DB1302 T 522-2020 生猪屠宰场（点）非洲猪瘟快速检测技术规程.pdf

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1、ICS 11.220CCS B 41 DB1302唐 山 市 地 方 标 准DB1302/T 522-2020生 猪 屠 宰 场 （ 点 ） 非 洲 猪 瘟 快 速 检 测 技 术 规 程 2020-12-28 发 布 2021-01-10 实 施唐 山 市 市 场 监 督 管 理 局 发 布 DB1302/T 522-2020 I 前 言本 文 件 按 照 GB/T 1.1-2020 标 准 化 工 作 导 则 第 1部 分 ： 标 准 化 文 件 的 结 构 和 起 草 规 则 的 规 定起 草 。本 文 件 由 唐 山 市 农 业 农 村 局 提 出 并 归 口 。本 文 件 起 草 单

2、 位 ： 唐 山 市 动 物 卫 生 监 督 所 、 唐 山 市 动 物 疫 病 预 防 控 制 中 心 、 唐 山 怡 安 生 物 工 程 有 限公 司 。本 文 件 主 要 起 草 人 ： 刘 润 东 、 张 玉 新 、 李 润 、 李 杏 媛 、 韩 泽 雨 、 高 英 、 刘 志 勇 、 杨 思 源 、 崔 荣 飞 、毕 红 全 、 王 大 伟 、 梁 宝 、 李 敬 阳 、 代 广 、 张 英 杰 、 赵 艳 华 、 朱 秋 艳 、 徐 丽 、 康 晓 晓 、 肖 文 同 。 DB1302/T 522 2020 1 生 猪 屠 宰 场 （ 点 ） 非 洲 猪 瘟 快 速 检 测 技

3、术 规 程1 范 围本 文 件 规 定 了 生 猪 屠 宰 场 (点 ） 非 洲 猪 瘟 快 速 检 测 活 动 的 检 测 室 建 设 、 采 样 、 检 测 、 生 物 安 全 和 档案 管 理 等 。本 文 件 适 用 于 生 猪 屠 宰 场 (点 ） 非 洲 猪 瘟 快 速 检 测 ， 其 它 环 节 非 洲 猪 瘟 快 速 检 测 也 可 参 照 执 行 。2 规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 中 的 内 容 通 过 文 中 的 规 范 性 引 用 而 构 成 本 文 件 必 不 可 少 的 条 款 。 其 中 ， 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 仅 该 日 期 对 应

4、的 版 本 适 用 于 本 文 件 。 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 最 新 版 本 （ 包 括 所 有 的 修 改 单 ） 适 用 于 本文 件 。 农 牧 发 2019 2号 生 猪 屠 宰 检 疫 规 程3 术 语 和 定 义下 列 术 语 和 定 义 适 用 于 本 文 件 。3.1 非 洲 猪 瘟 快 速 检 测指 利 用 实 时 荧 光 PCR 的 方 法 ， 核 酸 提 取 、 扩 增 检 测 均 在 同 一 封 闭 、 便 携 式 仪 器 上 完 成 ， 样 本 上 机后 至 结 果 报 告 过 程 ， 无 需 任 何 手 工 操 作 ， 通 过 实 时 监 测

5、PCR 扩 增 产 物 的 累 计 过 程 中 荧 光 信 号 的 变 化 ，在 90 min 内 完 成 对 非 洲 猪 瘟 病 毒 特 异 性 核 酸 片 段 的 快 速 检 测 。 4 检 测 室 建 设4.1 基 本 要 求4.1.1 检 测 室 应 设 在 相 对 独 立 的 区 域 ， 与 其 它 不 相 容 的 区 域 进 行 有 效 隔 离 ， 防 止 交 叉 污 染 。4.1.2 检 测 室 应 分 为 试 剂 贮 存 和 配 制 、 样 品 制 备 和 扩 增 2 个 独 立 工 作 区 域 ， 有 明 晰 的 标 识 ， 检 测 操 作和 人 流 物 流 按 照 单 一

6、方 向 流 动 。4.1.3 应 配 备 给 水 、 排 水 、 电 力 、 通 风 、 消 毒 及 无 害 化 处 理 设 施 。4.1.4 地 面 平 整 防 滑 、 墙 面 、 顶 棚 平 整 ， 易 清 洁 消 毒 。4.1.5 工 作 台 表 面 应 耐 热 、 耐 腐 蚀 ， 可 反 复 清 洗 消 毒 。4.2 仪 器 设 备 配 置4.2.1 试 剂 贮 存 和 配 制 区 配 备 超 净 工 作 台 （ 通 风 橱 ） 、 冰 箱 、 微 量 移 液 器 （ 10 L、 100 L） 。4.2.2 样 品 制 备 和 扩 增 区 DB1302/T 522 2020 2 配 备

