GH T 1280-2019 蜂胶中咖啡酸、p-香豆酸、阿魏酸、短叶松素、松属素、短叶松素3-乙酸酯、白杨素和高良姜素含量的测定反相高效液相色谱法.pdf

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1、ICS 65.140B 47中 华 人 民 共 和 国 供 销 合 作 行 业 标 准GH/T 1280 2019蜂 胶 中 咖 啡 酸 、 p-香 豆 酸 、 阿 魏 酸 、 短 叶 松素 、 松 属 素 、 短 叶 松 素 3-乙 酸 酯 、 白 杨 素和 高 良 姜 素 含 量 的 测 定反 相 高 效 液 相 色 谱 法 Determination of cafferic acid, p-coumaric acid, ferulic acid,pinobanksin,pinocembrin, 3-O-acetylpinobanksin, chrysin and galangin inp

2、ropolis-Reversed-phase high performance liquid chromatography method2019-11- 28发 布 2020- 03-01实 施 中 华 全 国 供 销 合 作 总 社 发 布 G H GH/T 1280-2019 1 前 言本 标 准 按 照 GB/T 1.12009 标 准 化 工 作 导 则 第 1 部 分 ： 标 准 的 结 构 和 编 写 的 编 写 规 则 。本 标 准 由 中 华 全 国 供 销 合 作 总 社 提 出 。本 标 准 由 全 国 蜂 产 品 标 准 化 工 作 组 归 口 。本 标 准 起 草 单

3、位 ： 浙 江 大 学 、 杭 州 蜂 之 语 蜂 业 股 份 有 限 公 司 、 杭 州 天 厨 蜜 源 保 健 品 有 限 公 司 、 缙 云 县绿 纯 养 蜂 专 业 合 作 社 。本 标 准 主 要 起 草 人 ： 胡 福 良 、 张 翠 平 、 周 萍 、 王 磊 、 胡 元 强 。 GH/T 1280-2019 2 蜂 胶 中 咖 啡 酸 、 p-香 豆 酸 、 阿 魏 酸 、 短 叶 松 素 、 松 属 素 、短 叶 松 素 3-乙 酸 酯 、 白 杨 素 和 高 良 姜 素 含 量 的 测 定反 相 高 效 液 相 色 谱 法1 范 围本 标 准 规 定 了 蜂 胶 中 咖 啡

4、 酸 、 p-香 豆 酸 、 阿 魏 酸 、 短 叶 松 素 、 松 属 素 、 短 叶 松 素 3-乙 酸 酯 、 白 杨 素和 高 良 姜 素 的 反 相 高 效 液 相 色 谱 检 测 方 法 。 本 标 准 适 用 于 蜂 胶 及 蜂 胶 乙 醇 提 取 物 中 咖 啡 酸 、 p-香 豆 酸 、 阿 魏 酸 、 短 叶 松 素 、 松 属 素 、 短 叶 松 素3-乙 酸 酯 、 白 杨 素 和 高 良 姜 素 的 测 定 。本 标 准 液 相 色 谱 的 检 出 限 ： 咖 啡 酸 、 p-香 豆 酸 、 阿 魏 酸 、 短 叶 松 素 、 松 属 素 、 短 叶 松 素 3-乙

5、酸 酯 、白 杨 素 和 高 良 姜 素 分 别 为 0.41、 0.39、 1.20、 0.29、 1.11、 1.49、 0.86、 0.91 g/mL。本 标 准 液 相 色 谱 的 定 量 限 ： 咖 啡 酸 、 p-香 豆 酸 、 阿 魏 酸 、 短 叶 松 素 、 松 属 素 、 短 叶 松 素 3-乙 酸 酯 、白 杨 素 和 高 良 姜 素 分 别 为 1.35、 2.16、 4.00、 0.98、 3.69、 4.97、 2.88、 3.03 g/mL。2 规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 对 于 本 文 件 的 应 用 是 必 不 可 少 的 。 凡 是 注 日 期

6、 的 引 用 文 件 ， 仅 所 注 日 期 的 版 本 适 用 于 本 文 件 。 凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 最 新 版 本 （ 包 括 所 有 的 修 改 单 ） 适 用 于 本 文 件 。GB/T 6682 分 析 实 验 室 用 水 规 格 和 试 验 方 法3 术 语 和 定 义下 列 术 语 和 定 义 适 用 于 本 标 准 。3.1 蜂 胶 propolis工 蜂 采 集 树 脂 等 植 物 分 泌 物 与 其 上 颚 腺 、 蜡 腺 分 泌 物 等 混 合 形 成 的 胶 粘 性 物 质 。 4 原 理 GH/T 1280-2019 3 试 样 经

7、乙 醇 提 取 ， 浓 缩 ， 再 溶 解 于 甲 醇 ， 用 反 相 高 效 液 相 色 谱 仪 紫 外 检 测 器 在 280 nm 处 检 测 ， 外标 法 定 量 。5 试 剂 与 材 料实 验 室 用 水 应 符 合 GB/T6682 规 定 的 一 级 水 。除 非 另 有 规 定 ， 所 有 试 剂 均 为 分 析 纯 。5.1 甲 醇 ： 色 谱 纯 。5.2 乙 醇 。5.3 乙 酸 ， 色 谱 纯 。5.4 流 动 相 ： 甲 醇 （ 5.1） 和 1%乙 酸 （ 5.3） 梯 度 洗 脱 。 5.5 咖 啡 酸 、 p-香 豆 酸 、 阿 魏 酸 、 短 叶 松 素 、

