ISO 15154-2003 Tobacco - Determination of the content of reducing carbohydrates - Continuous-flow analysis method《烟草 还原的碳水化合物含量的测定 连续流分析法》.pdf

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1、NORME INTERNATIONALE ISO 15154 Premire dition 2003-04-15 Numro de rfrence ISO 15154:2003(F) ISO 2003 Tabac Dtermination de la teneur en hydrates de carbone rducteurs Mthode par analyse en flux continu Tobacco Determination of the content of reducing carbohydrates Continuous-flow analysis methodISO 1

2、5154:2003(F) ii ISO 2003 Tous droits rservs PDF Exonration de responsabilit Le prsent fichier PDF peut contenir des polices de caractres intgres. Conformment aux conditions de licence dAdobe, ce fichier peut tre imprim ou visualis, mais ne doit pas tre modifi moins que lordinateur employ cet effet n

3、e bnficie dune licence autorisant lutilisation de ces polices et que celles-ci y soient installes. Lors du tlchargement de ce fichier, les parties concernes acceptent de fait la responsabilit de ne pas enfreindre les conditions de licence dAdobe. Le Secrtariat central de lISO dcline toute responsabi

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5、es ont t prises pour garantir lexploitation de ce fichier par les comits membres de lISO. Dans le cas peu probable o surviendrait un problme dutilisation, veuillez en informer le Secrtariat central ladresse donne ci-dessous. ISO 2003 Droits de reproduction rservs. Sauf prescription diffrente, aucune

6、 partie de cette publication ne peut tre reproduite ni utilise sous quelque forme que ce soit et par aucun procd, lectronique ou mcanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans laccord crit de lISO ladresse ci-aprs ou du comit membre de lISO dans le pays du demandeur. ISO copyright office

7、Case postale 56 CH-1211 Geneva 20 Tel. + 41 22 749 01 11 Fax + 41 22 749 09 47 E-mail copyrightiso.org Web www.iso.org Publi en SuisseISO 15154:2003(F) ISO 2003 Tous droits rservs iii Sommaire Page 1 Domaine dapplication . 1 2 Principe . 1 3R actifs . 1 4 Appareillage . 2 5 Mode opratoire . 3 6 Calc

8、uls 3 7R ptabilit et reproductibilit . 4 8 Rapport dessai 4 Annexe A (informative) Prvention de tout prcipit de PAHBAH . 5 Annexe B (informative) Exemple danalyseur flux continu 6 Bibliographie 7ISO 15154:2003(F) iv ISO 2003 Tous droits rservs Avant-propos LISO (Organisation internationale de normal

9、isation) est une fdration mondiale dorganismes nationaux de normalisation (comits membres de lISO). Llaboration des Normes internationales est en gnral confie aux comits techniques de lISO. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de faire partie du comit technique cr cet effet. Les organ

10、isations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec lISO participent galement aux travaux. LISO collabore troitement avec la Commission lectrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation lectrotechnique. Les Normes internationales sont rdiges con

11、formment aux rgles donnes dans les Directives ISO/CEI, Partie 2. La tche principale des comits techniques est dlaborer les Normes internationales. Les projets de Normes internationales adopts par les comits techniques sont soumis aux comits membres pour vote. Leur publication comme Normes internatio

12、nales requiert lapprobation de 75 % au moins des comits membres votants. Lattention est appele sur le fait que certains des lments du prsent document peuvent faire lobjet de droits de proprit intellectuelle ou de droits analogues. LISO ne saurait tre tenue pour responsable de ne pas avoir identifi d

13、e tels droits de proprit et averti de leur existence. LISO 15154 a t labore par le comit technique ISO/TC 126, Tabac et produits du tabac, sous-comit SC 2, Tabacs en feuilles.ISO 15154:2003(F) ISO 2003 Tous droits rservs v Introduction Un groupe de travail du CORESTA 1)a tudi les diffrents modes opr

