DB45 T 2205-2020 甘蔗及其制品中葡聚糖的测定方法 免疫比浊法.pdf

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1、ICS 67.180CCS X 30 DB45广 西 壮 族 自 治 区 地 方 标 准DB 45/T 2205 2020甘 蔗 及 其 制 品 中 葡 聚 糖 的 测 定 方 法 免 疫比 浊 法 Test method for dextran in sugarcane and its products-Immune Turbidimetrymethod 2020-11-13发 布 2020-12-20实 施广 西 壮 族 自 治 区 市 场 监 督 管 理 局 发 布 DB45/T 22052020 I 前 言本 文 件 按 照 GB/T 1.1 2020 标 准 化 工 作 导 则 第

2、1 部 分 ： 标 准 化 文 件 的 结 构 和 起 草 规 则 的 规定 起 草 。本 文 件 由 广 西 壮 族 自 治 区 糖 业 发 展 办 公 室 提 出 并 宣 贯 。本 文 件 由 广 西 糖 业 标 准 化 技 术 委 员 会 归 口 。本 文 件 起 草 单 位 ： 广 西 糖 业 集 团 有 限 公 司 、 广 东 省 生 物 工 程 研 究 所 （ 广 州 甘 蔗 糖 业 研 究 所 ） 、 广 西壮 族 自 治 区 分 析 测 试 研 究 中 心 、 广 西 壮 族 自 治 区 产 品 质 量 检 验 研 究 院 、 广 西 糖 业 集 团 防 城 精 制 糖 有 限

3、 公司 。 本 文 件 主 要 起 草 人 ： 柳 颖 、 林 荣 珍 、 常 国 炜 、 马 步 、 邓 卫 利 、 杨 宇 格 、 刘 桂 云 、 缪 路 、 黎 志 德 、 张九 花 、 杨 华 、 林 金 梅 、 方 海 香 、 梁 达 奉 。 DB45/T 22052020 1 甘蔗及其制品中葡聚糖的测定方法 免疫比浊法1 范围 本文件规定了甘蔗及其制品中葡聚糖含量免疫比浊法的测定。本文件适用于广西境内甘蔗及其制品中葡聚糖含量为3.5mg/L600 mg/L的测定。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应

4、的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 9289 制糖工业术语3 术语和定义 GB/T 9289界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1 葡聚糖 dextran又称右旋糖酐，是蔗糖经明串珠菌( Leuconostocmesenteroides)转化形成的，一种完全由-D-吡喃葡萄糖单体构成的多糖，分子式C 6H10O5n，分子量通常为数万至数百万。4 原理 利用葡聚糖与葡聚糖单克隆抗体特异性反应，形成葡聚糖-葡聚糖单克隆抗体复合物析出，使反应体系浊度增加，浊度增量和葡聚糖含量成正比，通过

5、增量浊度与标准系列来比较定量。5 试剂5.1 除非另有说明，本标准所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。5.2 盐酸（HCl）溶液（1+99）：量取 1mL 盐酸，加入 99mL 水，混匀。5.3 缓冲溶液：称取 0.800g 氯化钠（NaCl）、0.020g 氯化钾（KCl）、0.363g十二水合磷酸氢二钠（Na 2HPO412H2O）和 0.024g磷酸二氢钾（KH 2PO4），溶于 90mL水中，以盐酸溶液（1+99）调 pH至 7.2，移入 100mL 容量瓶，定容。5.4 蔗糖储备液（250g/L）：称取 25.0g 蔗糖（C 12H22O11，优级纯，且葡聚糖

6、含量低于 5 mg/kg），用水溶解，移入 100mL 容量瓶，定容。5.5 葡聚糖标准品: CAS号：9004-54-0，纯度99。 DB45/T 22052020 2 5.6 葡 聚 糖 标 准 储 备 液 （ 1mg/mL） ： 称 取 葡 聚 糖 标 准 品 2g（ 准 确 至 0.1mg） 于 已 恒 重 的 称 量 瓶 内 ，放 于 干 燥 箱 内 在 105 下 干 燥 3h， 取 出 ， 放 在 干 燥 器 内 ， 冷 却 至 室 温 ， 称 量 （ 准 确 至 0.1 mg） ， 计 算葡 聚 糖 标 准 品 中 的 水 分 含 量 。 根 据 葡 聚 糖 标 准 品 的 水

