DB51 T468-2005 猪肝中维吉尼亚霉素残留检测方法―高效液相色谱（HPLC）法.pdf

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1、ICS DB备案号：16719-2005 四川省地方标准DB51/T4682005 猪肝中维吉尼亚霉素残留检测方法 高效液相色谱（ HPLC）法 Determination of Virginimycin Residues in Pig Liver by High Performance Liquid Chromatography 2005-03-03 发布 2005-06-01 实施 四川省质量技术监督局 发 布 1DB51/T468-2005 前 言 维吉尼亚霉素是一种广谱型抗生素药物。为了规范我省无公害畜产品猪肉的生产和销售过程，保障人民的身体健康，维护生产者、经营者和消费者的合法权益，

2、在总结国内外相关标准的基础上，制定了用高效液相色谱法测定动物可食性组织中维吉尼亚霉素残留量的标准。 本标准按 GB/T1.12000 标准的结构和编写规则和 GB/T1.2-2002标准中规范性技术要求内容的确定方法进行编制。 本标准附录 A 是资料性附录。 本标准由四川省畜牧食品局提出并归口。 本标准由四川省质量技术监督局批准。 本标准由四川省兽药残留监控中心负责起草。 本标准起草人:杨松沛、彭莉、岳秀英、高岚、熊浩山。 2DB51/T468-2005 猪肝中维吉尼亚霉素残留检测方法 -高效液相色谱(HPLC) 法 1 范围 本标准规定了猪肝中维吉尼亚霉素残留量检测的制样和高效液相色谱（HP

3、LC ）测定方法。 本标准适用于鲜（冻）猪肝中维吉尼亚霉素的残留量检测。检出限为 50g/ kg。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，而随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 6682-1992 分析实验室用水规则和试验方法 3 制样 3.1 试样的制备 取适量新鲜或冷冻的供试猪肝组织，绞碎均浆。 3.2 试样的保存 -20冰箱贮存备用。 4 测定方法 4.1 方法提要或原理 动物肝组织

4、样品中维吉尼亚霉素的提取采用基质固相扩散技术（MSPD） ，即通过样品和C 18的混合与研磨过程，使组织的细胞破裂，细胞内部的维吉尼亚霉素等扩散进入固定相的键合相中，然后用有机溶剂将其洗脱下来，供高效液相色谱（紫外检测器）测定。 4.2 试剂和材料 以下所用试剂，除特别注明者外，均为分析纯试剂，水为符合 GB/T6682 规定的二级水。 4.2.1 维吉尼亚霉素对照品 含维吉尼亚霉素不得少于 99.0%。 4.2.2 甲醇 色谱纯 4.2.3 乙腈 色谱纯 4.2.4 正己烷 3DB51/T468-2005 4.2.5 乙酸乙酯 4.2.6 磷酸 4.2.7 磷酸二氢钠 4.2.8 乙二醇 4

5、.2.9 维吉尼亚霉素标准储备液 准确称取维吉尼亚霉素对照品 100mg，加甲醇溶解并稀释成浓度为 1mg/mL 的储备液，置-20冰箱中保存，有效期 3 个月。临用前用甲醇稀释成适宜浓度的标准工作液。 4.2.10 磷酸盐缓冲液（0.01mol/L） 称取磷酸二氢钠 1.56g，用水稀释至 1000mL，用磷酸调节至 PH4.0,即得。 4.3. 仪器和设备 4.3.1 高效液相色谱仪 （配紫外检测器） 4.3.2 离心机 4.3.3 固相萃取装置（配考克阀） 4.3.4 分析天平 感量0.0001g 4.3.5 天平 感量0.01g 4.3.6 旋转蒸发器 4.3.7 振荡器 4.3.8

6、匀浆机 4.3.9 涡旋混合器 4.3.10 微孔滤膜 0.45m 4.3.11 实验室常用仪器和设备 4.4 测定步骤 4.4.1 试样的制备 试样的制备包括 取绞碎或匀浆后的供试样品，作为供试试样。 4.4.2 提取和净化 称取约 2g的C 18填料于玻璃研钵中，加入 0.5g 匀浆后的肝脏试料，用研杵轻轻研磨 30s使其混合均匀，装入 10mL的底端垫有一层滤纸的注射器中，用玻璃棒压至 4mL刻度处。用 8mL正己烷淋洗，抽干，弃去正己烷淋洗液，用乙酸乙酯 8mL洗脱， （淋洗、洗脱流速控制在 5 秒钟 1 滴） 乙酸乙酯洗脱液加入 20L乙二醇，在 40水浴上用氮气吹至近干。用 180

7、L流动相溶解残余物，0.45m微孔滤膜过滤，供高效液相色谱测定。 4.4.3 标准曲线的制备 准确量取适量维吉尼亚霉素标准工作溶液用流动相稀释成浓度为 0.025、0.05 、0.1 、0.3、 0.5、1.25、2.5 g/mL 的系列标准溶液，供高效液相色谱测定。 4DB51/T468-2005 4.4.4 测定 4.4.4.1 色谱条件 色谱柱：Waters C 18（5m ）4.6mm25cm（i.d.） ，或相当者。 流动相：磷酸盐缓冲液/乙腈（V/V，64+36） ，0.45m 微孔滤膜过滤，脱气。 流速：1.0mL/min。 检测器：紫外检测器。 检测波长：230nm。 进样量：

8、50L。 4.4.4.2 测定法 取适量试样溶液和相应的标准溶液，作单点或多点校准，以色谱峰面积积分值定量。标 准溶液及试样溶液中维吉尼亚霉素的响应值均应在仪器检测的线性范围之内。标准溶液的高效液相色谱图见附录 A 中图A.1。 4.5 结果计算 按下式计算供试组织中维吉尼亚霉素残留量( g/kg) ： CSVA Xi = 1000 A S M 式中： Xi试料中维吉尼亚霉素的残留量( g/kg)； CS标准溶液中相应维吉尼亚霉素色谱峰的浓度(g/mL)； A 试样溶液中相应维吉尼亚霉素的峰面积； AS标准溶液中相应维吉尼亚霉素的峰面积； V浓缩至干后，溶解残余物所用流动相的总体积（ mL）； M供试试料的质量（g ）。 5 检测方法灵敏度、准确度、精密度 5.1 灵敏度 本方法在猪的肝脏组织中最低检测限为 25g/ kg，最低检出限为 50g/ kg。 5.2 准确度 本方法在猪的肝脏组织中50g/ kg -500g/ kg 添加浓度的回收率为 60%-110%。 5.3 精密度 本方法的批内变异系数 CV19%，批间变异系数 CV17%。 5DB51/T468-2005 附 录 A 色谱图 （资料性附录） 高效液相色谱图 6