14、atoires utiliss pour la dtermination des sucres rducteurs dans le tabac afin den retenir un qui deviendra la mthode recommande par le CORESTA. Deux modes opratoires ont t adopts: lISO 15153 et la prsente Norme internationale. Des tudes menes par le groupe de travail du CORESTA entre 1989 et 1993 ont

15、 montr que ces deux mthodes peuvent ne pas donner les mmes rsultats. Pour certains tabacs, les rsultats obtenus avec la mthode de lISO 15153 sont plus levs que ceux obtenus avec la mthode de la prsente Norme internationale car la mthode de lISO 15153 est sensible aux interfrences dues aux substances

16、 rductrices, autres que les sucres et prsentes dans le tabac. Des tudes interlaboratoires ont montr que lextraction leau distille saccompagne dune hydrolyse du saccharose, dans le cas de certains tabacs. 1) CORESTA: Centre de coopration pour les recherches scientifiques relatives au tabac vi NORME I

17、NTERNATIONALE ISO 15154:2003(F) ISO 2003 Tous droits rservs 1 Tabac Dtermination de la teneur en hydrates de carbone rducteurs Mthode par analyse en flux continu 1 Domaine dapplication La prsente Norme internationale spcifie une mthode pour la dtermination de la teneur en hydrates de carbone rducteu

18、rs dans le tabac, par analyse en flux continu. La prsente mthode est applicable aux tabacs bruts et aux tabacs manufacturs. 2P r i n c i p e Un extrait de tabac en solution dans lacide actique est prpar et la teneur en hydrates de carbone rducteurs de lextrait est dtermine par raction avec de lhydra

19、zide p-hydrobenzoque. Dans un milieu alcalin , se forme une osazone jaune qui possde un maximum dabsorption . 3R actifs Tous les ractifs doivent tre utiliss selon les bonnes pratiques de laboratoire et les rglementations nationales en vigueur. Utiliser de leau distille ou de puret au moins quivalent

20、e. 3.1 ther laurique de polyoxythylne (solution de Brij 35) Ajouter 1 litre deau de solution de Brij 35. Chauffer et agiter jusqu dissolution. 3.2 Solution dhydroxyde de sodium, . Prparer 1litre de solution dhydroxyde de sodium partir dampoules ou dissoudre dhydroxyde de sodium dans 800 ml deau. Mla

21、nger et laisser refroidir. Aprs complte dissolution, ajouterde solution de Brij 35 (3.1) et complter 1 litre avec de leau. 3.3 Solution de chlorure de calcium, . Dissoudre de chlorure de calcium hexahydrat dans de leau. Ajouter de solution de Brij 35 (3.1) et complter 1 litre avec de leau. Si un prc

22、ipit se forme, filtrer la solution travers un papier-filtre Whatman n 1 2)(ou lquivalent). 3.4 Solution dacide actique (CH 3 COOH), en fraction volumique. Prparer une solution dacide actique (fraction volumique) partir dacide actique cristallisable. (Ceci est utilis dans la prparation dtalons, dchan

23、tillons et de la solution de rinage de lanalyseur flux continu.) 2) Whatman n 1 est un exemple de produit appropri disponible sur le march. Cette information est donne lintention des utilisateurs de la prsente Norme internationale et ne signifie nullement que lISO approuve ou recommande lemploi excl

24、usif du produit ainsi dsign. 5% 85 C 410 nm 250 g c(NaOH) = 0,5 mol/l 0,5 mol/l 20,0 g 0,5 ml c(CaCl 2 ) = 0,008 mol/l 1,75 g 0,5 ml 5% 5%ISO 15154:2003(F) 2 ISO 2003 Tous droits rservs 3.5 Acide chlorhydrique dilu, . Verser deau dans une fiole jauge de 1 litre. Ajouter lentement dacide chlorhydriqu