7、 分 含 量 ， 迅 速 称 取 未 经 干 燥 的 葡 聚 糖 ， 使 其 含 无 水葡 聚 糖 约 0.1000 g， 加 入 2.0mL水 溶 解 成 糊 状 ， 放 置 约 10min， 不 时 搅 拌 ， 使 粒 子 均 匀 水 化 ， 当 有 凝胶 物 存 在 时 ， 多 次 加 入 少 量 水 至 约 25mL将 凝 胶 状 物 溶 解 ， 移 入 100mL容 量 瓶 ， 定 容 。 此 溶 液 现 配 现 用 。5.7 葡 聚 糖 标 准 系 列 溶 液 ： 分 别 吸 取 葡 聚 糖 标 准 储 备 液 （ 1mg/mL） 0 mL、 0.2mL、 0.4mL、 0.6mL

8、、0.8mL、 1.0 mL于 10 mL容 量 瓶 ， 再 分 别 吸 取 蔗 糖 储 备 液 （ 250g/L） 6 mL于 上 述 6个 10mL 容 量 瓶 中 ，定 容 。 此 葡 聚 糖 标 准 系 列 溶 液 的 质 量 浓 度 分 别 为 0mg/L、 20mg/L、 40mg/L、 60mg/L、 80mg/L和 100mg/L。可 根 据 样 品 中 葡 聚 糖 的 实 际 含 量 配 制 相 应 质 量 浓 度 的 葡 聚 糖 标 准 系 列 溶 液 ， 质 量 浓 度 不 超 过 600 mg/L。5.8 葡 聚 糖 单 克 隆 抗 体 溶 液 ： 称 取 0.060

9、g 葡 聚 糖 单 克 隆 抗 体 （ 鼠 抗 葡 聚 糖 IgM， 效 价 大 于 10 6） ， 溶于 15mL 缓 冲 溶 液 中 ， 静 置 30min， 移 入 带 盖 棕 色 小 瓶 ， 盖 好 ， 备 用 。 该 溶 液 应 现 配 现 用 ， 在 4 下 贮存 期 为 7d。6 仪 器 和 设 备6.1 浊 度 仪 ： 配 1 cm四 面 透 光 测 试 皿 ； 入 射 光 波 长 ： (860 30) nm（ LED 光 源 ） 或 400nm 600nm（ 钨 灯 ） ， 检 测 器 处 在 与 入 射 光 垂 直 的 位 置 上 。6.2 分 析 天 平 ： 感 量 为

10、0.1mg。6.3 干 燥 箱 ： 控 温 范 围 室 温 为 +5 至 250 ， 温 度 分 辨 率 为 0.1 。6.4 移 液 器 ： 量 程 为 20 L。6.5 滤 膜 ： 水 系 ， 厚 薄 均 匀 ， 膜 面 上 分 布 着 对 称 、 均 匀 、 穿 透 性 强 的 微 孔 ， 孔 径 为 0.22 m。 6.6 秒 表 ： 精 度 为 1 s。7 测 定 步 骤7.1 试 样 制 备初 压 汁 、 混 合 汁 、 中 和 汁 、 清 汁 等 锤 度 小 于 25 Bx的 液 态 样 品 ， 用 滤 网 或 滤 布 过 滤 ， 再 以 水 系 滤 膜过 滤 备 用 ； 糖 浆

11、 、 糖 膏 、 糖 糊 等 锤 度 大 于 或 等 于 25 Bx的 液 态 样 品 和 固 态 样 品 ， 称 取 15.0 g 20.0g样品 （ m） ， 用 水 稀 释 或 溶 解 ， 移 入 100mL容 量 瓶 ， 定 容 ， 以 水 系 滤 膜 过 滤 备 用 。7.2 测 定 方 法7.2.1 标 准 曲 线 制 作用 2mL 吸 量 管 吸 取 1.5mL 葡 聚 糖 单 抗 溶 液 置 于 测 试 皿 ， 放 入 浊 度 仪 ， 盖 上 浊 度 仪 盖 子 ， 放 置 1min 后 立 即 测 定 浊 度 值 （ N 标 0） ； 取 出 测 试 皿 ， 用 移 液 器

