（江苏专用）2019高考生物二轮复习非选择题冲击高分规范练命题点5生物技术实践.doc

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1、1命题点 5 生物技术实践真题重温练(A 卷)1(2018江苏，31)酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白的来源。有些酵母可以利用工业废甲醇作为碳源进行培养，这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母，并进行大量培养。下图所示为操作流程，请回答下列问题：(1)配制培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，调节培养基的_，及时对培养基进行分装，并进行_灭菌。(2)取步骤中不同梯度的稀释液加入标记好的无菌培养皿中，在步骤中将温度约_(填“25 ” “50 ”或“80 ”)的培养基倒入培养皿混匀，冷凝后倒置培养。(3)挑取分离平板中长出的单菌落

2、，按步骤所示进行划线。下列叙述合理的有_。a为保证无菌操作，接种针、接种环使用前都必须灭菌2b划线时应避免划破培养基表面，以免不能形成正常菌落c挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定酵母细胞中甲醇的含量d可以通过逐步提高培养基中的甲醇的浓度，获得甲醇高耐受株(4)步骤中，为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和_供应。为监测酵母的活细胞密度，将发酵液稀释 1 000 倍后，经等体积台盼蓝染液染色，用 2516型血细胞计数板计数 5 个中格中的细胞数，理论上_色细胞的个数应不少于_，才能达到每毫升 3109个活细胞的预期密度。答案 (1)pH 高压蒸汽(湿热) (2)50 (3)a、b、

3、d (4)氧气 无 30解析 (1)配制培养基时，进行计算、称量、溶解、定容后，需先调节 pH 再分装到锥形瓶中进行高压蒸汽灭菌。(2)倒平板时的培养基温度约为 50 ，冷凝后倒置培养。(3)平板划线时，接种针、接种环使用前和每次划线后都需要进行灼烧灭菌，以免造成杂菌污染，a 正确；划线时不能划破培养基表面，否则不能形成正常菌落，b 正确；挑取菌落时，应挑取多个不同的菌落，分别测定酵母细胞中蛋白质含量，c 错误；逐步提高培养基中甲醇的浓度，能筛选出其中的耐受菌，获得甲醇高耐受菌株，d 正确。(4)酵母是兼性厌氧型真菌，在有氧条件下可大量繁殖。酵母扩大培养时，需保证充足的营养和氧气等条件。由题中

4、信息“经等体积台盼蓝染液染色”可知，计数室中培养液容积实际只有 0.120.05 mm3。设 5 个中方格中无色(活细胞不能被台盼蓝染色)的细胞数目为 x 个，则3109 x/5251 0001 0000.05，解得 x30。2(2017江苏，31)苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对环境有严重危害。小明同学准备依据下图操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解高效菌株。请回答下列问题：(1)酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、K 2HPO4、MgSO 4、苯酚和水，其中可作为碳源的有_。(2)将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐_，以达到富集酚降解菌的目的。若上图平板中菌落

5、过于密集，应进一步_，以便于菌落计数与分离。制备平板培养基时除了需要水、营养物质外，还必须添加_。(3)下图为连续划线法示意图，在图中_(填图中序号)区域更易获得单菌落。3(4)采用比色测定法(使用苯酚显色剂)检测降解后的废水中苯酚残留量。先制作系列浓度梯度并进行显色反应，下表中 15 号比色管的苯酚浓度应分别为_。管号 1 2 3 4 5 6苯酚浓度/(mgL 1 ) 1如果废水为 50 mg/L 苯酚溶液，降解后约有 21% 的苯酚残留，则需将残留液稀释_(填序号：5 10 20)倍后，再进行比色。答案 (1)蛋白胨、苯酚 (2)增加 稀释涂布 凝固剂(3) (4)0、0.2、0.4、0.

