DB41 T 1930-2019 泡桐组织培养快繁技术规程.pdf

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1、ICS 65.020.01 B 05 DB41 河 南 省 地 方 标 准 DB41/T 1930 2019 泡桐组织培养快繁技术规程 2019 - 11 - 21发布 2020 - 02 - 21实施 河南省市场监督管理局 发布 DB41/T 1930 2019 I 目 次 前 言 . II 1 范围 . 1 2 术语和定义 . 1 3 外植体的无菌化培养 . 1 4 芽诱导 . 2 5 增殖培养 . 2 6 生根培养 . 2 7 炼苗与移栽 . 2 DB41/T 1930 2019 II 前 言 本标准 按照 GB/T 1.1 2009给出的规则起草。 本标准由河南省林 业局提出并归口。

2、本标准起草单位：河南农业大学、河南省林业科学研究院。 本 标准主要起草人：范国强、翟晓巧、赵振利、 陈卓、 刘荣宁、李永生、曹喜兵、林海 、刘辉 。 DB41/T 1930 2019 1 泡桐组织培养快繁技术规程 1 范围 本标准规定了泡桐 组织培养快繁 的术语和定义、 外植体的无菌化培养 、 芽诱导、增殖培养、生根培 养、炼苗移栽、 档案管理。 本标准适用于泡桐 组织培养快速繁殖 。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 泡桐组织培养 在无菌条件下，将泡桐的种子、叶片或茎段接种在装有人工配制培养基的培养瓶中。将培养瓶放置 于人工控制光照和温度的 组织培养室内，使之生长、分化或

3、发育成完整植株的培养技术。 2.2 外植体 从植物活体上切取下来用于建立组织培养体系的材料，包括完整植株、器官或组织。 2.3 植物生长调节物质 调节植物生长发育的物质。 2.4 芽诱导 将培养材料在诱导培养基中进行培养，分化出不定芽的过程。 2.5 增殖培养 把外植体培养获得的培养物转移到增殖培养基中，使培养物得以成倍增殖的过程。 2.6 生根培养 将芽转移到生根培养基中进行生根培养，形成完整植株的过程。 3 外植体的无菌化培养 3.1 枝条无菌化材料培养 取生长健康的泡桐当 年生带有腋芽或顶芽 的嫩枝 ， 用清水清 洗后，先用质量分数为 0.1% HgCl2消毒 8 min，再用无菌水清洗

4、 5次，然后接种于不附加植物生长调节物质的 MS基本培养基上。培养基中蔗糖浓 度 20 g/L，琼脂浓度 3.0 g/L 8.0 g/L。培养瓶放置于培养室中，培养温度 25 2 ，光照强度 130 moL/m2s，光照时间 16 h/d。 60 d可获得 3 4对叶片的无菌材料，其叶片和茎段用作芽诱导的材 料。 DB41/T 1930 2019 2 3.2 种子无菌化材料培养 采集生长健康的泡桐当年生种子，先用 70%酒精消毒 30 s，再放入 0.1%HgCl2溶液中进行浸泡消 毒 5 min，然后用无菌水冲洗 3 5次。最后将种子接种于不附加植物生长调节物质的 MS培养基上， 培养 基中

5、蔗糖浓度 20 g/L，琼脂浓度 5.0 g/L 。培养瓶放置于培养室中，培养温度、光照强度和光照时间 同 3.1。 50 d后可获得 3 4对叶片的无菌材料，其叶片和茎段用作芽诱导的材料。 4 芽诱导 4.1 叶片外植体芽的诱导 将获得的无菌叶片沿主脉切成约 1.0 cm 2.0 cm的外植体，接种于附加不同浓度 6-BA（ 8 mg/L 18 mg/L ） 和 NAA（ 0.1 mg/L 0.5 mg/L）的 MS培养基 上，培养基中蔗糖浓度 20 g/L，琼脂浓度 5.0 g/L 。 培养瓶放置于培养室中，培养温度、光照强度和光照时间同 3.1。培养 35 d后，在叶缘处分化出芽。 4.

6、2 茎段外植体芽的诱导 将获得的无菌茎段切成长 1 cm左右的外植体，接种于附加不同浓度 6-BA（ 10 mg/L 18 mg/L） 和 NAA （ 0.2 mg/L 0.5 mg/L）的 MS基本培养基上， 培养基中蔗糖浓度 20 g/L，琼脂浓度 5.0 g/L。培养瓶放 置于培养室中，培养温度、光照强度和光照时间同 3.1。培养 30 d后分化出芽。 5 增殖培养 将诱导出的芽接 种于 附加不同浓度 6-BA（ 8 mg/L 12 mg/L） 和 NAA（ 0.1 mg/L 0.5 mg/L） 的 MS基 本培养基上， 培养基中蔗糖浓度 20 g/L，琼脂浓度 5.0 g/L。培养瓶放

7、置于培养室中，培养温度、光照 强度和光照时间同 3.1。 35 d后长出丛生芽。 6 生根培养 当诱导出的泡桐芽长到约 3 cm时，从茎基部切下，接种于附加不 同浓度 NAA（ 0.1 mg/L 0.5 mg/L） 的 1/2MS培养基上进行生根培养，培养基中蔗糖质量浓度为 20 g/L，琼脂 4.5 g/L。培养瓶放置于培养室 中，培养温度、光照强 度和光照时间同 4.1。 7 d后分化出根。 7 炼苗与移栽 当泡桐幼苗的根在生根培养基上长到约 3 cm时，逐步去掉组培瓶盖，在温室内锻炼 7 d，然后移入 盛有蛭石或草炭土（经 5%的高锰酸钾消毒处理或 121 高温灭菌 20 min）的营养钵中。用 1/2MS营养液 浇灌湿润，放到温室中培养，温室温度 25 28 ，开始 2周空气湿度 85%以上， 2周后湿度逐渐降低 与室外环境相同， 4 5周后，可以移栽到大田中。 8 档案管理 建立泡桐组织培养基本情况档案，包括以下内容：品种名称、材料来源、培养过程、培养照片等。 档案 由组培人员 填写，档案填 写 后， 及时整理归档 。 _