DB21 T 3116-2019 葡寡糖含量的检测 液相色谱法.pdf

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1、ICS 71.040.01 A 43 DB21 辽宁省 地 方 标 准 DB21/T 3116 2018 葡寡糖含量的检测 液相色谱法 Determination method for glucan oligosaccharides Liquid chromatography method 2019 - 02 - 28 发布 2019 - 03 - 28 实施 辽宁省市场监督管理局 发布 DB21/T 3116 2018 I 前 言 本标准是依据 GB/T 1.1 2009标准化工作导则第 1部分：标准的结构和编写给出的规则起草 的。 本标准由 大连市质量技术 监督局 提出。 本标准由 中国科

2、学院 沈阳分院 归口。 本标准起草单位：中国科学院大连化学物理研究所。 本标准主要起草人： 陈玮 、尹恒 。 DB21/T 3116 2018 1 葡寡糖含量的检测 -液相色谱法 1 范围 本标准规定了葡寡糖含量 检测的术语和定义、原理、仪器设备、操作步骤、结果表示和重复性。 本标准适用于 以 酵母细胞壁、真菌、褐藻、地衣 、 谷物 以及 其 热凝胶等 聚糖 为原料 ， 经加工制成的 的葡寡糖 产品 中 -1,3-葡寡糖 （聚合度 2-6） 含量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最

3、新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。 3 术语和 定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 葡寡糖 葡聚糖在酸水解或生物酶 水 解条件下 降解 为聚合度为 2 6的线性低聚糖。 3.2 葡寡糖 含量 葡寡糖 产品中 -1,3-葡寡糖 （聚合度 2-6） 的质量百分比。 4 原理 葡寡糖经过 色谱柱分离后可得到 多个 单一聚合 度的寡糖组分， 分离后的 葡寡 糖组分进入检测器进行 检测， 在一定浓度范围内， 检测信号的强度 与葡寡糖浓度呈线性关系。 通过外标法测定 并计算 得到葡寡 糖产品中不同 聚合度 葡寡糖组分的浓度和质量 。 不同

4、聚合度 葡寡糖的质量 总和与 其产品总质量比值 的百 分比结果 ，即为葡寡糖的 含量 。 5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱仪：配有 脉冲式安培检测器（ PAD, pulsed amperometric detector） 。 5.2 分析天平：感应量为 0.0001 g。 5.3 滤膜：聚四氟乙烯膜， 0.2 m。 DB21/T 3116 2018 2 6 试剂和材料 6.1 水： 符合 GB/T 6682规定的一级水 的 规定 ， 即电导率（ 25 ） /（ mS/m） 0.01； 6.2 氢氧化钠溶液 （ (NaOH) =50%） ：色谱 纯 。 6.3 三水乙酸钠 ：色谱 纯 。 6

5、.4 100 mmol/L 氢氧化钠 溶液： 量取 5.23 mL氢氧化钠溶液（ 6.2） ， 用 水 定容至 1000 mL。 6.5 800 mmol/L三水 乙酸钠 /100 mmol/L 氢氧化钠 溶液： 称 取 108.86 g 三水 乙酸 钠 ， 用水 （ 6.1）溶 解后 加入 5.23 mL氢氧化钠溶液（ 6.2） ，再 用 水 （ 6.1）定容至 1000 mL。 6.6 葡 寡糖标准品： 昆布二糖 ， 纯度 95 %， 昆布 三 糖 ， 纯度 95 %； 昆布 四 糖 ， 纯度 95 %； 昆布 五 糖 ， 纯度 90 %； 昆布 六 糖 ， 纯度 90 %； 结构式参见附