6、6、0.8 解析 (1)含碳有机物如蛋白胨、苯酚均可作为异养型细菌的碳源。(2)为达到富集苯酚降解菌的目的，培养过程中随转接次数增加，应逐渐提高苯酚用量。若平板中菌落过于密集，为便于分离计数，则应进一步稀释涂布；进行分离计数应制备“固体”培养基，故平板培养基中除需水、营养物质外，还需添加凝固剂。(3)连续划线法分离菌种时，在最后的划线区，菌种分散最充分，最宜获得单菌落。(4)制作系列浓度梯度进行显色反应应设置无菌水作对照组(苯酚浓度为 0)，并设置等差密度梯度，故 15 号比色管中苯酚浓度依次为0、0.2、0.4、0.6、0.8。若废水为 50 mg/L 苯酚溶液，降解后约有 21%的苯酚残留

7、，则降解后残留液中苯酚浓度为 5021%10.5(mg/L)，宜将其稀释 20 倍方可达到适宜比色管苯酚浓度。3(2016江苏，29)为了探索海藻酸钠固定化对绿球藻生长的影响，以及固定化藻对含Zn2 污水的净化作用，科研人员用筛选到的一株绿球藻进行试验，流程及结果如下。请回答下列问题： 制 备 固 定 化 绿 球 藻 凝 胶 球 清 洗 2 3次 培 养 液 中 培 养 取 适 量 凝 胶 球 柠 檬 酸 钠 溶 液 溶 解 凝 胶 球 ， 测 定 藻 数 量4(1)实验中的海藻酸钠作用是_，CaCl 2的作用是_。(2)为洗去凝胶球上残余的 CaCl2和其他污染物，并保持绿球藻活性，宜采用_

8、洗涤。图 1 中 1.0%海藻酸钠组培养 24 h 后，移去凝胶球，溶液呈绿色，原因是_。(3)为探索固定化藻对含 Zn2 污水的净化作用，应选用浓度为_海藻酸钠制备凝胶球。(4)图 2 中空白凝胶球组 Zn2 浓度下降的原因是_。结合图1 和图 2 分析，固定化藻的实验组 2448 h 间 Zn2 浓度下降速度较快的主要原因是_；7296 h 间 Zn2 浓度下降速度较慢的原因有_。答案 (1)包埋绿球藻(包埋剂) 与海藻酸钠反应形成凝胶球(凝固剂) (2)培养液(生理盐水) 海藻酸钠浓度过低(凝胶球孔径过大) (3)2.0% (4)凝胶球吸附 Zn2 绿球藻生长(增殖)速度快 绿球藻生长(

9、增殖)速度减慢，溶液中 Zn2 浓度较低解析 (1)海藻酸钠溶液在 CaCl2溶液中形成凝胶球，包埋绿球藻。(2)可采用培养液或生理盐水洗去凝胶球上残余的 CaCl2和其他污染物，并保持绿球藻活性。溶液呈绿色，说明固定化的绿球藻数量少，原因是海藻酸钠浓度过低(凝胶球孔径过大)。(3)根据图 1 可知，浓度为 2.0%的海藻酸钠制备的凝胶球最有利于绿球藻的繁殖。(4)空白凝胶球容易吸附Zn2 ，导致溶液中 Zn2 浓度下降；根据图 1 和图 2 分析，固定化藻的实验组 2448 h 间绿球藻数量增加最快(处于“S”型曲线的 K/2 值处)，导致 Zn2 浓度下降速度较快；7296 h 间绿球藻数

10、量基本不再增加。4(2015江苏，31)人工瘤胃模仿了牛羊等反刍动物的胃，可用来发酵处理秸秆，提高秸秆的营养价值。为了增强发酵效果，研究人员从牛胃中筛选纤维素酶高产菌株，并对其降解纤维素能力进行了研究。请回答下列问题：(1)在样品稀释和涂布平板步骤中，下列选项不需要的是_(填序号)。酒精灯 培养皿 显微镜 无菌水(2)在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多的原因是_。5(3)向试管内分装含琼脂的培养基时，若试管口粘附有培养基，需要用酒精棉球擦净的原因是_。(4)刚果红可以与纤维素形成红色复合物，但并不与纤维素降解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。研究人员在刚果红培养基平板上，筛到了几