7、 荧 光 定 量 PCR 仪 、 二 级 生 物 安 全 柜 （ 可 选 ） 、 高 速 离 心 机 （ 可 选 ） 、 核 酸 提 取 仪 （ 可 选 ） 、组 织 破 碎 仪 、 微 量 移 液 器 （ 10 L、 100 L、 1000 L） 。4.3 检 测 人 员检 测 人 员 应 取 得 健 康 合 格 证 明 并 在 省 定 点 屠 宰 管 理 办 公 室 登 记 备 案 。5 采 样5.1 采 样 人 员采 样 由 经 过 专 业 技 术 机 构 培 训 、 掌 握 采 样 技 术 的 生 猪 屠 宰 场 （ 点 ） 人 员 实 施 。5.2 器 具 及 试 剂 放 血 刀 具

8、 （ 可 选 ） 、 离 心 管 （ 5 mL） 、 一 次 性 混 合 血 样 容 器 、 一 次 性 手 套 、 一 次 性 注 射 器 （ 10 mL） 、搅 拌 棒 、 编 号 笔 、 消 毒 液 容 器 、 抗 凝 剂 （ 柠 檬 酸 钠 :水 =1:10） 、 消 毒 剂 等 。5.3 抽 样5.3.1 屠 宰 生 猪 以 运 输 车 辆 为 批 次 全 部 采 集 血 液 样 品 ， 每 头 生 猪 采 集 血 液 2 mL。5.3.2 生 猪 血 样 采 集 在 生 猪 入 场 前 、 待 宰 圈 、 放 血 后 进 行 ， 采 样 部 位 为 生 猪 耳 缘 静 脉 或 前

9、腔 静 脉 。5.3.3 采 样 人 员 戴 一 次 性 手 套 ， 使 用 容 量 为 5 mL 的 离 心 管 接 取 血 液 ， 倒 入 混 合 血 样 容 器 内 。5.4 混 样5.4.1 生 猪 的 血 样 混 合 同 批 不 高 于 50 头 。5.4.2 混 合 血 样 添 加 10 mL 抗 凝 剂 ， 残 猪 、 急 宰 猪 按 每 头 0.5 mL 添 加 抗 凝 剂 ， 用 搅 拌 棒 搅 拌 均 匀 ，使 用 一 次 性 注 射 器 从 混 合 均 匀 的 血 液 中 抽 取 5 mL 血 液 送 检 。 5.5 编 号 、 记 录 、 送 样5.5.1 对 每 个

10、混 合 血 样 进 行 编 号 ， 同 日 内 所 有 混 合 血 样 编 号 不 得 重 复 。 用 于 检 测 的 样 品 、 备 份 留 存 的样 品 应 统 一 用 防 水 记 号 笔 对 应 编 号 ， 清 晰 标 记 于 采 样 容 器 上 ， 其 编 号 应 与 生 猪 的 检 疫 证 明 号 码 相 对 应 。5.5.2 血 液 样 品 抽 取 后 做 好 采 样 记 录 ， 采 样 记 录 内 容 包 括 采 样 日 期 、 采 样 地 点 、 采 样 头 数 、 对 应 检 疫证 号 码 、 样 品 类 型 、 样 品 编 号 、 采 样 人 员 等 。 采 样 记 录 样

11、 式 见 附 录 A。5.5.3 混 合 后 的 血 样 应 立 即 送 检 测 室 进 行 检 测 ， 特 殊 情 况 下 混 合 血 样 现 场 放 置 时 间 不 超 过 30 min。5.6 样 品 留 存检 测 样 品 应 留 存 备 份 ， -20 保 存 1 个 月 以 上 。6 检 测 6.1 检 测 方 法采 用 农 业 农 村 部 批 准 的 商 品 化 试 剂 盒 检 测 ， 检 测 操 作 步 骤 按 照 试 剂 盒 及 PCR 仪 操 作 说 明 书 进 行 。6.2 结 果 分 析依 据 试 剂 盒 操 作 说 明 书 ， 通 过 Ct 值 判 定 ： 阳 性 /阴

12、 性 。 DB1302/T 522 2020 3 6.3 结 果 处 置检 测 结 束 后 ， 如 实 填 写 检 测 报 告 ， 检 测 报 告 样 式 见 附 录 B。 结 果 处 置 按 生 猪 屠 宰 检 疫 规 程 中7.1和 农 业 农 村 部 实 时 发 布 的 非 洲 猪 瘟 疫 情 防 控 相 关 文 件 执 行 。7 生 物 安 全7.1 采 样 工 具 用 流 动 的 清 水 冲 洗 干 净 ， 并 用 消 毒 剂 消 毒 ， 取 完 一 个 批 次 的 样 品 后 进 行 更 换 、 消 毒 ； 一次 性 手 套 、 离 心 管 、 混 合 血 样 容 器 在 取 完