6、录 A。 7 测定步骤 7.1 标样 溶液 的 配置 7.1.1 标样 溶液 A： 分别 称取 10.00 mg经 105 干燥 至恒重 的 5种 葡寡糖标准品 (6.6)于 50 mL烧杯 中，加入 20 mL水（ 6.1），振荡使其充分溶解，转移至 100 mL 容量瓶中，用水（ 6.1）定容至刻度， 葡寡糖浓度为 100 g/mL。 7.1.2 标样 溶液 B： 吸取 10.00 mL 标准溶液 A转移至 100 mL 容量瓶中， 用水（ 6.1）定容至刻度，葡 寡糖浓度为 10 g/mL。 7.1.3 标样 溶液 C：吸取 10.00 mL 标准溶液 B转移至 100 mL 容量瓶中，

7、 用水（ 6.1）定容至刻度，葡 寡糖浓度为 1 g/mL。 7.2 样品 溶液 的 制备 当样品是颗粒状态时，应先将其在研钵中研细成粉末。 将粉末状样品在 105 干燥 至恒重 。称取 25.0 mg样品于 50 mL烧杯中， 加入 20 mL水 （ 6.1），振荡 使其充分溶解，转移至 100 mL容量瓶中，用 水 （ 6.1）定容至刻度 ，摇匀。用液相色谱仪测定前，样品 溶液用 0.2 m滤膜过滤。 7.3 检测 条件 需满足 如下色谱条件 ： a) 流动相 A： 100 mmol/L 氢氧化钠溶液 （ 6.4）； b) 流动相 B： 800 mmol/L三水乙酸钠 /100 mmol/

8、L 氢氧化钠溶液 （ 6.5）； c) 色谱柱： 离子交换色谱柱 ，粒径 5 m，柱长 250 mm，内径 4.6 mm； d) 柱温： 30 ； e) 流速： 1.0 mL/min； f) 进样体积： 10 L。 g) 洗脱方式：梯度洗脱 ： 0-1 min： 0% 流动相 B； 1-30 min： 0% -37.5% 流动相 B； 30-35 min: 37.5% -62.5% 流动相 B； 35-40 min: 62.5% -0% 流动相 B。 7.4 分析步骤 DB21/T 3116 2018 3 7.4.1 标准曲线绘制 在上述 操作条件 下， 待仪器基线稳定后， 将 标样溶液 A（

9、 7.1.1） 、 标样溶液 B（ 7.1.2） 、 标样溶液 C（ 7.1.3） 进样 10 L。 标准溶液的典型色谱图参见附录 B。 根据 已知标样含量与检测器 响应值建立 线性 方程： baXY . (1) 式中： ab 已知系数 ； X 溶液中葡寡糖的 浓度值（ g/mL）； Y 溶液中葡寡糖的色谱峰面积 。 7.4.2 样品 测定 在上述 操作条件下， 待仪器基线稳定后， 将 样品溶液（ 7.2） 连续 进样 3次 ， 进样体积 10 L， 得到 样 品中不同聚合度葡寡糖 峰面积 Yi。 8 结果的计算 8.1 葡寡糖的浓度 计算 将样品检测响应值 代入 公式 （ 1） ， 计算 得

10、到不同聚合度葡寡糖 浓度 Xi。 8.2 葡 寡糖的含量 计算 1001000100 m VsXiW i . (2) 式中： Xi 样品溶液中葡寡糖的 浓度值 （ g/mL） ； m 样品的质量，单位为毫克（ mg）； Vs 样品稀释 倍数 ； Wi 样品中葡寡糖的 含量 ， %； 9 重复性 在同一实验室由同一操作人员完成的三个平行测定结果，相对标准偏差不大于 5 %；以三次平行测 定 结果的算术平均值为测定结果。 DB21/T 3116 2018 4 A A 附 录 A （资料性附录） -1,3-葡寡糖的化学结构式 图 A.1 葡寡糖 的 化学 结构式 （ n=1,2,3,4） DB21/T 3116 2018 5 B B 附 录 B （资料性附录） 标准溶液的典型液相色谱图 图 B.1 标准溶液 的典型液相色谱图 （ 1-昆布二糖， 2-昆布三糖， 3-昆布 四 糖 ， 4-昆布 五 糖 ， 5-昆布 六 糖 ） _