11、株有透明降解圈的菌落(见下图)。图中降解圈大小与纤维素酶的_有关。图中降解纤维素能力最强的菌株是_(填图中序号)。(5)研究人员用筛选到的纤维素酶高产菌株 J1 和 J4，在不同温度和 pH 条件下进行发酵，测得发酵液中酶活性的结果见下图，推测菌株_更适合用于人工瘤胃发酵，理由是_。答案 (1) (2)培养基表面的菌悬液会出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果 (3)避免培养基污染棉塞 (4)量与活性 (5)J 4 发酵过程会产热和产酸，J 4菌株在较高温度和酸性环境下酶的活性更高解析 (1)样品稀释和涂布平板的操作不需要显微镜。(2)涂布平板时若培养基表面的菌悬液过多，菌体堆积，会影响分离效果

12、。(3)试管口粘附的培养基，需要用酒精棉球擦净，避免培养基污染棉塞。(4)菌株产生的降解纤维素酶的量越多、活性越高，会使降解圈越大。降解纤维素能力最强的菌株是，因其菌株菌落最小，但降解圈最大。 (5)分析图中曲线可知，J4 菌株在较高温度和酸性环境下酶的活性更高，而发酵过程会产热和酸，故该菌株最适合用于人工瘤胃发酵。5(2014江苏，30)为了获得 胡萝卜素产品，某小组开展了产 胡萝卜素酵母的筛选与色素提取实验。请回答下列问题：(1)实验用的培养皿常用的两种灭菌方法是_；为了减少6灭菌后器皿被污染，灭菌前应该_。(2)为了筛选出酵母菌，培养基中添加了青霉素，其目的是_。(3)下图是灭菌锅及其局

13、部剖面示意图，图中甲、乙、丙指示的依次是_。 (填序号)安全阀、放气阀、压力表放气阀、安全阀、压力表安全阀、放气阀、温度表放气阀、安全阀、温度表(4)为了将分离到的菌株纯化，挑取了菌落在 3 块相同平板上划线，结果其中一块平板的各划线区均未见菌生长，最可能的原因是_。(5)为增加 胡萝卜素提取量，在研磨酵母细胞时，添加石英砂的目的是_；研磨时_(填“需要”或“不需要”)添加 CaCO3，理由是_。答案 (1)干热灭菌和湿热灭菌(高压蒸汽灭菌) 用牛皮纸(报纸)包扎器皿 (2)抑制细菌(放线菌)生长 (3) (4)接种环温度过高，菌被杀死 (5)有助于研磨充分 不需要 胡萝卜素较耐酸解析 (1)

14、培养皿灭菌常用的方法有湿热灭菌(高压蒸汽灭菌)、干热灭菌等。将培养皿放入灭菌锅之前通常用牛皮纸或报纸包扎，避免灭菌后的再次污染。(2)青霉素能抑制细菌和放线菌的生长繁殖，但对酵母菌等真菌不起作用，因此添加青霉素可筛选出酵母菌。(3)图中乙连接软管，为排(放)气阀，甲为安全阀，丙是压力表。(4)三块平板中有两块平板长有菌落，说明含有菌株并可在培养基上生长；而其中一块平板未见菌落，说明接种不成功，可能是接种环灼烧后未冷却或未充分冷却，使菌株因温度过高而被杀死。(5)从 胡萝卜素酵母中提取 胡萝卜素，参照叶绿体中色素提取的方法，可添加石英砂，因为石英砂有助于研磨充分。在提取叶绿体中色素时，CaCO

15、3的作用是中和酸性物质，防止叶绿素被分解，而 胡萝卜素较耐酸，不易被分解，故在研磨酵母细胞时无需添加 CaCO3。6(2018全国，37)回答下列与酵母菌有关的问题：(1)分离培养酵母菌通常使用_(填“牛肉膏蛋白胨” “MS”或“麦芽汁琼脂”)培养基，该培养基应采用_灭菌法灭菌。若将酵母菌划线接种在平板上，培养一段时间后可观察到菌落，菌落的含义是_。7(2)酵母菌液体培养时，若通入氧气，可促进_(填“菌体快速增殖” “乙醇产生”或“乳酸产生”)；若进行厌氧培养，可促进_(填“菌体快速增殖” “乙醇产生”或“乳酸产生”)。(3)制作面包时，为使面包松软通常要在面粉中添加一定量的酵母菌，酵母菌引起