25、e concentr ( en fraction massique). Complter au volume avec de leau. 3.6 Solution dhydrazide p-hydrobenzoque (PAHBAH), (HOC 6 H 4 CONHNH 2 ). Verser dacide chlorhydrique dilu (3.5) dans une fiole jauge de . Ajouter dhydrazide p-hydrobenzoque et laisser se dissoudre. Ajouter dacide citrique monohydra

26、t HOC(CH 2 COOH) 2 COOH,H 2 O. Complter au volume avec de lacide chlorhydrique dilu (3.5). Conserver et sortir du rfrigrateur uniquement le volume ncessaire pour couvrir les besoins journaliers. Il est trs important que le PAHBAH (de fraction massique ) soit pur puisquun prcipit peut se former dans

27、le courant analytique si la solution contient des impurets. Il est possible de recristalliser le PAHBAH partir de leau (voir 4). Le PAHBAH est impur lorsque les caractristiques suivantes sont observes: a) des particules sombres mlanges aux cristaux blancs de PAHBAH; b) une couleur jaune dans la solu

28、tion de PAHBAH prpare partir de HCl ; c) des difficults dissoudre les cristaux de PAHBAH dans du NaOH ; d) des particules trangres flottant dans le ractif; e) instabilit de la ligne de base pour le ractif. Il est galement possible de prparer une solution de PAHBAH comme suit. Verser les dacide chlor

29、hydrique dilu dans un bcher. Chauffer et ajouter, sans cesser dagiter, le PAHBAH ainsi que lacide citrique monohydrat lacide chlorhydrique dilu. Laisser refroidir la solution, la verser dans une fiole jauge et complter au volume. Il a t observ que le fait de prparer la solution de PAHBAH selon le pr

30、sent mode opratoire vite la formation dun prcipit dans le flux analytique. LAnnexe A donne dautres mthodes relatives la prvention de la formation de prcipit de PAHBAH. 3.7 D-Glucose (C 6 H 12 O 6 ) Conserver dans un dessiccateur. 3.8 Solutions talons de glucose 3.8.1 Solution mre Peser, prs, environ

31、 de glucose (3.7). Dissoudre dans dacide actique (3.4) dans une fiole jauge de 1 litre et complter au volume avec de lacide actique. Cette solution contient environde glucose. Conserver au rfrigrateur. Prparer une solution frache tous les mois. 3.8.2 Solutions dtalonnage partir de la solution mre (3

32、.8.1), prparer, par dilution avec lacide actique (3.4), une srie dau moins cinq solutions dtalonnage dont les concentrations en glucose couvrent la gamme de concentrations prsumes des chantillons analyser (par exemple de ). Calculer la concentration exacte pour chaque talon. Conserver au rfrigrateur

33、. Prparer des solutions fraches toutes les deux semaines. 4 Appareillage Matriel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit. c(HCl) = 0,5 mol/l 500 ml 42 ml 37 % 250 ml 500 ml 25 g 10,5 g 5 C 97 % 5 % 0,5 mol/l 0,5 mol/l 250 ml 45 C 1 C 0,1 mg 10,0 g 800 ml 5 % 10 mg/ml 5% 0,2 mg/ml 1,8

34、mg/mlISO 15154:2003(F) ISO 2003 Tous droits rservs 3 4.1 Analyseur flux continu, comprenant un chantillonneur, une pompe volumtrique, un dialyseur, un bain-marie, des bobines de raction, un colorimtre (ou lquivalent) avec filtre(s) de , et un enregistreur. Voir un exemple lAnnexe B. 5 Mode opratoire

35、 5.1 Prparation des chantillons analyser Broyer les chantillons de tabac analyser (il convient que la totalit de lchantillon passe travers un tamis de douverture de maille) et en dterminer le taux dhumidit. Si le tabac est trop humide pour tre broy, il peut tre sch une temprature nexcdant pas . 5.2