12、将 15 L 葡 聚 糖 标 准 系 列 溶 液 加 入 葡 聚 糖 单 抗 溶 液中 ， 开 启 秒 表 计 时 ， 盖 上 测 试 皿 盖 子 ， 上 下 颠 倒 6 次 混 匀 ， 混 匀 过 程 中 应 避 免 产 生 气 泡 ， 取 下 测 试 皿 盖子 ， 将 测 试 皿 放 入 浊 度 仪 ， 盖 上 浊 度 仪 盖 子 ， 放 置 1min 后 立 即 测 定 浊 度 值 （ N 标 ） ， 应 在 2min内 测 定完 毕 ， 按 8.1.1计 算 反 应 溶 液 体 系 浊 度 增 量 （ NTU 标 ） 。 以 葡 聚 糖 浓 度 为 横 坐 标 ， 浊 度 增 量 为

13、纵 坐 标 ，绘 制 标 准 曲 线 。7.2.2 试 样 中 葡 聚 糖 浓 度 测 定吸 取 1.5mL葡 聚 糖 单 抗 溶 液 置 于 测 试 皿 ， 放 入 浊 度 仪 ， 盖 上 浊 度 仪 盖 子 ， 放 置 1min后 立 即 测 定 浊 度值 （ N 样 0） ； 取 出 测 试 皿 ， 用 移 液 器 将 15 L试 样 溶 液 加 入 葡 聚 糖 单 抗 溶 液 中 ， 开 启 秒 表 计 时 。 盖 上 测 试 DB45/T 22052020 3 皿盖子，上下颠倒6次混匀，混匀过程中应避免产生气泡。取下测试皿盖子，将测试皿放入浊度仪，盖上浊度仪盖子，放置1min后立即测

14、定浊度值（ N样 ），应在2min内测定完毕，按8.1.2计算反应体系浊度增量（ NTU 样 ），与标准系列比较定量，得到试样中葡聚糖浓度（c）。8 计算及结果表示8.1 浊度增量8.1.1 标准品测定反应溶液体系的浊度增量按式（1）计算： 标 标 标 .（1）式中：标 测定标准品时反应溶液体系的浊度增量，单位为散射浊度单位（NTU）；标 测定标准品时反应后体系浊度，单位为散射浊度单位（NTU）；标 测定标准品时反应前体系浊度，单位为散射浊度单位（NTU）。计算结果表示到小数点后一位。8.1.2 试样测定反应溶液体系的浊度增量按式（2）计算： 样 样 样 .（2）式中：样 测定样品时反应溶液体

15、系的浊度增量，单位为散射浊度单位（NTU）；样 测定样品时反应后体系浊度，单位为散射浊度单位（NTU）；样 测定样品时反应前体系浊度，单位为散射浊度单位（NTU）。计算结果表示到小数点后一位。8.2 样品中葡聚糖含量低锤度液态样品：将浊度增量代入标准曲线，得到样品中葡聚糖含量，单位为毫克每升（mg/L），计算结果取整数。 高锤度液态样品及固态样品按式（3）计算： .（3）式中：样品中葡聚糖含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；由标准曲线计算得到的葡聚糖浓度，单位为毫克每升（mg/L）；样品称样量，单位为克（g）；100样品定容体积，单位为毫升（mL）。计算结果取整数。 DB45/T 22052

16、020 4 9 精 密 度在 重 复 性 条 件 下 获 得 的 两 次 独 立 测 定 结 果 的 绝 对 差 值 不 大 于 算 数 平 均 值 的 15 。10 其 他对 初 压 汁 、 混 合 汁 、 中 和 汁 、 清 汁 等 锤 度 小 于 25 Bx的 液 态 样 品 ， 本 方 法 检 出 限 为 3.5mg/L, 定 量限 为 15 mg/L； 对 糖 浆 、 糖 膏 、 糖 糊 等 锤 度 大 于 等 于 25 Bx的 液 态 样 品 和 固 态 样 品 ， 以 取 样 量 15.0g计 ，本 方 法 检 出 限 为 23.3mg/kg， 定 量 限 为 100mg/kg。_ 中华人民共和国 广西地方 标准 甘蔗及其制品中葡聚糖的测定方法 免疫 比浊法 DB45/T 220520 20 广西 壮族自治区市场监督管理局 统一印制 版权专有 侵权必究