16、面包松软的原因是_。答案 (1)麦芽汁琼脂 高压蒸汽 由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体 (2)菌体快速增殖 乙醇产生 (3)酵母菌分解葡萄糖会产生 CO2，CO 2使面包松软解析 (1)麦芽汁琼脂培养基的碳氮比较高，而且含糖量高，更适合酵母菌培养；该培养基应采用高压蒸汽灭菌法灭菌；若将酵母菌划线接种在平板上，培养一段时间后可观察到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落。(2)酵母菌液体培养时，若通入氧气，进行有氧呼吸产生 H2O 和 CO2，释放能量多，细胞增殖快；若进行无氧培养，酵母菌进行无氧呼吸，产生酒精和 CO2，释放能量少，增殖慢。(3)制作面包时，在面粉中添加一

17、定量的酵母菌，因酵母菌可以分解面粉中的葡萄糖，产生二氧化碳，二氧化碳是气体，遇热膨胀而形成小孔，使得面包松软多孔。模拟对位练(B 卷)1微生物在发酵食品的加工中起着极其重要的作用，可利用微生物制作果酒和果醋等。下图是利用微生物制作果醋的流程示意图和发酵装置示意图，回答有关问题：(1)发酵时装置要清洗干净，并且用_消毒。作为果酒的发酵装置，管口2 应该_，以防止排气时空气中的微生物污染。(2)与 A 发酵过程有关的微生物在_发酵液中可以生长繁殖，该环境对杂菌则有抑制作用。发酵后期，酒精的含量一般不超过 12%，原因是_。(3)制葡萄醋的过程中，要打开阀 a，原因是_。(4)在发酵过程中要定时打开

18、阀 b 检测发酵液中微生物总数是否超标，为此进行了相关实验。先将一定量的果醋进行_，然后用_将菌液接种于固体培养基上，经培养后进行计数，计数时应选择菌落数在_的平板进行计数。答案 (1)70%的酒精 长而弯曲并且管口朝下 (2)缺氧、酸性 酒精对细胞有毒害作用，会抑制酵母菌的代谢活动 (3)醋酸菌是好氧细菌，用酒精产醋酸需要氧气参与 (4)一系列的梯度稀释 涂布器 303008解析 (1)对于清洗干净的发酵装置还需用 70%的酒精进行消毒。为防止排气时空气中的微生物污染，果酒发酵装置的管口 2 应该长而弯曲并且管口朝下。(2)A 是酒精发酵，与此过程有关的微生物酵母菌在缺氧、酸性的发酵液中可以

19、生长繁殖。由于酒精对细胞有毒害作用，且会抑制酵母菌的代谢活动，所以发酵后期，酒精的含量一般不超过 12%。(3)制葡萄醋的过程中，利用的醋酸菌是一种好氧细菌，用酒精产醋酸需要氧气参与，因此要打开阀 a，以通入空气。(4)为检测发酵液中微生物总数是否超标，需先将一定量的果醋进行一系列的梯度稀释 ，然后用涂布器将菌液接种于固体培养基上，经培养后进行计数，计数时应选择菌落数在30300 的平板进行计数。2(2018江苏扬、通、泰、徐、淮、宿、连七市高三调研)图 1 表示研究人员为筛选纤维素酶高产菌株进行的相关实验流程，其中透明圈是微生物在固体培养基上消耗特定营养物质形成的。请回答下列问题：(1)本实