8、松 属 素 、 短 叶 松 素 3-乙 酸 酯 、 白 杨 素 和 高 良 姜 素 标 准 品 ：纯 度 98%5.6 咖 啡 酸 、 p-香 豆 酸 、 阿 魏 酸 、 短 叶 松 素 、 松 属 素 、 短 叶 松 素 3-乙 酸 酯 、 白 杨 素 和 高 良 姜 素 标 准 储 备液 ： 准 确 称 取 适 量 的 每 种 标 准 物 质 （ 5.5） ， 用 甲 醇 溶 液 （ 5.1） 配 成 1.0 mg/mL 的 标 准 储 备 溶 液 ，于 4 冰 箱 保 存 ， 可 保 存 6 个 月 。5.7 咖 啡 酸 、 p-香 豆 酸 、 阿 魏 酸 、 短 叶 松 素 、 松 属

9、 素 、 短 叶 松 素 3-乙 酸 酯 、 白 杨 素 和 高 良 姜 素 标 准 工 作液 ： 吸 取 适 量 1.0 mg/mL 的 标 准 贮 备 液 （ 5.6） ， 用 甲 醇 溶 液 （ 5.1） 分 别 稀 释 成 适 当 浓 度 的 标 准 工作 溶 液 ， 现 用 现 配 。5.8 滤 膜 ： 0.45 m， 有 机 系 。 6 仪 器 和 设 备6.1 高 效 液 相 色 谱 仪 ： 配 有 紫 外 检 测 器 。6.2 粉 碎 机 。6.3 旋 转 蒸 发 仪 。6.4 超 声 波 清 洗 器 。7 试 样 准 备 与 保 存7.1 试 样 的 准 备 取 代 表 性

10、试 样 适 量 ， 冷 冻 ， 粉 碎 ， 混 匀 ， 作 为 备 检 试 样 。7.2 试 样 保 存将 试 样 于 0 4 保 存 。 GH/T 1280-2019 4 8 操 作 步 骤8.1 蜂 胶 样 品 预 处 理准 确 称 取 10.0 g（ 精 确 到 0.1 g） 蜂 胶 试 样 ， 用 30 mL 95%乙 醇 超 声 提 取 ， 每 次 用 时 15 min， 共 提 取3 次 ， 合 并 滤 液 ， 定 容 至 100 mL（ V1） 。 取 10 mL（ V2） 减 压 蒸 干 ， 用 25 mL（ V3） 甲 醇 超 声 溶 解 并 定 容 ，0.45 m 滤 膜

11、过 滤 ， 供 测 定 。8.2 色 谱 条 件色 谱 柱 ： Sepax HP-C18， 柱 长 150 mm， 内 径 4.6 mm， 粒 度 5 m； 或 性 能 相 当 的 色 谱 柱 。流 动 相 流 速 ： 1.0 mL/min。 梯 度 洗 脱 ： 洗 脱 程 序 参 见 附 录 A 表 A.1。检 测 波 长 ： 280 nm。柱 温 ： 33 。进 样 量 ： 5 L。8.3 测 定取 5 L样 品 溶 液 （ 8.1） 、 标 准 工 作 溶 液 （ 5.7） 分 别 进 样 分 析 ， 绘 制 标 准 曲 线 ， 外 标 法 定 量 。色 谱 图 参 见 附 录 A 图

12、A.1。9 结 果 计 算 与 表 示9.1 结 果 计 算 试 样 中 咖 啡 酸 、 p-香 豆 酸 、 阿 魏 酸 、 短 叶 松 素 、 松 属 素 、 短 叶 松 素 3-乙 酸 酯 、 白 杨 素 和 高 良 姜 素 含量 （ X） 以 毫 克 每 克 （ mg/g） 表 示 ， 按 式 （ 1） 计 算 ：CV 3V 2mV 1 (1)式 中 ：CS 标 准 工 作 曲 线 上 计 算 得 到 的 样 液 中 化 合 物 的 浓 度 ， 单 位 为 毫 克 每 毫 升 （ mg/mL） ；V 1 试 样 溶 液 定 容 体 积 ， 单 位 为 毫 升 （ mL） ；V2 从 试

13、样 溶 液 中 取 出 的 待 测 体 积 （ mL） ；V3 待 测 试 样 最 终 定 容 体 积 ， 单 位 为 毫 升 （ mL） ；m 样 品 质 量 ， 单 位 为 克 （ g） 。9.2 结 果 表 示将 符 合 重 复 性 要 求 的 两 个 独 立 测 定 值 的 算 术 平 均 值 作 为 测 定 结 果 （ mg/g） ， 保 留 两 位 有 效 数 字 。 平 行试 验 相 对 偏 差 不 得 超 过 2.0%。X GH/T 1280-2019 5 附 录 A（ 资 料 性 附 录 ）高 效 液 相 色 谱 法 梯 度 洗 脱 程 序 和 色 谱 图表 A.1 高 效

14、液 相 色 谱 法 梯 度 洗 脱 程 序时 间min 流 速mL/min 甲 醇% 1%乙 酸%0 1 15 8530 1 40 6065 1 55 4570 1 62 38 80 1 100 090 1 15 85 GH/T 1280-2019 6 图 A.1 咖 啡 酸 、 p-香 豆 酸 、 阿 魏 酸 、 短 叶 松 素 、 松 属 素 、 短 叶 松 素 3-乙 酸 酯 、 白 杨 素 和 高 良 姜 素 混 合 标 准品 和 蜂 胶 的 色 谱 图 图 A.1混 合 标 准 品 和 蜂 胶 的 的 HPLC图 谱A： 混 合 标 准 品 ； B： 蜂 胶1. 咖 啡 酸 、 2. p-香 豆 酸 、 3. 阿 魏 酸 、 4. 短 叶 松 素 、 5. 松 属 素 、 6. 短 叶 松 素 3-乙 酸 酯 、 7. 白 杨 素 、 8. 高 良 姜 素 AB