DB36 T 486-2005 《畜禽肉中金霉素残留量的测定》.pdf

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1、 DB36备案号： 18621-2006 江西省地方标准DB36/T 4862005畜禽肉中金霉素残留量的测定 2005-12-25 发布 2006-02-01 实施江西省质量技术监督局发布DB36/T 4862005 I 前 言 本标准由江西省农业厅提出。 本标准由江西省无公害农产品质量监督检验站起草。 标准主要起草人：李伟红、严寒、戴廷灿、卢普滨、罗林广。 DB36/T 4862005 1 畜禽肉中金霉素残留量的测定 1 范围 本标准规定了高效液相色谱法（HPLC）检测畜禽肉中金霉素残留的方法，方法最小检测浓度为0.04mg/kg。 2 测定方法 2.1 原理：样品经提取，OasisHLB

2、 柱净化，微孔滤膜过滤后直接进样，用反相色谱分离，紫外检测器检测，与标准比较定量。 2.2 试剂 方法所用试剂，凡未指明规格者，均为分析纯；水为蒸馏水。 2.2.1 甲醇：色谱纯。 2.2.2 乙腈：色谱纯。 2.2.3 草酸: 优级纯。 2.2.4 Mcllvaine 缓冲液：准确称取 28.41g Na2HPO4，用水溶解，定容于 1000mL容量瓶中，简称溶液A。准确称取柠檬酸 21.00g，用水溶解，定容于 1000mL容量瓶中，简称溶液B。取 625mL溶液A和 1000mL溶液B混匀，用H 3PO4溶液调节pH至4.00.05。 2.2.5 Mcllvaine-Na2EDTA液：准

3、确称取6.049g Na 2EDTA溶解于1625mL的Mcllvaine液中，使成0.01mol/LNa2EDTA的Mcllvaine液。 2.2.6 0.01mol/L 草酸溶液：称取1.261g 草酸 (2.2.3),用蒸馏水溶解，定容至1000mL，过0.45 um微孔滤膜。 2.2.7 5%甲醇溶液：移取5mL 甲醇用蒸馏水定容至100mL。 2.2.8 Oasis HLB 固相萃取柱或相同类型小柱： 200mg,6mL。 2.2.9 0.1mg/mL 金霉素储备溶液：准确称取适量的金霉素标准物质，用甲醇配成 0.1mg/mL 的标准储备液，储备液储存于18。 2.2.10 金霉素标

4、准溶液:使用时移取金霉素储备液适量，根据需要用甲醇逐级稀释成适当浓度的标准工作溶液。 2.3 仪器设备 2.3.1 高效液相色谱仪：配有紫外检测器。 2.3.2 匀浆机：3000rpm 以上。 2.3.3 离心机：10000rpm 以上。 2.3.4 固相萃取装置 2.3.5 氮吹仪 2.3.6 微孔滤膜: 20mm0.45um 油性滤膜。 3 测定步骤 3.1 提取：称取试样10.00g，置于50mL离心管中，加入20mL Mcllvaine-Na 2EDTA液， 3000rpm匀浆2min，超声波器中超声提取10min，随后置离心机中离心10min（10000rpm），移出上清液，在残渣中

5、再加入 20mL Mcllvaine-Na 2EDTA溶液，重复上述操作，合并两次上清液，将两次上清液再次离心 10min（5000rpm），待净化。 DB36/T 4862005 2 3.2 净化 3.2.1 将固相萃取小柱安装在固相萃取装置上，分别用 3mL 甲醇、2mL 蒸馏水进行活化。 3.2.2 将（3.1）的样品提取上清液倒入 Oasis 固相萃取柱（3.2.1）中，控制流速以不超过 4.0mL/min的流速流过，待上清液完全流出后，用 3mL5%甲醇洗去杂 质，弃去全部流出液，减压抽干2min，最后用5mL 甲醇（2.2.1）进行洗脱，收集洗脱液于10mL 刻度试管中。 3.3

6、浓缩与定容:在 50下,用氮吹仪浓缩至 0.5mL，过0.45um 微孔滤膜，待测。 3.4 测定 3.4.1 检测条件 3.4.1.1 色谱柱：SunFire (5um)150mm4.6mm。 3.4.1.2 流动相：0.01mol/L 草酸：乙腈：甲醇70：15：15。 3.4.1.3 流速：1.2mL/min。 3.4.1.4 柱温：35。 3.4.1.5 检测波长：355nm。 3.4.1.6 进样量： 20ul。 3.4.2 样品测定 待仪器基线稳定后，分别取标准溶液和样品溶液交替注入仪器中，采用单点或多点校准法，以色谱峰面积定量。 3.5 计算 结果按下式计算： X = X 试样中金霉素残留量，单位为毫克每千克（mg/kg） A 样品测定液中测得金霉素的溶度（ug/mL） V 样品测定容体积（mL） M 所称样品的质量，单位为克（g） 注: 计算结果应扣除空白值 4 允许误差 在重复性条件下获得的两次平行检测结果的绝对差值不得超过平均值的15%。 AV M