20、验中，选择蘑菇培养基质作为纤维素酶高产菌株的来源，这是因为_。(2)筛选用的培养基应以_作为唯一碳源，并在配制培养基时加入_作为凝固剂。筛选时应选择 D/d 比值较大的菌株，因为这一指标值越大说明_。(3)图 2、图 3 是研究纤维素酶的最适温度和热稳定性的结果。研究纤维素酶的热稳定性时，首先将纤维素酶液置于 3565 的不同温度条件下保温 2 h，再取上述不同温度处理的纤维素酶液和_，并在_下测定纤维素酶的催化速率，计算酶活性残留率。9生产中使用该纤维素酶时，最好将温度控制在 40 左右，依据是_。答案 (1)蘑菇培养基质中富含纤维素，会聚集较多的纤维素分解菌 (2)纤维素 琼脂 单个菌体产

21、生的纤维素酶的活性越强 (3)未经保温处理的纤维素酶液 50 该温度下，纤维素酶的热稳定性高，作用时间持久，且酶活性相对较高解析 (1)从生物与环境适应性角度分析，能大量合成纤维素酶的微生物应该生活在纤维素丰富的环境中，而蘑菇培养基质以植物秸秆等为主，含有丰富的纤维素，能聚集较多的纤维素分解菌。(2)在以纤维素为唯一碳源的培养基中能够增殖的微生物一定能够合成纤维素酶，所以筛选用的培养基应以纤维素作为唯一碳源，在配制培养基时可加入琼脂作为凝固剂。在培养过程中，透明圈直径越大，说明微生物产生的纤维素酶越多，而菌落直径越小，说明微生物数量越少，因此透明圈直径与菌落直径比值的大小反映微生物单细胞产生的

22、纤维素酶的活性大小，该比值越大，则纤维素酶活性越大。(3)酶热稳定性测量中，酶活性残留率是指酶分子在一定温度条件下，一段时间后的催化活性与未保温处理前酶催化活性的比值。因此，在实验中需要设置对照(没有进行温度处理的酶活性测量)。在进行酶活性测定时，提供的温度应选择最适温度，根据图 2 实验可知，纤维素酶催化的最适温度在 50 左右。(4)在生产中，使用酶催化时，酶有钝化现象(催化活力逐渐下降)，因此，考虑到生产成本和可持续生产，需要特别注意尽可能保证酶具有较高的热稳定性。3科研人员开展海藻酸钠固定化乳酸菌的相关研究，得到如下实验结果。请回答下列问题：海藻酸钠浓度对成珠的影响海藻酸钠浓度/% 成

23、珠状况0 1.0 成珠较易，但强度较低1.5 成珠容易，强度适中2.0 成珠较难，强度较高2.5 成珠困难，强度高(1)本研究中固定化细胞的技术属于_法，其优点是_。(2)实验中需要先将溶化的海藻酸钠溶液冷却至_后，才能加入乳酸菌。为保证配制10的海藻酸钠浓度准确，在海藻酸钠完全溶化后需要_。(3)根据实验结果，研究人员认为海藻酸钠浓度为 1.5%为宜，这是因为用较低浓度的海藻酸钠固定时，凝胶珠内部网格较大，有利于_，乳酸发酵速度快。而与浓度为 1.0%比较，1.5%时形成的凝胶珠_，有利于凝胶珠的重复利用。(4)利用固定化乳酸菌发酵时，凝胶珠添加量过高会抑制菌株生长，进而使乳酸产量下降。试写

24、出探究凝胶珠适宜添加量的实验思路：_。答案 (1)包埋 操作简单，对细胞损伤小 (2)室温 加无菌水(蒸馏水)定容 (3)凝胶珠内外物质交换 强度适中 (4)取等量的发酵液，分别加入不同量的凝胶珠，在适宜条件下发酵，相同时间后，比较各发酵液的酸度(或乳酸含量)解析 (1)海藻酸钠通常被用作包埋法制备固定化细胞时的包埋材料，因此本研究中固定化细胞的技术属于包埋法。利用包埋法固定化细胞的优点是：操作简单，对细胞损伤小。(2)实验中需要先将溶化的海藻酸钠溶液冷却至室温后才能加入乳酸菌，否则高温会导致乳酸菌死亡。为保证配制的海藻酸钠浓度准确，在海藻酸钠完全溶化后需要加无菌水或蒸馏水定容。(3)用较低浓

