒 ， 消 毒药 物 的 使 用 和 消 毒 方 法 应 按 NY 5030和 NY/T 472规 定 执 行 。 病 死 牛 的 尸 体 、 粪 尿 及 污 染 物 应 按 GB 16548 规 定 处 理 。5.4 引 种 监 测对 省 外 引 种 的 牦 牛 应 按 照 GB 16567进 行 检 疫 。_