36、Prise dessai Peser, prs, environ de tabac dans une fiole conique sche de . Ajouter dacide actique (3.4), boucher la fiole et agiter pendant . 5.3 Prparation de lextrait pour essai Filtrer lextrait travers un papier-filtre Whatman n 40 3)(ou lquivalent). Rejeter les premiers millilitres de filtrat et

37、 recueillir le reste dans un flacon de lanalyseur. Analyser les chantillons et les talons de faon habituelle (par exemple commencer avec six extraits de tabac, des solutions dtalonnage et des chantillons avec une solution dtalonnage intermdiaire tous les six chantillons). Si les concentrations des c

38、hantillons se trouvent hors de la gamme dtalonnage, les chantillons doivent tre dilus avec la solution dacide actique (3.4) et lanalyse doit tre recommence. Lors dextractions lacide actique , la solution de rinage doit tre de lacide actique . NOTE Des solutions talons combines peuvent tre prpares si

39、 la prsente mthode est utilise simultanment avec les mthodes dcrites dans lISO 15152 ou dans lISO 15517. Aprs environ 2 semaines, un prcipit peut se former dans les solutions mres combines. 6C a l c u l s 6.1 Tracer la courbe reprsentative des hauteurs de pics en fonction des concentrations quivalen

40、tes en glucose pour toutes les solutions dtalonnage. 3) Whatman n 40 est un exemple de produit appropri disponible sur le march. Cette information est donne lintention des utilisateurs de la prsente Norme internationale et ne signifie nullement que lISO approuve ou recommande lemploi exclusif du pro

41、duit ainsi dsign. 410 nm 1mm 40 C 0,1 mg 250 mg 50 ml 25 ml 30 min 5% 5%ISO 15154:2003(F) 4 ISO 2003 Tous droits rservs 6.2 Calculer le pourcentage dhydrates de carbone rducteurs dans le tabac, (exprim sous forme de glucose), rapport la matire sche, laide de la formule o est la concentration en hydr

42、ates de carbone rductrices, exprime en milligrammes par millilitre, obtenue partir de la courbe dtalonnage (voir 6.1); est le volume, en millilitres, de lextrait prpar (voir 5.2) (normalement ); est la masse, en milligrammes, de lchantillon (voir 5.2); est le taux dhumidit du tabac, exprim en pource

43、ntage en masse (voir 5.1). Les rsultats dessai doivent tre exprims une dcimale. 7R ptabilit et reproductibilit Une tude interlaboratoire organise sur le plan international, conduite en 1993, avec la participation de 13 laboratoires et portant sur 3 chantillons, a permis dobtenir les valeurs suivante

44、s pour les limites de rptabilit ( ) et de reproductibilit ( ) lors de lanalyse de grades dfinis de tabac par la prsente mthode. La diffrence entre deux rsultats individuels obtenus pour diffrentes extractions par le mme oprateur utilisant le mme appareillage dans un court intervalle de temps (le tem

45、ps ncessaire pour analyser 40 flacons dchantillons) et sans rtalonner lappareillage durant toute lanalyse nexcdera la limite de rptabilit () quen moyenne une fois au plus sur 20, lorsque la mthode est normalement et correctement applique. Des rsultats individuels obtenus par deux laboratoires ne dif

46、freront de la limite de reproductibilit ( ) quen moyenne une fois au plus sur 20, lorsque la mthode est normalement et correctement applique. Lanalyse des donnes a permis dobtenir les estimations rcapitules dans le Tableau 1. Pour calculer et , un rsultat dessai a t dfini comme tant le taux obtenu e

47、n analysant un extrait donn une seule fois. 8 Rapport dessai Dans le rapport dessai, la mthode utilise doit tre spcifie. Tableau 1 Valeurs de rptabilit et de reproductibilit Type de tabac Teneur moyenne en hydrates de carbone rducteurs Limite de rptabilit Limite de reproductibilit(matire sche) T abac Burley 0,6 0,4 0,6 T abac dOrient 14,5 1,6 3,3 T abac sch lair chaud 20,0 1,