25、度的海藻酸钠固定时，凝胶珠内部网格较大，用于乳酸菌发酵时，有利于凝胶珠内外物质交换，乳酸发酵速度较快。海藻酸钠浓度过高或过低都不利于凝胶珠保持完整。由表格信息可知，与海藻酸钠浓度为 1.0%比较，1.5%时形成的凝胶珠强度适中，有利于凝胶珠的重复利用。(4)根据实验目的可知，该实验的自变量为凝胶珠添加量，因变量为乳酸产量，发酵液用量、发酵条件、发酵时间等为无关变量。因此该实验的大体思路是：取等量的发酵液，分别加入不同量的凝胶珠，在适宜条件下发酵，相同时间后，比较各发酵液的酸度(或乳酸含量)。4(2018苏锡常镇四市高三调研二)MICP 技术是通过向岩土中注入某种微生物以及胶结液(尿素和氯化钙溶

26、液)，利用该微生物将尿素水解为铵离子和碳酸根离子，碳酸根离子与钙离子形成碳酸钙晶体，从而将岩土原位固化。某研究人员对该种微生物进行了分离并在最适生长条件(温度 35 ，摇床转速 200 r/min)下测定了其生长曲线，结果如图。请回答下列问题：(1)此研究中的微生物能合成_，从而将尿素分解。被该种微生物分解后的胶结液 pH_(填“升高”或“降低”)，使 NA尿素固体培养基中的溴甲酚紫呈紫色，11从而有利于挑取出该种微生物。(2)本研究中的 NA尿素固体培养基，从功能上看，属于_培养基。在其灭菌过程中，需用到高压蒸汽灭菌锅。下面是关于高压蒸汽灭菌锅使用过程中的操作，正确的先后顺序是_。装入待灭菌

27、物品 加盖加热灭菌锅 打开排气阀关闭排气阀 切断电源压力表的压力降到零 打开盖子取出灭菌物品(3)研究初期，需将土样置于选择培养液中培养 24 h，目的是_。(4)通常在培养末期细菌的数量会显著减少，但实验人员实际测得的细菌浓度(OD 600)下降较慢最可能的原因是_。(5)使用该菌体和胶结液进行岩石工程原位加固时，还需向深层的岩土介质补充_。答案 (1)脲酶(或分解尿素的酶) 升高 (2)鉴别 (3)对该尿素分解菌扩大培养，使尿素分解菌的浓度增加 (4)死亡菌体蛋白质核酸没有分解 (5)溶解氧解析 (1)酶具有专一性，该微生物可分解尿素，说明该微生物能合成分解尿素的脲酶。该种微生物可将胶结液

28、中的尿素水解为铵离子和碳酸根离子，由于碳酸根离子可与钙离子形成碳酸钙晶体，因此被这种微生物分解后的胶结液 pH 会升高。(2)能产生脲酶的微生物可使 NA尿素固体培养基中的溴甲酚紫呈紫色，说明 NA尿素固体培养基可用于能产生脲酶的微生物的鉴定，属于鉴别培养基。利用高压蒸汽灭菌锅对培养基灭菌的操作步骤是：装入待灭菌物品加盖加热灭菌锅打开排气阀，使水沸腾，排出锅内冷空气冷空气完全排尽后，关闭排气阀到灭菌时间后，切断电源让锅内温度自然下降，压力表的压力降到零打开排气阀打开盖子取出灭菌物品。(3)研究初期，需将土样置于选择培养液中培养 24 h，目的是对该尿素分解菌进行扩大培养，使尿素分解菌的浓度增加