13、一 个 批 次 的 样 品 后 更 换 ， 采 样 产 生 的 废 弃 物 放 入 密 封 、 无 渗 漏的 容 器 内 ， 应 进 行 无 害 化 处 理 。 GB 19489 给 出 了 无 害 化 处 理 的 方 法 。7.2 检 测 室 内 保 持 整 洁 干 净 ， 严 禁 摆 放 与 检 测 无 关 的 物 品 ， 不 得 在 检 测 室 内 进 行 与 检 测 无 关 的 活 动 。7.3 检 测 操 作 前 开 启 紫 外 灯 至 少 照 射 30 min， 对 室 内 空 间 、 工 作 台 面 、 地 面 及 设 备 仪 器 等 表 面 进 行 消毒 。 7.4 检 测 人

14、 员 进 入 检 测 区 域 应 做 好 人 员 防 护 。7.5 检 测 产 生 的 废 弃 物 、 剩 余 样 品 及 使 用 过 的 移 液 枪 头 、 一 次 性 手 套 、 口 罩 、 帽 子 等 应 进 行 无 害 化 处理 。 GB 19489 给 出 了 无 害 化 处 理 的 方 法 。7.6 需 样 品 制 备 及 核 酸 提 取 的 ， 应 在 二 级 生 物 安 全 柜 中 进 行 。7.7 检 测 结 束 后 应 采 取 紫 外 照 射 或 消 毒 液 喷 洒 等 措 施 对 环 境 进 行 消 毒 。7.8 扩 增 后 装 有 反 应 产 物 的 PCR 反 应 管

15、 禁 止 开 盖 ， 立 即 消 毒 ， 检 测 结 束 与 其 它 高 压 灭 菌 后 的 废 弃 物 送出 检 测 室 。7.9 检 测 室 发 现 污 染 应 停 止 检 测 活 动 。8 档 案 管 理8.1 应 建 立 人 员 培 训 、 采 样 检 测 记 录 、 检 测 报 告 等 相 关 档 案 。8.2 档 案 保 存 不 少 于 12个 月 。 DB1302/T 522 2020 4 附 录 A(资 料 性 ）生 猪 屠 宰 场 （ 点 ） 非 洲 猪 瘟 检 测 采 样 记 录 表表 A.1 给 出 了 生 猪 屠 宰 场 （ 点 ） 非 洲 猪 瘟 检 测 采 样 记

16、录 表 的 样 式表 A.1 生 猪 屠 宰 场 （ 点 ） 非 洲 猪 瘟 检 测 采 样 记 录 表编 号 ： （ 年 月 日 +3位 数 顺 序 号 ）序号 日 期 采 样地 点 采 样头 数 对 应 检 疫 证 号 码 样 品类 型 样 品 编 号 采 样 人 （ 签 字 ） 备 注 注 ： 1、 采 样 地 点 填 写 入 场 前 、 待 宰 圈 或 屠 宰 线 ；2、 采 样 头 数 为 1头 或 多 头 ， 相 应 的 样 品 编 号 为 1个 号 码 或 号 段 ；3、 样 品 类 型 为 血 样 、 脾 、 淋 巴 结 或 肾 等 。 DB1302/T 522 2020 5

17、附 录 B(资 料 性 ）生 猪 屠 宰 宰 场 （ 点 ） 非 洲 猪 瘟 自 检 报 告表 B.1 给 出 了 生 猪 屠 宰 场 （ 点 ） 非 洲 猪 瘟 自 检 报 告 的 样 式表 B.1 生 猪 屠 宰 场 （ 点 ） 非 洲 猪 瘟 自 检 报 告编 号 ： （ 年 月 日 +3位 数 顺 序 号 ）采 样 表 编 号 检 测 生 猪 数样 品 编 号 对 应 检 疫 证 号 码试 剂 名 称 生 产 厂 家 有 效 期 至混 样 记 录检 测 方 法 检 测 结 果 （ 详 细记 录 阴 阳 性 情 况及 对 应 检 疫 证 号码 ） 屠 宰 场 检 测 人 （ 签 名 ） ： 日 期 ： 年 月 日屠 宰 场 负 责 人 （ 签 名 并 盖 章 ） ：官 方 兽 医 确 认 （ 签 名 ） ： 日 期 ： 年 月 日 DB1302/T 522 2020 6 参 考 文 献1 GB 19489 实 验 室 生 物 安 全 通 用 要 求2 NY/T 763-2004 猪 肉 、 猪 肝 、 猪 尿 抽 样 方 法