29、。(4)在培养末期，虽然细菌的数量显著减少，但由于死亡菌体蛋白质核酸还没有分解，因此实验人员实际测得的细菌浓度(OD 600)下降较慢。(5)摇床培养通常用于需氧微生物的培养，由此可知，使用该菌体和胶结液进行岩石工程原位加固时，还需向深层的岩土介质补充溶解氧。5(2018南京三模)固定化的高温淀粉酶被大规模用于工业生产。研究者从热泉中筛选出高效产生高温淀粉酶的嗜热菌，其筛选和固定过程如图 1 所示。菌株在含有淀粉的固体培养基上可释放淀粉酶分解淀粉，在菌落周围形成透明圈。请分析回答问题：12(1)与大肠杆菌相比，嗜热菌 DNA 碱基组成的特点是_。(2)号、号培养基的配制主要包括如下步骤：a.溶

30、化，b.调 pH，c.灭菌，d.称量，正确的操作步骤顺序是_(用字母和箭头表示)。(3)将配制好的培养基放入高压蒸汽灭菌锅内，加盖并将排气管插入内层灭菌桶内的排气槽内。拧紧固定盖子的螺栓时，注意_，以免漏气。(4)号培养基中以淀粉为唯一碳源，从功能上讲该培养基属于_。待菌落长出后，应选择_的菌落接种到号培养基，第二次以后的划线，总是从_开始，实验中过程的目的是_。(5)若要保证高温淀粉酶的活性在固定化处理时不受损失，且在多次重复使用后仍能维持稳定的酶活性，则最好选择下图 2 中的_固定化工艺(填图中字母)。答案 (1)碱基 G 和 C 含量较高 (2)dabc (3)要同时旋紧相对的两个螺栓，

31、使螺栓松紧一致 (4)选择培养基 透明圈大 上一次划线的末端 (转移)扩大培养 (5)c解析 (1)由于 GC 碱基对间形成的氢键数多于 AT 碱基对间形成的氢键数，因此碱基 G和 C 含量越高的 DNA 结构越稳定。所以与大肠杆菌相比，嗜热菌 DNA 碱基组成的特点是碱基 G 和 C 含量较高。(2)配制号、号培养基的基本步骤是：d 称量a 溶化b 调 pHc灭菌。(3)使用高压蒸汽灭菌锅灭菌的过程中，拧紧固定盖子的螺栓时，注意要同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，以免漏气。(4)以淀粉为唯一碳源的培养基可用于筛选能产生淀粉酶的菌株，从功能上讲，该培养基属于选择培养基。待菌落长出后，应选

32、择透明圈大的菌落接种到号培养基，因为透明圈越大，说明菌落产生的淀粉酶的量及活性越大。利用平板划线法接种菌种时，第二次及以后的划线总是从上一次划线的末端开始。实验中过程的目的是进行扩大培养。(5)图 2 中 a 代表的固定工艺易导致酶失活，b 代表的固定13工艺易出现酶与承载物分离，而 c 代表的固定工艺在固定化处理时酶的活性不受损失，且在多次重复使用后仍能维持稳定的酶活性，故最好选择 c 工艺进行固定。6(2018南京、盐城三模)图甲是从土壤中筛选产纤维素酶细菌的过程，图乙是纤维素酶基因转录的 mRNA 部分序列，已知终止密码子为 UAA、UAG、UGA。请回答下列问题：(1)图甲中细菌培养基

33、和选择培养基成分上的主要区别是后者_。(2)土壤样品需稀释后振荡摇匀，用_准确吸取 0.1 mL 土壤悬液，滴加在培养基中，均匀涂布，将培养皿倒置后放在_中培养一段时间，获得细菌菌落。(3)在 5 个细菌培养基平板上，共接种稀释倍数为 105的土壤样品液 0.5 mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为 13、156、462、178 和 191，则每毫升土壤样品中的细菌数量为_个。(4)图中菌种若要长期保存，应该将其放在_条件下。若在保存过程中有一菌株因基因突变导致纤维素酶失活，突变后的基因转录形成的 mRNA 在图乙箭头处增加了 70 个核苷酸(无终止密码子)，使该酶的结构发生变化

34、(假设图中 271 位之前无终止密码子)，则该酶的氨基酸数量比原来多_个，假设氨基酸平均相对分子质量为 130，则突变后的蛋白质(两条肽链)分子量为_。答案 (1)以纤维素为唯一碳源 (2)移液管(或移液枪) 恒温箱 (3)1.7510 8 (4)冷冻 21 12 916解析 (1)图甲中选择培养的目的是筛选产纤维素酶细菌，因此，用于筛选的选择培养基应该以纤维素为唯一碳源，在这样的培养基上，能够产生纤维素酶的细菌可以分解利用纤维素而生长，而其他细菌不能生长。(2)准确吸取 0.1 mL 土壤悬液应使用移液管或移液枪。接种后应将培养皿倒置后放在恒温箱中培养一段时间，获得细菌菌落。(3)根据题意，

35、每个平板上接种的土壤样品液体积 0.1(mL)。挑选菌落数介于 30300 之间的平板用于0.55计数，则每个平板上的平均菌落数 175(个)，因此每毫升土壤样品中的156 178 1913细菌数量1750.110 51.7510 8(个)。(4)若要长期保存菌种，可以采用甘油管藏的方法在20 冷冻条件下保存。根据题意，突变前基因转录形成的 mRNA 上第一个终止密码子位于第 283285 位(UAA)，即突变前该酶的氨基酸数量为 282394(个)，突变后基14因转录形成的 mRNA 在图乙箭头处(即 273 位之后)增加的 70 个核苷酸和后面的碱基 AC 构成24 个密码子，并使 mRN

36、A 上第 346348 位出现终止密码子(UGA)，则突变后该酶的氨基酸数量3453115(个)，即增加的氨基酸数量1159421(个)。假设氨基酸平均相对分子量为 130，则突变后的蛋白质(两条肽链)分子量115130(1152)1812 916。7(2018无锡高三期末)血液作为一种常见的临床检测材料，如何从血液中快速、高效地分离和提取基因组 DNA 对于临床血液检验与分析非常重要。科研人员对比分析了超声波处理法(方法 A)、高盐法(方法 B)、改良高盐法(方法 C)等三种快速提取大鼠全血基因组 DNA的方法，实验过程如图，请分析回答问题：(1)多组实验数据发现，用大鼠全血为实验材料提取的

37、 DNA 含量总是很少，原因是_。(2)常规细胞破碎方法是_。三种方法实验所需时间均较短，主要在样品处理和细胞破碎环节进行了优化，就三种方法而言，细胞破碎较理想的为_。(3)方法 B 得到的溶液中 RNA 含量高于 DNA，分析原因是蛋白酶 K 的加入可能抑制了_的活性。(4)步骤中加入 NaCl 的目的是_，步骤中加入异丙醇的作用是_。(5)得到含 DNA 的溶液后进行鉴定，需向其中加入_，沸水浴加热，_后溶液变蓝。答案 (1)哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核和线粒体(2)加入蒸馏水，使细胞吸水涨破 方法 C (3)RNA 酶(4)溶解 DNA 使 DNA 析出 (5)二苯胺溶液 冷却解析 (

38、1)大鼠属于哺乳动物，其成熟红细胞中无细胞核和线粒体，因此用大鼠全血为实验材料提取的 DNA 含量很少。(2)破碎动物细胞常用的方法是加入蒸馏水，使细胞吸水涨破。与方法 A、B 相比，方法 C 通过剧烈振荡使细胞破碎更快、更彻底。(3)方法 B 得到的溶液中 RNA 含量高于 DNA 的原因可能是加入的蛋白酶 K 抑制了 RNA 酶的活性，使 RNA 分解受到15抑制。(4)DNA 可溶于 NaCl 溶液，步骤中加入 NaCl 的目的是溶解 DNA。DNA 不溶于异丙醇和无水乙醇，步骤和步骤中加入异丙醇和无水乙醇的作用都是使 DNA 析出。(5)可用二苯胺溶液鉴定 DNA，鉴定时需向含 DNA 的溶液中加入二苯胺溶液并沸水浴加热，冷却后溶液变蓝。